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魟鱼软骨多糖对Lewis肺癌MMP-9表达的影响
目的:魟鱼软骨多糖(RCG)对Lewis肺癌基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的影响.方法:建立小鼠Lewis肺癌模型,将动物分为生理盐水组、不同剂量魟鱼软骨多糖组、环磷酰胺组,观察肿瘤生长情况,绘制肿瘤生长曲线,计算原发瘤抑制率;采用RT-PCR和Western blot检测瘤组织MMP-9基因和蛋白表达.结果:该多糖各剂量组小鼠的肿瘤生长曲线平缓,小鼠原发瘤抑制率、肺转移数与生理盐水组比较差异有显著性(P＜0.05;P＜0.01);与生理盐水比较,魟鱼软骨多糖各剂量组,MMP-9 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P＜0.01).结论:魟鱼软骨多糖明显抑制小鼠Lewis肺癌原发瘤的生长和转移,可能与其抑制肿瘤MMP-9基因和蛋白表达有关.
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魟鱼软骨多糖的分离纯化及生物活性的研究
目的 研究魟鱼软骨多糖(ray cartilage glycosaminoglycans,RCG)的提取、分离与纯化方法,并初步探讨其生物活性.方法 采用盐酸胍提取、丙酮分级沉淀、膜超滤、Sephadex凝胶柱色谱分离、纯化获得(魟)鱼软骨多糖,由HPLC确定其相对分子质量和质量分数;建立Lewis肺癌小鼠模型,将实验分为生理盐水(Saline)组、不同剂量(500、250、125 mg/kg)魟鱼软骨多糖组、环磷酰胺(CTX.60 mg/kg)组,观察小鼠肿瘤生长情况,绘制肿瘤生长曲线,计算原发瘤与肺转移灶数抑瘤率,免疫组织化学染色计数肿瘤组织微血管密度(MVD),采用RT-PCR检测瘤组织血管内皮生长因子(VEGF)基因表达.结果 经HPLC检测,该组分为单一多糖,其质量分数达99%以上.生物活性检测结果表明,与生理盐水组比较,该多糖各剂量组小鼠的肿瘤生长曲线平缓,原发瘤抑瘤率、肺转移灶数与生理盐水组比较差异显著(P＜0.05、0.01);与生理盐水组比较,魟鱼软骨多糖各剂量组MVD显著减少、VEGF mRNA表达水平显著降低(P＜0.01).结论 魟鱼软骨多糖明显抑制小鼠Lewis肺癌原发瘤的生长和转移,并可抑制肿瘤的血管形成.
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魟鱼软骨多糖对小鼠G422胶质瘤血管形成的影响
目的:观察魟鱼软骨多糖对小鼠G422胶质瘤血管形成及瘤组织VEGF mRNA和蛋白表达的影响.方法:建立小鼠G422胶质瘤腋下肿瘤模型,将实验分为生理盐水(Saline)组、不同剂量魟鱼软骨多糖(RCG)组、环磷酰胺(CTX)组,观察肿瘤生长情况,绘制肿瘤生长曲线,CD31免疫组织化学染色计数肿瘤组织微血管密度(Microvessel density,MVD),采用RT-PCR和Western blot技术检测瘤组织血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA和蛋白表达.结果:魟鱼软骨多糖各剂量组小鼠的肿瘤生长曲线平缓,MVD显著减少,VEGF mRNA和蛋白表达水平显著降低(P＜0.01).结论:魟鱼软骨多糖明显抑制小鼠G422胶质瘤的生长,抑制肿瘤的血管形成,可能与其下调肿瘤VEGF mRNA和蛋白表达有关.
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魟鱼软骨多糖对小鼠Lewis肺癌的作用及分子机制探讨
目的:研究魟鱼软骨多糖(RCG)对小鼠Lewis肺癌的作用,并初步探讨其作用机制.方法:建立小鼠Lewis肺癌模型,将实验分为生理盐水(Saline)组、不同剂量魟鱼软骨多糖(RCG)组、环磷酰胺(CTX)组,计算原发瘤抑制率及肺转移数;采用RT-PCR和Western blot检测原发瘤组织VEGF、bFGF mRNA和蛋白表达.结果:应用魟鱼软骨多糖各剂量组,小鼠原发瘤抑制率、肺转移数与生理盐水组比较差异有显著性(P＜0.05,P＜0.01);与生理盐水比较,魟鱼软骨多糖各剂量组,VEGF、bFGF mRNA和蛋白表达水平显著降低(P＜0.01).结论:魟鱼软骨多糖明显抑制小鼠Lewis肺癌原发瘤的生长和转移,可能与其抑制肿瘤VEGF、bFGF mRNA和蛋白表达有关.
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魟鱼软骨多糖对Lewis肺癌VEGF MMP-2和MMP-9蛋白表达的影响
目的探讨魟鱼软骨多糖(RCG)对Lewis肺癌血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达的影响.方法:接种Lewis肺癌细胞,复制肺癌移植瘤模型;将实验分为生理盐水(Saline)组、不同剂量魟鱼软骨多糖(RCG)组、环磷酰胺(CTX)组,给药后观察肿瘤生长情况,计算肿瘤抑制率和肺转移瘤灶数目;采用Western blot检测瘤组织中VEGF、MMP-2和MMP-9的蛋白表达.结果:与生理盐水组比较,魟鱼软骨多糖各剂量组对肿瘤的抑制率和肺转移数都具有显著性差异(P＜0.05;P＜0.01);与生理盐水比较,该多糖各剂量组对VEGF、MMP-2和MMP-9的蛋白表达水平显著降低(P＜0.01).结论:魟鱼软骨多糖明显抑制小鼠Lewis肺癌原发瘤的生长和转移,可能与其抑制肿瘤VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白的表达有关.
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应用魟鱼软骨多糖滴眼液抗大鼠角膜新生血管形成的实验研究
目的:探讨魟鱼软骨多糖(Ray Cartilage Glycosaminoglycans,RCG)滴眼液对大鼠角膜新生血管(Corneal neovascularization,CNV)的作用.方法:制备魟鱼软骨多糖滴眼液,缝线诱导大鼠角膜新生血管,将实验分为生理盐水(Saline)组、不同剂量魟鱼软骨多糖(RCG)组、肝素+可的松(Heparin+corlin)组,通过计算新生血管面积、病理组织学观察、免疫组化检测评价应用魟鱼软骨多糖滴眼液对大鼠角膜新生血管的作用.结果:与生理盐水组比较,应用魟鱼软骨多糖滴眼液各组新生血管面积明显减少,有显著性差异(P＜0.01),同时角膜组织炎性细胞数和VEGF表达也明显减少.结论:应用魟鱼软骨多糖滴眼液抑制了大鼠角膜新生血管形成,可能与魟鱼软骨多糖能够缓解缝线刺激炎症,减少VEGF表达有关.
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计数观察鱼软骨多糖对小鼠黑色素瘤中血管生成拟态的时空变化及对CD31的影响
以往的研究对血管生成拟态(VM)随时间和空间变化规律有了一定的认识[1-2],但对它与内皮依赖性血管之间的关系和二者的演变过程没有进行深入细致的研究,尤其是在加入魟鱼软骨多糖(RCG)的条件下,对VM的研究少之又少.目前,我国在魟鱼生理活性物质的研究方面取得了一定进展,从魟鱼软骨中提取、分离出具有抗肿瘤活性成分.本实验通过建立C57小鼠黑色素瘤模型,观察RCG对黑色素移植瘤的时空变化的影响及影响其变化的细胞因子CD31的表达情况,发现RCG可抑制B16黑色素瘤的血管生成,且可能通过降低肿瘤细胞分泌细胞因子来抑制肿瘤细胞对血管内皮细胞增殖和迁移的促进作用,从而达到抑制肿瘤新生血管形成的作用.
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魟鱼软骨多糖眼用纳米乳的质量评价
目的 建立魟鱼软骨多糖眼用纳米乳的质量评价方法及纳米乳中多糖的含量测定方法.方法 制备魟鱼软骨多糖纳米乳,观测纳米乳的栽药量、外观形状、pH值、粒径等指标,采用硫酸-咔唑法测定纳米乳中多糖的含量,检测波长为529.0 nm.结果 纳米乳平均粒径为51 mm,澄清度、稳定性良好,无眼刺激性.在8.024～40.120mg/L浓度,A=0.0129c+0.008,r=0.999 9,方法平均回收率为100.2%,RSD为0.92%;纳米乳载药量为50.03g/L.结论 魟鱼软骨多糖眼用纳米乳制剂质量稳定,符合<中国药典>(2005版)关于眼用制剂的标准;硫酸-咔唑法测定多糖含量简单、快速、准确,可用于控制纳米乳制剂质量.
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pH敏感型魟鱼软骨多糖眼用原位凝胶兔眼药动学及其抑制角膜新生血管的研究
目的:制备pH敏感型魟鱼软骨多糖眼用原位凝胶剂(RCG凝胶)并考察其兔眼药动学和抑制角膜新生血管作用.方法:以卡波姆940和HPMC(1∶4,w/w)为辅料制得pH敏感型原位凝胶.取健康家兔30只,向兔眼中滴入50 μL RCG凝胶,分别于给药10,30,60,120,180min后处死家兔,收集兔眼玻璃体、房水、角膜和虹膜,并测定药物含量.取家兔20只,建立角膜新生血管模型并随机分为4组,分别给予生理盐水,25,50,100mg·mL-1 RCG凝胶.观察给药后第3,6,9,12天新生血管面积及角膜病理切片.结果:魟鱼软骨多糖在玻璃体、房水、角膜和虹膜的药动学均符合二室模型,在玻璃体、房水、角膜和虹膜中的Gmax分别为(1.35±0.41),(9.31±0.39),(27.78±0.32),(15.97±0.13) μg·mL-1;AUC0-180分别为(80.54±9.65),(571.91±18.32),(1 763.72±48.66),(1 034.55±33.87) μg·mL-1·min.对照组、低、中、高剂量组在第12天的新生血管面积分别为(30.00±3.45),(24.31±3.12),(5.36±1.24),(4.89±1.09) mm2.角膜病理切片中,对照组和低剂量组中有大量炎性细胞浸润,新生血管较多;而中剂量和高剂量组中角膜中炎性细胞和新生血管明显较少.结论:制备了一种pH敏感型魟鱼软骨多糖眼用原位凝胶,该凝胶给药后在角膜部位具有大的药物浓度,其给药剂量高于50mg·mL-1时,具有显著的抑制新生血管生成的作用,该原位凝胶剂具有较好的临床应用价值.
关键词： 魟鱼软骨多糖 pH敏感型眼用原位凝胶剂 药动学 方法学 角膜新生血管 -
魟鱼软骨多糖抗血管形成的实验研究
目的:探讨魟鱼软骨多糖(RCG)对血管形成的作用.方法:原代培养人脐静脉内皮细胞,采用MTT法检测不同浓度RCG对人脐静脉内皮细胞增殖的影响;缝线诱导大鼠角膜新生血管,通过计算新生血管面积评价不同浓度RCG对大鼠角膜新生血管的作用;建立小鼠Lewis肺癌模型,观察不同浓度RCG作用后肿瘤生长情况,计算原发瘤抑制率,免疫组织化学染色计数肿瘤组织微血管密度(MVD).结果:RCG可明显抑制人脐静脉内皮细胞的体外增殖,IC50为62.93 mg·mL-1;与生理盐水组比较,应用不同浓度RCG后新生血管面积明显减少(P＜0.01),原发瘤抑制率呈浓度依赖性,MVD值降低(P＜0.01).结论:RCG对实验动物具有良好的抗血管生成活性.
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魟鱼软骨多糖对小鼠黑色素瘤上皮细胞激酶表达的影响
目的:研究魟鱼软骨多糖(RCG)对小鼠黑色素瘤中上皮细胞激酶(EphA2)表达的影响.方法:将培养的黑色素瘤细胞接种于C57BL/6小鼠右侧腋下部位,复制小鼠黑色素瘤模型.实验分为模型(等容生理盐水)、环磷酰胺(CTX,60 mg/kg)与RCG高、中、低剂量(700、300、100 mg/kg)组,观察肿瘤生长情况,计算抑瘤率；采用Western blot法检测EphA2蛋白的表达,采用RT-PCR法检测EphA2基因的表达.结果:与模型组比较,RCG高、中、低剂量组小鼠瘤质量显著减轻,抑瘤率显著升高(P＜ 0.01)；EphA2蛋白表达显著减弱(P＜0.01),EphA2基因表达显著减弱(P＜0.01).结论:RCG抑制小鼠黑色素瘤的生长可能与其减少肿瘤中EphA2表达有关.
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魟鱼软骨多糖对小鼠黑色素移植瘤VEGF表达的影响
目的:研究魟鱼软骨多糖(RCG)对小鼠恶性黑色素移植瘤血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法:每只小鼠右腋皮下接种细胞以复制黑色素瘤模型,将实验分为模型(灌胃,等容生理盐水)、环磷酰胺(CTX,腹腔注射,60 mg/kg)与RCG高、中、低剂量(灌胃,500、250、125 mg/kg)组,CTX组每周给药1次,其余组每天给药1次,连续21d.观察肿瘤生长情况,计算瘤质量、抑瘤率；采用RT-PCR法和Western blot法检测黑色素瘤组织VEGFmRNA和蛋白表达.结果:与模型组比较,RCG高、中、低剂量组瘤质量显著减少,抑瘤率显著升高(P＜0.01)；RCG高、中、低剂量组VEGF mRNA和蛋白表达水平显著降低(P＜0.01).结论:RCG可明显抑制小鼠黑色素瘤原发瘤的生长,可能与其抑制肿瘤的VEGFmRNA表达和蛋白表达有关.
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魟鱼软骨多糖对小鼠恶性黑色素移植瘤MMP-9表达的影响
目的:研究魟鱼软骨多糖(RCG)对小鼠恶性黑色素移植瘤基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响.方法:体外培养黑色素瘤细胞(B16),接种B16细胞于C57BL/6小鼠右侧腋下部位,复制小鼠黑色素瘤模型.实验分为生理盐水(等容生理盐水)、环磷酰胺(CTX,60 mg· kg-1)和魟鱼软骨多糖高、中、低剂量(700、300、100 mg·kg-1组,灌胃给药,每天1次,连续21d.观察肿瘤生长情况,计算原发瘤抑制率；采用Westem blot方法检测肿瘤组织中MMP-9的蛋白表达情况；采用RT-PCR方法检测MMP-9的基因表达情况.结果:与生理盐水组比较,魟鱼软骨多糖高、中、低剂量组小鼠原发瘤抑制率显著升高(P＜0.01)；魟鱼软骨多糖高、中、低剂量组MMP-9蛋白表达、基因表达显著降低(P＜0.01).结论:魟鱼软骨多糖能明显抑制小鼠黑色素瘤原发瘤的生长,可能与其抑制肿瘤MMP-9的蛋白表达和MMP-9 mRNA的表达有关.
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魟鱼软骨多糖对小鼠恶性黑色素移植瘤血管生成拟态及PI3K表达的影响
目的:探讨魟鱼软骨多糖(Ray cartilage glycosaminoglycans,RCG)对小鼠恶性黑色素瘤模型中肿瘤和血管生成拟态的抑制作用及对肿瘤组织中磷脂酰肌醇3-激酶蛋白(PI3K)表达水平的影响.方法:将体外培养的B16小鼠黑色素瘤细胞接种于C.BL/6小鼠右腋下部复制肿瘤模型,将40只SPF级小鼠随机分为空白对照组(生理盐水)、环磷酰胺(CTX,60 mg/kg)组与魟鱼软骨多糖(600、300、150 mg/kg)组,观察肿瘤生长情况,计算抑瘤率;采用CD31/PAS双重染色检测魟鱼软骨多糖对肿瘤血管生成拟态计数的影响,Western Blot法测定PI3K表达变化,RT-PCR法测定PI3K基因的表达变化.结果:与空白对照组相比较,魟鱼软骨多糖的不同剂量组都对小鼠黑色素瘤的瘤重具有一定的抑制作用,且600mg/kg剂量的魟鱼软骨多糖明显,CD31/PAS双重染色结果显示600mg/kg魟鱼软骨多糖组对血管生成生成拟态有较强的的抑制作用,Western Blot和RT-PCR结果表明随着魟鱼软骨多糖药物浓度的升高,PI3K蛋白表达水平逐渐明显降低,基因表达水平逐步明显降低,其中600mg/kg魟鱼软骨多糖组抑制作用强.结论:魟鱼软骨多糖具有影响小鼠黑色素移植瘤和血管生成拟态生成的作用,并且可能与降低PI3K蛋白的表达有关.
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魟鱼软骨多糖对小鼠恶性黑色素瘤的抑制作用及对Laminin5γ2、HIF-α表达的影响
目的:研究虹鱼软骨多糖对小鼠黑色素瘤的抑制作用及对Laminin-5γ2、HIF-α表达的影响.方法:体外培养B16小鼠黑色素瘤细胞,MTT法测定魟鱼软骨多糖不同剂量组对黑色素瘤细胞与基质之间粘附的影响,将培养的B16细胞悬液接种于C57BL/6小鼠右侧腋下部位,建立肿瘤模型.将实验分为空白对照组、虹鱼软骨多糖高、中、低剂量(700mg/kg、300mg/kg、100mg/kg)组、环磷酰胺(60mg/kg)组,观察肿瘤生长情况并计算原发瘤抑制率;采用Western blot方法检测Laminin-5 γ2、HIF-α蛋白的表达,采用RT-PCR方法检测Laminin-5γ2mRNA、HIF-α mRNA的表达.结果:应用魟鱼软骨多糖100、20、4、0.8mg/L,黑色素瘤细胞于基质间的粘附受到抑制,分别为16.67％、11.90％、9.52％、7.14％.小鼠原发瘤抑制率与空白对照租比较有显著性差异,魟鱼软骨多糖100、300、700mg/kg和环磷酰胺组抑癌率分别为14.77％,31.48％,44.55％;与空白对照组比较,魟鱼软骨多糖各剂量组随着药物浓度的升高,Laminin-5γ2、HIF-α蛋白表达受到抑制,Laminin-5y2、HIF-α的基因表达显著降低.结论:魟鱼软骨多糖能够在一定程度上抑制小鼠黑色素瘤移植瘤的生长,可能与其减少肿瘤中Laminin-5γ2、HIF-α蛋白表达有关,Laminin-5y2、HIF-α有望成为抗癌治疗的新靶点.
关键词： 魟鱼软骨多糖 恶性黑色素移植瘤 Lamminin-5γ2 HIF-α VM
