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PIWIL系列蛋白多克隆抗体制备、鉴定及组织分布
目的 制备PIWIL蛋白多克隆抗体,鉴定其特异性,初步探讨其在人类正常及肿瘤组织中的分布.方法 合成特异性PIWIL多肽,以马来酰胺活化匙孔血监蛋白(KLH)作为载体构建多肽免疫原,通过致敏大白兔,制备兔抗人PIWIL多克隆抗体,用亲和层析法纯化抗体.用ELISA和Western blot方法 进行抗体验证,应用人组织芯片进行PIWIL免疫组化研究.结果 通过构建系列PIWIL多肽-KLH载体复合物致敏大白兔,成功制备4个兔抗人PIWIL蛋白多克隆抗体,证实兔抗人PIWIL抗体可特异性识别PIWIL多肽,该抗体在大多数正常及肿瘤组织上皮来源细胞胞质中旱阳性染色.结论 成功制备系列兔抗人PIWIL多克隆抗体,为进一步研究PIWIL在miRNA/RNAi通路中的作用及在人类疾病中的意义提供了有利工具.
关键词： Argonaute蛋白 多克降抗体 组织芯片 -
Argonaute蛋白在染色质隔离子形成中的作用
RNA干扰(RNAi)是一保守的沉默机制,可以改变染色质结构发挥沉默效应.其中RISC(RNA-induced silencing complex)和miRNP(microRNA effector ribonucleoprotein)是RNA干扰和microRNA途径发挥沉默效应的关键,其核心成分是Argonaute蛋白.染色质隔离子是真核生物基因组表达基因与非表达基因的边界序列,能促进形成更高级核结构,所形成的DNA功能区可行使不同的转录调控作用.近研究证实Argonaute蛋白影响染色质隔离子的核结构并可能作为核结构的调节者影响基因表达的整体改变.
关键词： Argonaute蛋白 染色质隔离子 RNA干扰 基因表达调控 -
胃癌组织芯片中Argonaute蛋白表达分析
目的 检测胃癌Argonautel、Argonaute2、Argonaute3和Argonaute4蛋白表达,探讨其临床意义.方法 利用组织芯片技术结合免疫组化法检测100例胃癌组织和癌旁组织中Argonaute1、Argonaute2、Argonaute3和Argonaute4蛋白的表达.结果 胃癌组织中Argonautel、Argonaute2,Argonaute3和Argonaute4蛋白表达均显著高于癌旁组织(P＜0.05);Ⅱ～Ⅱ期胃癌中4种蛋白表达均显著高于癌旁组织(P＜0.05);Argonaute4蛋白在Ⅲ期胃癌中的表达显著高于Ⅰ～Ⅱ期胃癌(P＜0.05),Argonaute1、Argonaute2、Argonaute3蛋白在在Ⅰ～Ⅱ期胃癌与Ⅲ期胃癌间差异无统计学意义(P＞0.05).四种Argonaute蛋白的表达与胃癌患者的性别、年龄、淋巴结转移无相关性(P＞0.05).在胃癌组织中Argonautel、Argonaute2、Argonaute3和Argonaute4蛋白两两间表达存在相关性(P＜0.01).结论 胃癌的发生发展可能与Argonaute1、Argonaute2、Argonaute3和Argonaute4蛋白过表达有关.
关键词： 胃肿瘤 蛋白质阵列分析 Argonaute蛋白 -
Argonaute系列蛋白多克隆抗体制备和鉴定及组织定位
目的 制备一系列Argonaute(简称AGO)蛋白多克隆抗体,并鉴定其特异性,应用组织芯片初步探讨其在人类组织中的分布.方法 合成特异性AGO多肽,以马来酰胺活化匙孔血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)作为载体构建多肽免疫原,通过致敏大白兔,制备系列兔抗人AGO多克隆抗体,然后用亲和层析法纯化抗体.用ELISA和western方法进行抗体验证,并应用人组织芯片进行AGO的免疫组化研究.结果 通过构建系列AGO多肽-KLH载体复合物致敏大白兔,成功制备了3个兔抗人AGO蛋白多克隆抗体,经ELISA及Western blot证实兔抗人AGO抗体可特异性识别AGO多肽,在人组织芯片中通过免疫组化染色显示该抗体在部分肿瘤组织上皮来源细胞胞浆中呈阳性染色.结论 本项研究成功制备系列兔抗人AGO多克隆抗体,为进一步研究AGO在miRNA/RNAi通路中的作用及在人类疾病中的意义提供了有利工具.
关键词： Argonaute蛋白 多克隆抗体 组织芯片 -
PIWI和肿瘤
PIWI家族成员包含保守的PAZ和PIWI区域,在干细胞自我更新、精子发生、RNA干扰和翻译调控中扮演重要角色.近研究发现,一些PIWI在肿瘤中呈特异性表达,并与肿瘤的发生、发展相关.PIWI将有可能成为肿瘤诊断和预后判断的一个新的重要指标.研究PIWI表达调控机制,可探讨PIWI在肿瘤基因治疗方面的可行性.
关键词： Piwi Argonaute蛋白 肿瘤 基因治疗 -
循环miRNA在疾病诊断中的应用
微小RNA(miRNA)是指长度为18～24个核苷酸的内源性小分子非编码RNA,普遍存在于各种生物中,由RNA聚合酶Ⅱ转录后,形成RNA前体分子(pri-miRNA),在细胞核内经 RNA酶Ⅲ( Drosha)和双链RNA结合蛋白(Pasha)加工成长约70个核苷酸,具有茎环结构的miRNA前体(pre-miRNAs),pre-miRNAs经exportin5等蛋白转运到细胞质中,在另一个RNA酶Ⅲ(Dicer)剪切下形成约22个核苷酸的miRNA双链,其中一条为成熟的miRNA分子.成熟的miRNA分子在细胞内与Argonaute蛋白等形成RNA诱导的基因沉默复合体RISC(RNA induced silencing complex),并倾向于保留在miRISC复合体中,对靶基因进行负调控[1,2].
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Argonaute蛋白的结构与功能
Argonaute 蛋白是RNA 介导的转录后基因调控的关键蛋白.它为非编码小RNA 提供锚位点,达到降解靶基因或者抑制翻译的目的.Argonaute 蛋白广泛存在于真核生物中,在进化上高度保守.有关Argonaute蛋白的新研究进展主要集中在人源AGO蛋白的晶体结构解析以及在此基础上对于非编码小RNA转录后调控机制的进一步理解;翻译后修饰对Argonaute蛋白功能的调控及Argonaute蛋白的新功能,譬如Argonaute蛋白在基因转录和DNA损伤修复过程中所发挥的作用.文章主要就哺乳动物Argonaute蛋白的结构与功能研究新进展做一综述.
关键词： Argonaute蛋白 基因沉默 转录后调控 翻译后修饰 -
Argonaute蛋白家族在RNAi中的作用
RNA干扰是一种双链RNA诱导的基因沉默现象.Argonaute蛋白组成了一个高度保守的家族,该蛋白家族包括许多成员,它们组成了RNA诱导的沉默复合体的核心元件,是RNA干扰所必须的.Argonaute蛋白选择性地与miRNA和siRNA结合,并与Dicer酶相互作用,其PIWI盒子与Dicer的RNaseⅢ结构域直接相互作用,PIWI与Dicer之间的相互作用可能会促进miRNA/siRNA的释放.Argonaute蛋白很可能是RNA干扰中核酸内切酶活性的执行者.
关键词： RNA干扰 Argonaute蛋白 PIWI结构域 -
兔抗人PIWIL4蛋白多克隆抗体的制备和鉴定
目的 制备兔抗人PIWIL4的多克隆抗体,并鉴定其特异性,应用组织芯片初步探讨其在人类正常及肿瘤组织中的分布.方法 合成特异性PIWIL 4多肽,以马来酰胺活化匙孔血蓝蛋白(KLH)作为载体构建多肽免疫原,通过致敏大白兔, 制备兔抗人PIWIL4多克隆抗体,然后用亲和层析法纯化抗体.用ELISA和western方法进行抗体验证,并应用人组织芯片进行PIWIL4的免疫组化研究.结果 通过构建P IWIL4多肽-KLH载体复合物致敏大白兔,我们制备了兔抗人PIWIL4蛋白多克隆抗体,经ELIS A 及Western blot证实兔抗人PIWIL4抗体可特异性识别PIWIL4多肽,在人组织芯片中通过免疫组化染色显示该抗体在BU部分正常组织和肿瘤组织中呈阳性染色.结论 本项研究成功制备兔抗人PIWIL4多克隆抗体,为进一步研究PIWIL4在人类疾病中的意义提供了有利工具.
关键词： Argonaute蛋白 多克隆抗体 组织芯片 -
微小RNA调控靶基因作用机制的研究进展
微小RNA是一类通过转录后调控机制对基因进行调控的非编码的短链RNA.研究发现微小RNA的功能涉及多种生物学过程,与肿瘤的发生、发展和多种疾病密切相关.本文就微小RNA形成过程及对靶基因调控机制的研究进展作一综述.
关键词： 微小RNA RNA诱导沉默复合体 Argonaute蛋白 基因调控 P小体
