首页 > 文献资料
-
Transwell模拟生物屏障
Transwell,即穿透小室,既是一种试验装置,也是一种试验技术.Transwell可用于生物屏障的建立、细胞共培养、细胞趋化、细胞迁移和细胞侵袭等多方面的研究.在模拟生物屏障方面,研究较多较成熟的有血脑屏障、肠黏膜屏障、血视网膜屏障、胎盘屏障和腹透屏障.本文将分别对上述五种屏障的建立进行阐述.
-
CM-Dil标记大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性探讨
背景：目前已有部分实验采用CM-Dil标记间充质干细胞开展体内外实验，取得良好成果。
目的：观察CM-Dil标记大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性及其定向迁移能力。
方法：分离培养大鼠骨髓间充质干细胞，通过流式细胞技术分析其特异性细胞表面标记抗原(CD29， CD44，CD11b，CD45)的表达。用CM-Dil标记大鼠骨髓间充质干细胞，继续培养细胞，观察细胞的形态及增殖情况，及传代后荧光的强度与持久性。采用Transwell小室进行标记后大鼠骨髓间充质干细胞向mdx鼠腓肠肌匀浆液的迁移实验。
结果与结论：所培养细胞均一性好，均表达CD29和CD44，不表达CD11b和CD45，符合骨髓间充质干细胞的特点。经CM-Dil标记后对大鼠骨髓间充质干细胞的形态、增殖无明显影响，传代后仍可保持荧光强度，但随传代有所减弱。标记前后大鼠骨髓间充质干细胞的迁移能力无显著性差异(P>0.05)。结果说明，CM-Dil标记过程安全、简单、高效，对大鼠骨髓间充质干细胞的形态、增殖及迁移能力无明显影响，体外细胞传代后仍可保持荧光，是大鼠骨髓间充质干细胞标记与示踪的理想试剂。 -
脂肪间充质干细胞对J774.1细胞的免疫调控
背景：近期研究发现脂肪间充质干细胞针对T细胞、B细胞和树突状细胞均有抑制免疫反应的能力，但对于其是否可以对巨噬细胞起到相应的免疫调控能力还不清楚。
目的：观察脂肪间充质干细胞与J774.1细胞共培养后白细胞介素6和肿瘤坏死因子α的表达。
方法：将脂肪间充质干细胞按照2×107/孔分别接种于transwel 的上层小室和24孔板中，再利用含1 mg/L脂多糖的培养液重悬J774.1细胞，将J774.1细胞接种到含脂肪间充质干细胞的transwel 下层小室和24孔板中，同时设立未激活J774.1细胞阴性对照组和脂多糖激活J774.1阳性对照组。培养48 h收集细胞样，提取RNA样本，荧光定量PCR法检测白细胞介素6、肿瘤坏死因子αmRNA 水平。
结果与结论：相对于单纯脂多糖激活的阳性对照组J774.1细胞，脂肪间充质干细胞与J774.1细胞的接触型混合培养可以明显降低J774.1细胞的白细胞介素6和肿瘤坏死因子α的表达量，而非接触共培养组中，只有白细胞介素6 mRNA 水平发生了明显的降低。以上结果表明脂肪间充质干细胞具有抑制脂多糖激活 J774.1细胞的免疫反应的能力。 -
大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞系RLE-6TN诱导脂肪间充质干细胞体外分化
背景:研究表明,骨髓间充质干细胞具有在体外分化为肺泡上皮细胞的可能性,但至今未见脂肪间充质干细胞与肺泡上皮细胞通过长时间Transwel共培养,诱导脂肪间充质干细胞分化的相关报道.目的:观察大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞系RLE-6TN诱导大鼠脂肪间充质干细胞分化为肺泡Ⅱ型上皮细胞的可行性.方法:取3只SPF级健康雌性SD大鼠作为供体,分离、提取、培养、鉴定脂肪间充质干细胞.实验分2组:实验组(脂肪间充质干细胞与大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞系RLE-6TN进行Transwel共培养)和对照组(脂肪间充质干细胞单独培养).共培养第21天,倒置显微镜观察各组脂肪间充质干细胞的形态变化,对脂肪间充质干细胞进行SP-C免疫荧光染色,荧光显微镜下观察蛋白表达并拍照,采用Image pro plus 6.0软件分析荧光表达的积分吸光度值.结果与结论:①共培养21 d,实验组的脂肪间充质干细胞形态由长梭形、成纤维细胞样,逐渐转化为卵圆形、多边形,对照组脂肪间充质干细胞形态保持成纤维细胞样;②荧光显微镜下观察,实验组脂肪间充质干细胞可见红色荧光表达,对照组无红色荧光表达,实验组的荧光表达较对照组增强(P<0.05);③结果表明,大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞系RLE-6TN能够在长时间(21 d)共培养条件下,诱导脂肪间充质干细胞分化为肺泡上皮细胞.
-
乳腺癌细胞株中MKK4的表达及其对细胞转移的影响和机理研究
目的:观察乳腺癌细胞株中MKK4蛋白的表达水平,研究MKK4蛋白表达对乳腺癌细胞运动能力及EMT标志物的影响,确定MKK4在肿瘤细胞EMT转化及肿瘤转移中的作用,为肿瘤转移机制研究提供一定的基础资料,为肿瘤防治奠定一定的理论基础.方法:通过体外细胞培养技术收集系列乳腺癌细胞株的培养裂解液,利用Western blot技术检测细胞培养裂解液中MKK4及EMT标志物的表达水平,构建MKK4表达水平与细胞转移能力的对应图；采用siRNA技术,干扰MKK4高表达乳腺癌细胞株MKK4的表达,Western blot技术观察MKK4低表达后,EMT标忠物的变化,同时,构建MKK4质粒,转染MKK4低表达乳腺癌细胞株,Western blot技术观察MKK4高表达后,EMT标志物的变化.并采用MTT法、Transwell、划痕法观察MKK4高表达后细胞增殖、运动、迁移等能力的变化.结果:乳腺癌细胞株中MKK4蛋白的表达水平与乳腺癌细胞运动能力有一定的相关性,并与EMT标志物的表达具有相关性,MKK4蛋白表达越高,细胞运动能力越差.干扰或转染技术影响乳腺癌细胞株中MKK4的表达后,细胞EMT标志物的表达也相应变化,乳腺癌细胞株中MKK4高表达后,其细胞增殖明显抑制,运动迁移能力也相应下降.结论:乳腺癌细胞中MKK4蛋白的表达水平与乳腺癌细胞EMT转化及运动能力有一定的相关性,MKK4蛋白表达越高,细胞运动能力越差.
