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脑室注射链脲佐菌素对大鼠海马神经元凋亡相关蛋白表达的影响
目的 观察App17肽对脑室注射链脲佐菌素的大鼠海马神经元凋亡相关蛋白表达的影响,探讨胰岛素信号转导通路障碍对神经元存活的作用.方法脑室注射链脲佐菌素(STZ)制作大鼠痴呆模型.3周后,皮下注射App17肽.4周后取脑组织做Bcl-2、Bax、CytoC免疫组织化学染色及Western blotting半定量分析.结果 模型组大鼠海马内Bax、CytoC阳性反应神经元细胞数目多,胞质深染,细胞计数与正常组及治疗组有显著性差异(P＜0.01);模型组大鼠海马内Bcl-2阳性细胞数目少,胞质染色淡,细胞计数与正常组及治疗组有显著性差异(P＜0.01).Western blotting半定量分析可见、Bcl-2、Bax、CytoC出现清晰的条带,组间可见较明显的差异(P＜0.01).结论 脑室注射STZ的大鼠海马内促进凋亡的Bax、CytoC表达增加;抑制凋亡的Bcl-2表达降低.App17肽可影响上述蛋白的表达,使之接近正常.胰岛素信号转导通路对神经元存活有一定作用.
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APP17肽对糖尿病KK小鼠海马神经元胰岛素信号转导途径的影响
目的 观察APP17肽对2型糖尿病KKAy小鼠(以下简称KK小鼠)大脑海马神经元胰岛素信号转导蛋白表达的影响.方法 根据血糖水平将KK小鼠分为正常对照组(C组)、糖尿病组(DM组)和APP17肽治疗组(DM+APP17P组).治疗组给予皮下注射APP17肽,每周3次,每次8 μg/kg,共12周.处死前尾静脉取血测定糖化血红蛋白、血糖含量;将3组小鼠处死,心脏取血测血浆胰岛素;冰浴中快速分离海马组织,匀浆后,用于免疫沉淀并蛋白印迹检测,部分快速灌注固定做免疫组化染色和Tunel细胞染色.结果 与C组相比,DM组与DM+APP17P组的血糖、糖化血红蛋白、胰岛素水平显著升高(P＜0.05),但是DM组与DM+APP17P组之间无显著差异;DM组海马神经元胰岛素受体(InsR),胰岛素受体底物-1(IRS-1)的表达低于C组和DM+APP17 P(P＜0.05);CREB、pCREB、Bcl-2的表达3组之间差异无统计学意义.Tunel细胞染色3组小鼠海马均未发现Tunel染色阳性细胞.结论 2型糖尿病KK小鼠存在海马胰岛素信号转导通路的异常,主要表现为P13-K上游起始途径的异常.这种异常可通过神经元一定程度上的自我调节而改善,并不导致细胞凋亡状态;APP17肽作为神经营养因子能激活海马神经元存活信号转导通路上游成分,从而使存活信号转导通路恢复正常.
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热量限制对 C57小鼠学习记忆能力及胰岛素信号通路相关蛋白的影响
目的：探讨热量限制(caloric restriction,CR)对 C57小鼠学习、记忆能力及胰岛素信号通路相关蛋白的影响。方法雄性 C57小鼠30只,采用数字表法随机分为3组：正常对照组(n=10)、高能量组(n=10)、低能量组(n=10)。6个月后通过 Morris水迷宫检测各组小鼠的学习、记忆能力,每组各抽取5只应用免疫组织化学染色的方法,测定小鼠脑内胰岛素信号转导通路相关蛋白：依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的组蛋白脱乙酰酶(silent mating type information regulation 2 homolog-1,SIRT1)、胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor 1,IGF-1)、胰岛素受体(insulin receptor,IR)、胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)、磷脂肌醇3激酶( phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶 B( protein kinase B,Akt/ PKB)、磷酸化应答原件结合蛋白(cAMP-response element binding protein,p-CREB)的表达。结果低能组小鼠的逃避潜伏期缩短,表明学习和记忆能力较前增高, SIRT1、IGF-1、IR、IRS-1、PI3K、Akt/ PKB、p-CREB 表达均明显降低(P<0.01)。结论热量饮食提高 C57小鼠的学习记忆能力,可能与降低小鼠脑内胰岛素信号通路相关蛋白的表达有关。
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覆盆子酮对HepG2细胞胰岛素信号转导通路中SHP-1和IRS-1表达的影响
目的 观察覆盆子酮对HepG2细胞糖消耗的影响及胰岛素信号转导通路中SHP-1和人胰岛素受体底物(IRS-1)表达的影响.方法 体外培养人肝癌HepG2细胞,采用MTT法检测细胞活力;葡萄糖氧化酶法检测细胞糖消耗;RT-PCR法检测蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-1的基因表达;Western-blot法检测IRS-1的表达量.结果 覆盆子酮可明显促进HepG2细胞对葡萄糖的消耗,明显降低HepG2细胞SHP-1 mRNA基因表达量,并能促进IRS-1蛋白表达量.结论 覆盆子酮可能通过影响胰岛素信号转导通路中IRS-1和SHP-1的表达发挥降糖作用.
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Alzheimer病胰岛素信号传导通路的研究
目的 探讨胰岛素信号传导通路相关蛋白变化在Alzheimer病发生发展中的作用.方法 1)体外原代培养Wistar胎鼠基底前脑胆碱能神经元并鉴定,以不同终浓度的纤维化Aβ1-40分别对原代培养的神经细胞进行干预,荧光显微镜观察细胞形态学变化,四甲基偶氮唑盐( MTT)法检测细胞活性,提取细胞总蛋白行免疫印迹(Western Blotting)检测神经元胰岛素信号转导通路相关蛋白的表达.2)用微量注射器在痴呆模型组大鼠侧脑室注射Aβ1-42寡聚体5μl,同样的方法于盐水(NS)组大鼠注射生理盐水5μl,正常组大鼠不做任何处理.2周后通过Y-进宫实验检测大鼠行为学改变并取海马组织进行免疫组化染色.结果 1)以2μmol/L、5μmol/L和1μmol/L三个终浓度纤维化Aβ1-40进行干预的胆碱能神经元,细胞形态学观察及MTT实验均显示神经元活性有下降趋势,且下降程度与纤维化Aβ-40浓度呈正相关.以μ5mol/L浓度的纤维化Aβ1-40对细胞进行不同时长(24h,48h,72h)干预后,细胞形态学观察及MTT实验均显示神经元活性的下降程度与纤维化Aβ1-40的干预时长呈正相关.2)以2μmol/L、5μmol/L和10μmol/L 3个终浓度纤维化Aβ1-40进行干预的胆碱能神经元,其胰岛素信号传导通路相关蛋白中,InsR(Insulin Receptor)、IRS-1[Insulin Receptor Substrate-IRS-1、Akt/PKB(serine/threonine protein kinase B)]及Bcl-2的表达减低,减低程度与纤维化Aβ1-40干预浓度呈正相关；以5mol/L终浓度的纤维化Aβ1-40对细胞进行不同时长(24h,48h,72h)干预后,InsR、IRS-1、Akt/PKB及Bcl-2表达的减低程度与纤维化Aβ1-40干预时长呈正相关.3)AD模型组大鼠海马区神经元InsR、IRS-1和Akt/PKB比对照组表达减低(P＜0.05),差异有统计学意义.结论 Aβ可引起神经元损害和学习记忆功能障碍,其主要机制可能是介导了海马神经元胰岛素信号转导通路功能异常.
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不同鼠龄在慢性间断性缺氧相关认知损害中的作用及机制探讨
目的 阐明不同鼠龄在慢性间断性缺氧相关认知损害中的作用及可能机制.方法 采用改良的IH鼠箱建立慢性IH小鼠模型,利用Morris水迷宫检测青年和老年IH小鼠的认知功能;通过氧疗的干预对比青年与老年小鼠认知损害及突触可塑性的改善程度,TUNEL法检测小鼠海马CA1区神经元凋亡情况,Western Blotting检测神经突触素、胰岛素信号通路蛋白[蛋白激酶B(Akt)、糖原合成激酶3β(GSK-3β)]的磷酸化表达水平变化.结果 老年小鼠IH组的逃避潜伏期长,其海马CA1区见明显增多的TUNEL染色阳性细胞,脑细胞凋亡率高(P<0.01),p-Akt、p-GSK3β表达水平显著降低(P<0.01),目标象限LD滞留时间与p-Akt、p-GSK3β均存在正相关.结论 老年使慢性间断性缺氧C57BL/6小鼠认知损害的易感性增加,可能的机制之一是调节胰岛素信号通路相关蛋白的表达异常.
