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大蒜素及联合CPT-11对人结肠癌LoVo细胞的杀伤作用
目的:探讨大蒜素对人结肠癌LoVo细胞增殖的影响及其与CPT-11联合使用时的化疗增敏作用.方法:不同浓度的大蒜素作用于体外培养的LoVo细胞,采用MTT法检测大蒜素对LoVo细胞增殖抑制能力;Annexin V-FITC标记流式细胞术检测大蒜素对LoVo细胞的凋亡抑制率;流式细胞术检测大蒜素对LoVo细胞周期影响;4.0,8.0 mg·L~(-1)大蒜素联合CPT-11使用,观察CPT-11抗肿瘤活性的改变.结果:大蒜素可抑制LoVo细胞增殖,具有明显量效和时间依赖性,24,48,72 h IC_(50)分别为32.23,10.74,6.58 mg·L~(-1),大蒜素能够诱导LoVo细胞凋亡,作用24 h细胞凋亡随着大蒜素浓度增高而增高,作用48h凋亡作用峰值质量浓度为8 mg·L~(-1),大蒜素作用LoVo细胞24 h,质量浓度低于4 mg·L~(-1)时细胞周期被阻滞于G_2/M;而高于4 mg·L~(-1)时细胞周期被阻滞于C_2/M和G_1期,4.0,8.0 mg·L~(-1)大蒜素预处理24 h后,CPT-11作用LoVo细胞24 h IC50分别由单独使用的47.5 mg·L~(-1)下降为7.4,7.2 mg·L~(-1),使CPT-11杀伤肿瘤效率分别提高6.4,6.6倍.结论:大蒜素能够诱导LoVo细胞凋亡,阻滞细胞周期,抑制细胞增殖;低剂量大蒜素与CPT-11联合使用具有协同抗肿瘤作用.
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全反式维甲酸对结肠癌Lovo细胞VEGF及其受体表达的影响
目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)对结肠癌Lovo细胞血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体的影响,为其临床应用提供理论依据.方法 MTT法观察不同浓度ATRA对结肠癌Lovo细胞株生长的抑制作用以及对外源性VEGF刺激Lovo细胞生长的抑制作用.流式细胞仪分析ATRA作用后Lovo细胞周期变化以及细胞凋亡情况.ELISA法检测ATRA作用前后细胞培养上清液中VEGF含量变化.流式细胞仪测定Lovo细胞VEGF受体表达.结果 ATRA对Lovo细胞的生长具有抑制作用,呈时间与剂量依赖性.外源性VEGF165能刺激Lovo细胞生长,ATRA能够抑制VEGF165对细胞生长的刺激作用.随ATRA作用浓度增加,细胞周期G0/G1期细胞比例从(60.10±1.27)%增加至(84.80±1.40)%;细胞凋亡率增加至(39.79±3.96)%.ATRA能抑制Lovo细胞表达VEGF及VEGF受体,呈时间与剂量依赖性.结论 ATRA具有抑制结肠癌Lovo细胞株VEGF及其受体表达的作用,抑制肿瘤细胞的生长,可能机制为阻断VEGF自分泌及旁分泌,与促进肿瘤细胞凋亡及阻滞细胞周期有关.
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LoVo细胞系中结肠癌干细胞样细胞的分离、培养及鉴定
目的:从结肠癌LoVo细胞系中分离、鉴定具有CD44+/EPCAMhigh特异表型的结肠癌干细胞样细胞,观察其生物学行为,证实该细胞系中结肠癌干细胞样细胞的存在.方法:从普通血清培养的LoVo细胞系中以流式细胞仪分选具有CD44+/EPCAMhigh表型的细胞,接种于添加生长因子的无血清培养基中,观察其增殖过程,继而诱导分化.MTT法、流式细胞术检测CD44+/EPCAMhigh、EPCAMlow和未分选LoVo细胞的增殖能力及细胞周期分布.3种细胞接种裸鼠,比较不同细胞的成瘤率;免疫荧光技术检测小鼠次代CD44+/EPCAMhigh细胞中 CD44/EPCAM的表达.结果:LoVo细胞中有17.4%的CD44+/EPCAMhigh细胞,并能在添加生长因子的无血清培养基中呈细胞球样生长,且可连续传代;在血清的诱导下,呈贴壁分化生长,其形态与未分选LoVo细胞无差别.CD44+/EPCAMhigh细胞增殖能力高于EPCAMlow细胞及未分选LoVo细胞,且细胞周期多集中在G0/G1期.以500个CD44+/EPCAMhigh细胞接种裸鼠成瘤率为90%(9/10),而1×104个EPCAMlow细胞成瘤率为0(0/10).小鼠移植瘤中次代CD44+/EPCAMhigh细胞仍能少量表达CD44和EPCAM.结论:LoVo细胞中存在CD44+/EPCAMhigh结肠癌干细胞样细胞,CD44+/EPCAMhigh可用于结肠癌肿瘤干细胞的深入研究.
关键词： 结肠癌 LoVo细胞株 肿瘤干细胞 干细胞样细胞 CD44/EPCAM -
锌-α2-糖蛋白对结直肠癌细胞株LoVo生物学行为的影响
目的:初步探讨锌-α2-糖蛋白(ZAG)对结直肠癌细胞LoVo的生物学行为的影响.方法:构建和应用ZAG过表达质粒pGCMV/EGFP/Neo/ZAG转染结直肠癌细胞LoVo,免疫组化检测ZAG的表达变化,MTT法检测转染前后细胞增殖能力的变化以及细胞的克隆形成能力和侵袭力的改变.结果:过表达质粒pGCMV/EGFP/Neo/ZAG可成功诱导结直肠癌细胞LoVo表达ZAG,同时其细胞增殖力受到抑制、克隆形成率降低以及细胞的侵袭能力明显降低.结论:结直肠癌细胞LoVo的生物学行为的改变可能与ZAG的过表达相关,其在结直肠癌的发生发展过程发挥抑癌的生物学效应.
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As2O3引起LoVo细胞内钙离子浓度增高及意义
目的观察LoVo细胞株经As2O3作用后细胞内钙离子浓度的改变并探讨其意义.方法应用流式细胞仪观察亚二倍体细胞峰并检测LoVo细胞内的钙离子浓度.应用光镜、电镜观察As2O3对LoVo细胞生长的抑制作用、凋亡细胞形态和线粒体形态.结果①As2O3引起细胞内Ca2+浓度升高(P＜0.01),呈剂量依赖关系(P＜0.01或0.05),在2.0 μmol/L组Ca2+浓度高;②在各时间段,对照组的Ca2+浓度无变化(P＞0.05),而经As2O3作用后Ca2+浓度出现变化(P＜0.01或0.05),在20min时Ca2+浓度均已增高,10 h时增高明显,至24h,0.5μmol/L Ca2+浓度回复到20min时的水平,1.0和2.0μmol/L组则低于20min时的浓度;③As2O3抑制LoVo细胞生长;④LoVo细胞经As2O3作用后在光镜、电镜下出现细胞凋亡的形态学改变,并见线粒体肿大、嵴破坏或消失.流式细胞仪检测发现高浓度组凋亡细胞数高于对照组和低浓度组(P＜0.01或0.05).结论As2O3作用于LoVo细胞引起细胞内钙离子浓度增高,可能通过引起线粒体功能的改变而诱导细胞凋亡.
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反义DLC-1基因对结直肠癌LoVo细胞增殖和细胞周期的影响
目的 应用核糖核酸干扰(RNAi)技术,通过对大肠癌细胞株LoVo中DLC-1基因mRNA表达的抑制,初步探讨DLC-1基因对大肠癌细胞株的生物学行为影响.方法 构建DCL-1的RNAi重组体pGCsiDLC,转染大肠癌LoVo细胞株.采用RT-PCR观察转染前后细胞株中DLC-1 mRNA以及 Bax、Bcl-2基因表达的改变,MTT比色法检测转染前后细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期.结果 成功构建发卡siRNA真核表达载体pGCsiDLC;pGCsiDLC转染LoVo细胞后,电泳显示DLC-1 mRNA表达水平明显下降;LoVo细胞生长曲线增长幅度亦随时间的增加而逐渐增高,在48h为明显,RNAi组细胞比脂质体组及空白对照组细胞增殖明显增高(P＜0.05);干扰后的LoVo细胞株G0/G1期发生阻滞,而G2/M 期细胞数量分布减少.而Bax和bcl-2基因表达在干扰前后未见明显改变.结论 成功构建载体介导的DLC-1靶向RNAi重组体可有效抑制LoVo细胞DLC-1 mRNA表达;DLC-1基因可抑制结直肠癌细胞增殖并且对细胞周期重新分布,其可能与结直肠癌的发生发展有一定关系,可能是一个新的抑癌基因.
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草分枝杆菌制剂对人结肠癌细胞周期动力学的调控
目的:探讨草分枝杆菌制剂对人结肠癌细胞周期动力学的影响. 方法:以不同浓度的草分枝杆菌制剂(商品名乌体林斯,Utilin S)体外处理人结肠癌细胞株Lovo,48 h后以流式细胞仪检测细胞周期动力学指标的变化.结果:4种不同浓度的药物均能调控Lovo细胞的细胞周期,使G0～G1期细胞数率非常显著地上升(P<0.01),G2～M期细胞数率显著地上升(P<0.05),同时使S期细胞数率非常显著地下降(P<0.01). 结论:乌体林斯能直接抑制结肠癌细胞株Lovo增殖,并可能通过G2～M期细胞阻滞而促进Lovo癌细胞凋亡的发生.
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Serrin B和Nodosin对HL60、SGC7901、LOVO、U87、AGZY细胞株的毒性作用
目的 探讨天然药物Serrin B和Nodosin对人早幼粒白血病细胞株HL60、人胃腺癌细胞株SGC7901、人结肠癌细胞株LOVO、人胶质瘤细胞株U87、人肺腺癌细胞株AGZY的毒性作用.方法 将对数期生长的HL60、SGC7901、LOVO、U87、AGZY细胞株接种于96孔板中,细胞贴壁后,分别加入Serrin B或Nodosin,使药物的终浓度分别为0.00、1.25、2.50、5.00、10.00、20.00μmol·L-1,24 h后用四甲基偶氮唑盐法检测细胞株的死亡率.结果 Serrin B对HL60、SGC7901、LOVO、U87和AGZY细胞株均有较强的毒性作用(P＜0.01),且其毒性作用呈现剂量-效应关系.Nodosin对HL60、SGC7901、LOVO、U87细胞株具有较强的毒性作用(P＜0.05,P＜0.01),而对AGZY细胞株无明显毒性作用.结论 Serrin B和Nodosin是中药溪黄草抗癌作用的有效成分,为人类多种肿瘤治疗的新药研究开发提供新的思路.
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阿托伐他汀对人结肠癌LoVo细胞增殖及凋亡的影响
目的 观察阿托伐他汀对人结肠癌细胞株(LoVo)细胞增殖及凋亡的影响,探讨其机制.方法 用不同浓度的阿托伐他汀培养基处理人结肠癌LoVo细胞,分为3组:低剂量组(20 μmol/L)、中剂量组(60 μmol/L)、高剂量组(100 μmol/L).采用噻唑蓝(MTT)比色法检测阿托伐他汀对人结肠癌LoVo细胞增殖的抑制率;采用流式细胞仪检测阿托伐他汀对人结肠癌LoVo细胞的凋亡率;采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测人结肠癌LoVo细胞中B细胞淋巴瘤/白血病.2 (bcl-2) mRNA的表达.结果 阿托伐他汀能够显著抑制LoVo细胞的增殖,促进其凋亡,并且此作用随着阿托伐他汀浓度的增加而增强[(30.40±1.28)％、(51.48±1.20)％、(69.14±1.42)％;(5.95±0.13)％、(20.38±0.33)％、(29.87±0.32)％],阿托伐他汀还能够下调bcl-2基因的表达.结论 阿托伐他汀能够诱导人结肠癌LoVo细胞的凋亡,这可能与其下调bcl-2基因的表达有关.
关键词： 阿托伐他汀 B细胞淋巴瘤/白血病-2 LoVo细胞株 脱噬作用 -
抗人NRP-1单克隆抗体对结肠癌LOVO细胞株的促凋亡作用
目的:研究抗人神经菌毛素1 (neuropilin 1,NRP-1)单克隆抗体对结肠癌LOVO细胞的促凋亡作用.方法:小鼠腹水法制备抗NRP-1单克隆抗体(NRP-1 MAb)并用rProtein A亲和柱纯化,间接ELISA检测抗体的滴度水平.细胞免疫荧光检测NRP-1蛋白在结肠癌细胞株LOVO上的表达,MTT法检测NRP-1 MAb对LOVO的生长抑制作用,DAPI荧光显微镜法观察细胞凋亡形态,ANNEXIN V-FITC/PI流式细胞仪法检测NRP-1 MAb诱导LOVO细胞凋亡,Western blotting检测凋亡相关蛋白caspase-3、cleaved caspase-3蛋白的表达.结果:SDS-PAGE和间接ELISA检测纯化的NRP-1 MAb纯度为95％、效价为2.56×10-5;细胞免疫荧光染色显示NRP-1定位于LOVO细胞膜;MTT法检测和ANNEXIN V-FITC/PI流式细胞仪法检测结果显示,NRP-1 MAb对LOVO细胞有生长抑制作用和促凋亡作用;DAPI染色·荧光显微镜观察发现,NRP-1MAb可以诱导LOVO细胞核浓缩与碎裂;Western blotting检测到在NRP-1 MAb作用下,LOVO细胞裂解液cleavedcaspase-3条带信号增强、caspase-3条带信号减弱.结论:纯化的NRP1 MAb能抑制LOVO细胞的生长并诱导其凋亡.
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腺病毒介导的Bcl-XL shRNA对结肠癌细胞的体外抗肿瘤性
目的 研究腺病毒介导的BcI-XL shRNA对结肠癌细胞株的体外抗肿瘤性.方法 将已有的Bcl-xl腺病毒进行扩增纯化,并通过反转录反应分析该腺病毒在mRNA水平对Bcl-XL的表达调控.通过MTT检测及克隆形成实验,了解该腺病毒对结直肠癌细胞株(Lovo细胞株)的体外杀伤作用.结果 Ad/Bcl-XL shRNA作用于Lovo细胞株导致Bcl-XL mRNA表达水平下降.与对照腺病毒Ad/GFP相比,Ad/Bcl-XL shRNA显著抑制Lovo细胞的增长(P＜0.05),且该抑制效应呈剂量和时间依赖性；显著抑制Lovo细胞的克隆形成(P＜0.05),且该抑制效应呈剂量依赖性.而Ad/Bcl-XL shRNA对正常人成纤维细胞(NHFB)无明显杀伤作用.结论 腺病毒介导的Bcl-XL shRNA对Lovo细胞株具有杀伤作用,可能存在潜在的结肠癌治疗价值.
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伊立替康联合热疗抑制人大肠癌细胞LOVO体外增殖作用的研究
目的:探讨伊立替康联合热疗体外抑制人大肠癌细胞增殖的效果.以确定联合方案是否具有协同效应.方法:使用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定单独或联合应用伊立替康与热疗对人大肠癌LOVO细胞体外增殖的抑制作用,使用流式细胞仪检测不同方案对LOVO细胞凋亡率的影响.根据Veleriote法判断热化疗联合的作用效果;透射电镜观察细胞形态.结果:与伊立替康化疗或单纯热疗作用相比.伊立替康与43℃热疗联合后对LOVO细胞增殖有显著的抑制作用(P＜0.01),24 h时流式细胞仪检测LOVO细胞的凋亡情况发现.热疗组、化疗组和热化疗组细胞凋亡率均较对照组显著升高(P＜0.01).结论:伊立替康与热疗联合对LOVO细胞的增殖抑制具有明显的协同作用,这可能与细胞凋亡的增多有关.
