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基于PPARα基因为靶序列的RNA干涉作用
目的利用RNAi技术研究PPARα基因表达对骨骼肌脂代谢相关基因的表达的影响.方法设计合成针对过氧化物酶体增殖蛋白激活性受体α(PPARα)的dsRNA并将其转染到鼠骨骼肌C2C12细胞中,用RT-PCR测定PPARα及其应激基因mRNA水平的变化.结果dsRNA浓度的升高和PPARα mRNA水平的降低之间存在剂量线性关系.PPARα应激基因(包括乙酰辅酶A氧化酶:AGO;长链脂酞辅酶A合成酶:LCAS;脂蛋白脂肪酶:LPL;LDL受体)mRNA水平也随之降低,进一步证明PPARα RNAi可以特异性的降低PPARα mRNA水平.然而PPARγ和PPARδmRNA水平不受影响,而且PPARα RNAi不能降低GAPDH mRNA和18s rRNA水平,说明PPARα RNAi并不诱导一般mRNA的降解.结论PPARα RNAi能够特异性的降低骨骼肌细胞中PPARα及其应激基因的mRNA水平.
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+Gz重复暴露大鼠脑应激基因表达谱的cDNA微阵列研究
目的用cDNA微阵列技术研究+Gz重复暴露大鼠脑应激基因表达谱,探讨+Gz引起脑损伤的分子机制.方法 Wistar大鼠随机分成对照组和+Gz重复处理组,对照组大鼠G值为+1 Gz, 实验组大鼠在动物离心机上经历了3次+10 Gz/1 min(两次间隔30 min)作用,于暴露后6 h处死大鼠取脑.分别从+Gz处理组和对照组大鼠脑中提取总RNA,用α-32P dATP逆转录标记作为探针.将合成的2种cDNA探针分别与具有207个濡激基因的cDNA微阵列杂交,灰度扫描后分析两者表达谱差异.结果有15个应激基因在+Gz处理组表达升高.结论 +Gz重复暴露可引起脑组织中多个基因表达变化,这些基因的表达变化是脑损伤在基因水平上的表现,而cDAN微阵列是一种筛选差异表达基因的快速有效方法.
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核因子-κB与创伤性脑水肿治疗策略
近年研究证明,脑外伤是在原发伤基础上继发性生化级联反应带来的严重后果.主要有以下几个理论:(1)兴奋毒性理论,即创伤后兴奋性氨基酸(EAAs)增多,EAAs神经毒性被认为是许多神经疾病的终共同通路.(2)信号传导理论,①细胞内信号传导,如Ca2+超载、cAMP/cGMP降低、激酶类活性增高、细胞蛋白酶类下降、应激基因与早期反应基因增加;②细胞外信号传导,如细胞因子、黏附分子、一氧化氮、自由基、生长因子等的变化.
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不同应激原诱导肝癌SMMC-7721细胞应激反应中相关基因的筛选
目的 筛选体外培养的肝癌SMMC-7721细胞在抵御不同应激原而恶性增殖的过程中,与应激反应密切相关的基因.方法 常规体外培养肝癌SMMC-7721细胞,将处于对数生长期的细胞分为正常组、G418组和氯化钙组,除正常组外,其余两组分别采用G418、氯化钙加以干预,于72和4h后收集各组肝癌细胞,抽提总RNA,使用GeneAtlas基因芯片系统,制作Affymetrix Human Gene 1.1 ST Array Strip表达谱芯片,采用iterPlier法计算基因表达读数计算值,并进行统计学处理,观察与肝癌细胞应激反应相关的基因群的差异性表达特征,通过qRT-PCR检测各基因的相对表达量,对芯片结果加以验证.结果 芯片检测筛选到53个表达量大、且在G418和氯化钙作用下表达量变化较一致的基因;qRT-PCR验证的53个应激相关基因中,17个基因与基因芯片结果完全吻合.结论 在肝癌SMMC-7721细胞抵御G418和氯化钙应激的过程中,作用较关键且在基因芯片和qRT-PCR检测中变化趋势较一致的应激相关基因共有17个.
