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Akt在Islet-1诱导间充质干细胞C3H10T1/2向心肌细胞特异分化过程中的作用
目的 研究Akt在Islet-1诱导间充质干细胞C3H10T1/2向心肌细胞特异分化过程的作用以及机制.方法 构建过表达Islet-1细胞模型;流式细胞计量术检测转染效率;CCK-8检测细胞增殖;Western blot检测Islet-1、cTnT和p-Akt/TA-kt蛋白表达;RT-qPCR检测心肌早期特异转录因子GA TA4、N xk2.5和Mef2c mRNA表达.结果 随着MK2-206(Akt抑制剂)浓度的增加,细胞增殖抑制率升高(P<0.05),对Akt活性的佳抑制浓度为8nmol L/;随着Islet-1诱导分化时间的延长,感染细胞的p-Akt/T-Akt蛋白表达降低(P<0.05),心肌特异转录因子GATA4、Nkx2.5和Mef2c基因的表达升高(P<0.05);而经MK-2206处理的感染细胞,GAT A4、Nk 2x.5和M fe2 c的复制在第1周时出现明显升高后又逐渐降低(P<0.05).结论 Akt在Islet-1诱导间充质干细胞C3 H10T1/2向心肌细胞特异分化过程中于不同分化阶段发挥着不同的调节作用.
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AKT抑制剂MK-2206对卵巢癌SKOV3细胞增殖凋亡的影响
目的 探讨MK-2206对卵巢癌SKOV3细胞增殖凋亡的影响及其作用机制.方法 MTT法检测MK-2206和顺铂单药及联合用药对SKOV3细胞增殖的影响,并计算半抑制浓度(IC50);FCM法检测MK-2206和顺铂单药及联合用药对SKOV3细胞凋亡的影响;Western-Blot法检测各组丝苏氨酸蛋白激酶(AKT)、雷帕霉素靶体蛋白(mTOR)及核糖体S6蛋白激酶(70S6K)蛋白的表达情况.结果 MK-2206和顺铂两单药均可抑制SKOV3的增殖,各浓度组具有统计学差异(P<0.05),联合用药时可显著降低顺铂半抑制浓度(P<0.05);同时两单药组可促进SKOV3细胞凋亡(P<0.05),联合用药时凋亡作用更显著(P<0.05);MK-2206和顺铂对SKOV3细胞中AKT、m-TOR及70S6K表达无明显影响,但可抑制p-AKT、p-mTOR及p-70S6K表达水平(P<0.05).结论 MK-2206可抑制SKOV3细胞的增殖,促进其凋亡,并可增强SKOV3细胞对顺铂敏感性,其可能与抑制AKT、mTOR及70S6K磷酸化水平有关.
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Akt抑制剂MK-2206对肝癌细胞huh7生物学行为的影响及机制
目的 探讨MK-2206作用于肝癌细胞huh7后对其生物学行为的影响及作用机制.方法 体外培养人肝癌细胞系huh7,采用不同浓度(0、2.5、5、10、20、40μmol/L) MK-2206干预huh7细胞.采用CCK-8检测细胞增殖变化;流式细胞术检测细胞凋亡的变化;蛋白免疫印迹法检测相关蛋白的表达.结果 与对照组(0 μmol/L)比较,MK-2206对肝癌细胞huh7的增殖活性有明显抑制作用,且呈剂量依赖性和时间依赖性(P＜0.05);MK-2206诱导huh7细胞凋亡(P＜0.05),显著抑制Akt的蛋白表达(P＜0.05).结论 Akt抑制剂MK-2206可通过调控PI3K/Akt信号通路来调控肝癌细胞huh7的生物学行为.
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Akt抑制剂的临床研究进展
随着十几个Akt小分子抑制剂先后进入临床研究,Akt已逐渐成为抗肿瘤药物研究的热门靶点.本文主要综述Akt蛋白的结构和功能,同时详细介绍一些已进入临床试验并且极具开发应用前景的小分子Akt抑制剂,如哌立福新、MK-2206、GSK2110183等,并对它们的临床前和临床研究情况进行阐述.
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青蒿琥酯对人源肝星状细胞中Akt/GSK-3β/β-catenin信号通路的影响研究
目的: 探讨青蒿琥酯(Art)对Akt/GSK-3β/β-catenin信号通路的影响.方法: 不同浓度(0,12.5,25,50 μg·ml-1)Art作用于人源肝星状细胞(LX-2),采用CCK-8法检测细胞增殖情况,并确定给药浓度;给予不同浓度Akt抑制药MK-2206 0~8 μmol·L-1,Western blot法确定其佳抑制浓度;给予Art、MK-2206、MK-2206+Art,采用Western blot法检测各组Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β、β-catenin蛋白表达情况.结果: CCK-8法检测细胞存活率,当选用25 μg·ml-1Art作用于LX-2细胞24h时细胞存活率约80%,Western blot法确定当MK-2206浓度为6 μmol·L-1时,可有效抑制p-Akt的表达;Art组(25 μg·ml-1)、MK-2206组(6 μmol·L-1)、MK-2206(6 μmol·L-1)+Art(25 μg·ml-1)组与对照组相比,Akt、p-Akt、p-GSK-3β、β-catenin蛋白表达均有显著差异(P＜0.05),MK-2206(6 μmol·L-1)+Art(25 μg·ml-1)组分别与Art(25 μg·ml-1)组、MK-2206(6 μmol·L-1)组比较,GSK-3β、Akt蛋白表达无显著差异(P＞0.05),p-Akt、p-GSK-3β、β-catenin蛋白表达显著降低(P＜0.01).结论: Art可通过Akt因子对Wnt/β-catenin信号通路中相关因子产生影响,进而抑制细胞增殖,缓解肝纤维发展进程.
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抑制自噬促进 MK－2206诱导 SGC－7901胃癌细胞发生 DNA 损伤
目的：探讨蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）抑制剂MK－2206对胃癌细胞SGC－7901DNA损伤的影响。方法：不同浓度的MK－2206作用于SGC－7901细胞后，免疫荧光检测细胞内DNA损伤标记分子磷酸化组蛋白H2AX（γ－H2AX）焦点的生成，Western blot检测DNA损伤相关蛋白的表达水平，同时观察MK－2206对自噬标志蛋白LC3－II表达量的影响，用以确定MK－2206是否促进细胞发生自噬。结果： MK－2206能够诱导SGC－7901细胞发生DNA损伤，促进细胞内γ－H2AX焦点生成，并且激活DNA损伤相关蛋白的表达；MK－2206作用细胞后，LC3－II的生成增加；抑制细胞的自噬显著增强了MK－2206诱导的H2AX磷酸化水平。结论： Akt抑制剂MK－2206能够诱导细胞发生DNA损伤和自噬，抑制自噬促进了MK－2206诱导的DNA损伤。
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MK-2206与顺铂协同抑制人三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞增殖的研究
目的 研究Akt抑制剂MK-2206对顺铂抗人三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞增殖的影响.方法 CCK-8法分析MK-2206对MDA-MB-468细胞的增殖抑制作用.Western blot检测MK-2206单独或联合顺铂对MDA-MB-468细胞内Akt磷酸化水平、凋亡相关基因Bax/Bcl-2及MDA-MB-468细胞质内细胞色素C蛋白表达水平的影响.Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡.使用Chou-Talalay中位效应与联合指数模型分析药物联合效应.结果 MK-2206对MDA-MB-468细胞增殖具有抑制作用,且呈剂量和时间依赖性,其24 h的半数抑制浓度(IC50)为11.23 μmol/L.过表达组活化的Akt能够将顺铂对MDA-MB-468细胞的24 hIC50从1.12 μmol/L提高到1.75 μmol/L,显著拮抗顺铂对MDA-MB-468细胞的增殖抑制效应.2μmol/LMK-2206可显著抑制MDA-MB-468细胞内Akt激酶活性,表现为Akt Thr308和Ser473磷酸化水平显著下降;顺铂处理不影响MDA-MB-468细胞内Akt磷酸化水平.单独使用2μmol/L MK-2206处理MDA-MB-468细胞24 h不能诱导MDA-MB-468细胞凋亡,2μmol/L MK-2206可促进顺铂诱导的MDA-MB-468细胞内细胞色素C从线粒体向细胞质的转移和上调Bax基因表达、下调Bcl-2基因表达,显著促进细胞凋亡发生.结论 MK-2206与顺铂产生药物协同效应抑制MDA-MB-468细胞增殖,并促进顺铂诱导的MDA-MB-468细胞凋亡.
关键词： AKT抑制剂 MK-2206 顺铂 三阴性乳腺癌 MDA-MB-468细胞
