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养阴益气活血方对干燥综合征NOD小鼠血清及颌下腺Th1/Th2免疫平衡的影响
目的 观察养阴益气活血方对干燥综合征(Sjogren′s Syndrome,SS)非肥胖型糖尿病(non-obese diabetic,NOD)小鼠血清及颌下腺干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、IL-2、IL-4、IL-10的表达及Th1/Th2免疫平衡的影响,探讨其作用机制.方法 32只NOD小鼠随机分为模型组、中药组[养阴益气活血方煎剂,0.4 mL(100 g/kg)]、西药组[羟氯喹0.4 mL(60 mg/kg)]、联合组[养阴益气活血方煎剂(50 g/kg)+羟氯喹(60 mg/kg)0.4 mL],每组8只,8只Balb/C小鼠作为正常对照(正常组).实验进行8周后取血,摘取小鼠颌下腺组织,采用ELISA法检测小鼠血清IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10水平,SP法检测颌下腺组织IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10蛋白的表达.结果 模型组小鼠血清和颌下腺组织IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10水平明显高于正常组(P <0.05).中药组和联合组血清IFN-γ、IL-10水平均低于西药组(P <0.05).联合组颌下腺IFN-γ、IL-2表达低于西药组(P <0.05).模型组血清和颌下腺IFN-γ/IL-4比值均高于其他各组(P <0.05),且中药组和联合组IFN-γ/IL-4比值接近正常组.结论 养阴益气活血方能降低SS NOD小鼠血清和颌下腺Th1、Th2相关细胞因子的水平,下调血清和颌下腺IFN-γ/IL-4比值.养阴益气活血方可能通过调节SS小鼠Th1/Th2免疫平衡达到治疗作用.
关键词： 干燥综合征 非肥胖型糖尿病小鼠 养阴益气活血方 Th1/Th2免疫平衡 -
人GLP-1(7-36)酰胺对非肥胖型糖尿病小鼠胰岛β细胞凋亡的影响
目的 探讨人胰高糖素样肽1(GLP-1)对非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠胰岛β细胞凋亡的影响.方法 GLP-1治疗组小鼠用微型渗透泵皮下持续泵入人GLP-1,对照组小鼠泵入生理盐水,4周后将其胰腺组织做HE染色、TUNEL/胰岛素双重免疫荧光染色,显微镜下观察小鼠胰岛炎的变化及胰岛β细胞的凋亡情况.结果 与对照组相比,GLP-1治疗组小鼠胰岛单核细胞浸润明显减轻,胰岛炎评分明显下降(P＜0.001).在对照组小鼠胰腺组织切片中观察到较多凋亡β细胞,而在GLP-1治疗组却很少见到.GLP-1治疗组小鼠胰岛β细胞凋亡率与对照组小鼠相比明显下降(0.07±0.01％ vs0.26±0.02％,P＜0.001).结论 人GLP-1持续刺激NOD小鼠后,可使1型糖尿病小鼠胰岛炎减轻并抑制β细胞凋亡.
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人GLP-1(7-36)酰胺对非肥胖型糖尿病小鼠胰岛炎的影响
目的 通过观察人胰高糖素样肽1(GLP-1)刺激后非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠胰岛组织形态学的变化,研究GLP-1对NOD 1型糖尿病小鼠胰岛炎的影响.方法 GLP -1治疗组小鼠用微型渗透泵皮下持续泵入人GLP -1,对照组小鼠泵入生理盐水,4周后将其胰腺组织做HE染色、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Br-dU)/胰岛素双重免疫染色及导管细胞角蛋白(DCK)/胰岛素双重免疫荧光染色,观察小鼠胰岛炎的变化及胰岛β细胞的复制和胰腺导管上皮β细胞的新生.结果 与对照组相比,GLP -1治疗组NOD小鼠胰岛单核细胞浸润明显减轻,胰岛炎评分明显下降(P＜0.001).GLP -1治疗组胰岛可见较多BrdU阳性的β细胞和胰岛素阳性的导管上皮细胞,而在对照组几乎看不到.结论 人GLP -1持续刺激NOD小鼠后,可使1型糖尿病小鼠胰岛炎减轻并促进β细胞再生.
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硫酸羟氯喹治疗NOD小鼠干燥综合征疗效及对IL-1β和TNF-α产生的影响
目的 观察免疫抑制剂硫酸羟氯喹对非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠干燥综合征的疗效及其对白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α产生的影响.方法 8周龄雌性NOD小鼠20只,随机分为两组,每组10只,9周龄时开始给药.羟氯喹(HCQ)组动物给予硫酸羟氯喹溶液0.4 ml灌胃,对照组给予蒸馏水0.4 ml灌胃.定期观察每组的唾液流率.小鼠在15周末和20周末分别取左、右侧颌下腺组织,并断尾取血.用苏木素-伊红(HE)染色评价颌下腺组织的病理学改变.用免疫组织化学检查评价IL-1β和TNF-α在颌下腺组织的蛋白质表达情况.用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定颌下腺组织中IL-1β和TNF-α的mRNA含量.用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测外周血血清IL-1β和TNF-α的含量.结果 HCQ组与对照组相比,唾液流率明显增加,颌下腺组织淋巴细胞浸润程度明显减轻,IL-1β和TNF-α的蛋白质表达显著降低,IL-1β mRNA和TNF-α mRNA的表达明显下降,外周血血清的IL-1β和TNF-α含量明显降低.结论 硫酸羟氯喹对NOD小鼠干燥综合征疗效显著,其作用机制可能与其明显下调NOD小鼠颌下腺中IL-1β和TNF-α的基因表达及蛋白质表达有关.
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不同剂量谷氨酸脱羧酶对非肥胖型糖尿病小鼠发生1型糖尿病的影响
目的不同剂量谷氨酸脱羧酶(GAD)对非肥胖型糖尿病小鼠(NOD)糖尿病免疫干预效果的影响.方法将3周龄40只体重(10.0±0.9)g雌性NOD小鼠分为4组分别腹腔注射GAD 0.3 mU和不完全弗氏佐剂(IFA)50 μL、GAD 3 mU+IFA 50 μL、GAD 0.03 mU+IFA 50 μL、IFA 50 μL.8周龄时注射环磷酰胺200 mg/kg加速糖尿病,定期检测血糖,眼内眦取血分离血清检测细胞因子白细胞介素(IL)-4和干扰素(IFN-γ)的变化,动态观察各组糖尿病发生发展的过程.28周时,全部处死,取脾、胸腺作淋巴细胞亚群测定,胰腺作病理组织学观察.结果 GAD 3 mU+IFA 50 μL组小鼠无一只发生糖尿病,28周时血糖为(5.0+1.1)mmol/L;胰岛个数多(8.2+2.3)个/张(P＜0.01),胰岛炎评分低(0.33+0.12)(P＜0.01);血清中IL-4的水平高为(80+6)ng/L(P＜0.01),IFN-γ水平低为(327±48)ng/L;CD8+/CD4+比值大(P＜0.01),在脾脏中为0.524±0.133,胸腺中为0.428±0.021.结论 NOD小鼠在3周龄时腹腔注射CAD 3 mU+IFA 50 μL混合物比其他剂量组免疫调节效果好,较好地通过调节胸腺,脾淋巴细胞亚群分类,并通过淋巴细胞分泌Th1类因子和Th2类因子来调节Th0细胞的转化,从而抑制NOD小鼠胰岛炎,胰岛β细胞破坏减少,GAD 3 mU剂量组免疫干预NOD小鼠糖尿病的发生效果好.
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白细胞介素10基因对未发病非肥胖型糖尿病小鼠肝脏胰-十二指肠同源盒1表达的影响
背景：研究发现肝脏细胞在给予转入胰-十二指肠同源盒1基因后可合成胰岛素，抗CD20单克隆抗体可抑制产胰岛素的肝脏细胞发生自身免疫反应，但机制尚不明确。目的：了解腺病毒介导的小鼠白细胞介素10(Adenovirus vector-mediated murine interleukin，Ad-mIL-10)及抗CD20单克隆抗体联合干预未发病非肥胖糖尿病模型小鼠，对其肝脏细胞以及肝脏胰-十二指肠同源盒1表达的影响。方法：3-5周龄雌性未发病非肥胖糖尿病模型小鼠40只，随机分为抗CD20单克隆抗体组、抗CD20单克隆抗体+白细胞介素10组、白细胞介素10组和对照组，分别于第1，8，15，21天尾静脉注射抗CD20单克隆抗体、抗CD20单克隆抗体+ Ad-mIL-10、Ad-mIL-10和生理盐水。结果与结论：12周后，与对照组相比，经抗CD20单克隆抗体和/或白细胞介素10治疗的未发病非肥胖糖尿病模型小鼠血糖水平明显降低，而血清和肝脏中胰岛素、白细胞介素10和CD20表达明显增加，同时肝脏中胰-十二指肠同源盒1表达水平增加；且经抗CD20单克隆抗体和白细胞介素10联合对上述指标的影响高于单独应用；但无论是联合干预还是单独干预均对小鼠肝脏炎症病变无明显影响。证实 CD20单抗及白细胞介素10基因联合干预为促使非肥胖糖尿病模型小鼠肝脏胰-十二指肠同源盒1表达机制之一。
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B10细胞与非肥胖型糖尿病小鼠自身免疫性糖尿病发生的关系研究
目的：研究B10细胞与非肥胖型糖尿病小鼠自身免疫性糖尿病发生的关系。方法：选择20只6周龄NOD/LT雌性小鼠进行常规培养至30周龄，根据小鼠血糖、血肌酐和体重情况将小鼠分为自身免疫性糖尿病未发生组和发生组。利用酶联吸附反应检测两组小鼠脾脏组织中IL-10水平。利用流式细胞分选术检测两组小鼠脾脏组织汇总B10细胞比例。将40只6周龄NOD/LT雌性小鼠分为对照组和B10组，B10组小鼠接种分离得到的B10细胞，每周一次，对照组接种同等体积生理盐水，分别于第10、15、20、25、30周龄时检测小鼠自身免疫性糖尿病发生情况。结果：发生组小鼠血糖和血肌酐水平显著高于未发生组（P<0．05)，体重水平显著低于未发生组（P<0．05)。发生组小鼠脾脏组织中IL-10水平显著高于未发生组。自身免疫性糖尿病发生组小鼠脾脏组织中B10细胞含量显著高于未发生组。当小鼠处于第10、15周龄时，B10组小鼠中自身免疫性糖尿病发生率显著低于对照组，但第20、25、30周时，B10组小鼠中自身免疫性糖尿病发生率显著高于对照组。结论：B10细胞的过度积累，可能是进一步诱发NOD小鼠自身免疫性糖尿病发生的原因之一。
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山奈酚对非肥胖型糖尿病小鼠的治疗作用
目的:观察山奈酚(KA)对非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠的治疗效果,并探讨其作用机制.方法:选取血糖≥11.1mnmo1·L-1N0D小鼠,连续灌胃低剂量(50mg·kg-1)和高剂量(200mg·kg-1)KA10周,于治疗前和治疗后均采用血糖仪检测血糖变化,酶联免疫吸附(ELISA)法检测谷氨酸脱羧酶-65抗体(GAD-65Ab)阳性率、γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素10(IL-10)的变化水平.结果:未经治疗的NOD小鼠血糖随着鼠龄的增高明显上升;经KA治疗10周后,血糖明显下降,并接近正常值(≤11.1 mmo1·L-1).治疗前,NOD小鼠GAD-65Ab阳性率为100%,血清中IFN-γ含量高.而IL-10含量低;治疗后,GAD-65Ab转阴率明显上升,IFN-γ含量显著下降,IL-10含量显著上升(P＜0.05,P＜0.01),并以200mg·kg-1KA治疗佳.结论:KA可明显降低NOD小鼠血糖值,其作用机制可能是通过下调GAD-65Ab及平衡1型和2型T辅助细胞亚群(Th1/Th2),从而抑制自身反应性免疫应答.
关键词： 山奈酚 非肥胖型糖尿病小鼠 谷氨酸脱羧酶-65抗体 Th1/Th2亚群 -
人GLP-1(7-36)酰胺促进非肥胖型糖尿病小鼠胰腺导管上皮细胞分化
目的 探讨人胰高糖素样肽1(GLP-1)对非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠胰腺导管上皮细胞分化与增殖的影响.方法 GLP-1治疗组小鼠用微型渗透泵皮下持续泵入人GLP-1,对照组小鼠泵入生理盐水,4周后将其胰腺组织分别做导管细胞角蛋白(DCK)/胰岛素双重免疫荧光染色、胰腺十二指肠同源异型盒基因(PDX-1)/胰岛素双重免疫荧光染色及5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)/DCK双重免疫染色,显微镜下观察胰腺导管上皮细胞的分化和增殖.结果 在GLP-1治疗组胰腺导管上皮中可见较多胰岛素阳性细胞及PDX-1/胰岛素双阳性细胞,而在对照组几乎看不到；GLP-1治疗组小鼠BrdU阳性的导管上皮细胞的百分数与对照组小鼠相比明显增高(P ＜0.001).结论 人GLP-1持续刺激NOD小鼠后,可促进胰腺导管上皮细胞分化与增殖.
