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复方通络救脑促进神经细胞突触可塑性
目的:检测中药复方通络救脑及其主要成分三七总皂苷和京尼平苷对神经突触可塑性有无促进作用.方法:实验分为对照组和给药组,采取细胞活力检测法,即CCK-8检测法检测药物对稳转的过表达的瑞典型突变淀粉前体蛋白(swAPP)突变的人神经母细胞瘤(SY5Y)细胞的增殖曲线的影响；通过Western blotting检测药物对于神经细胞突触相关蛋白树突棘肌动蛋白结合蛋白(drebrin)和突触后密度蛋白-95(PSD-95)的表达的变化；用神经生长因子(NGF)诱导PC12细胞长出神经突起后,检测药物对于细胞突起的作用.结果:复方通络救脑及其主要组成成分京尼平苷和三七总皂苷不影响过表达的瑞典型突变淀粉样前体蛋白的神经母细胞瘤(swAPP-SY5Y)的细胞增殖曲线,且复方通络救脑中京尼平苷能够显著增加swAPP-SY5Y细胞drebrin和PSD-95的表达(P＜0.01),显著增加PC12细胞总突起数(P＜0.01)；而三七总皂苷没有相应的作用.结论:复方通络救脑能促进神经细胞的突触可塑性,初步断定起主要作用的成分是京尼平苷而不是三七总皂苷.
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突触内与突触外NMDA受体在β-淀粉样蛋白减少海马神经元突触后密度蛋白-95表达中的作用
目的 研究可溶性Aβ寡聚体在海马神经元中对突触蛋白表达的影响.方法 用免疫细胞化学方法检测在NMDA拮抗剂与激动剂作用下,Aβ25～35对突触后密度蛋白(PSD-95)表达的影响.结果 Aβ25～35引起的PSD-95减少具有时间、剂量依赖性.PSD-95的减少可被非特异性NMDA受体拮抗剂(MK801)缓解;突触外NMDA受体被阻断时,也可显著缓解;而在突触内NMDA受体被阻断时,无显著性改变.结论 Aβ引起的PSD-95减少依赖NMDA受体活性,突触外NMDA受体可能参与Aβ诱导突触蛋白降解.
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视神经损伤后突触后密度蛋白-95在大鼠视网膜中的分布及表达研究
目的 研究视神经损伤后突触后密度蛋白-95(PSD -95)在神经损伤后SD大鼠视网膜中的定位及表达的变化.方法 采用钳夹法制作SD大鼠视神经损伤模型.分别于损伤后1d、3d、5d、7d及14 d摘除眼球,以正常大鼠视网膜为对照,应用免疫组织化学方法和Western blot法检测视神经损伤后PSD - 95蛋白水平表达变化；免疫荧光双标技术检测PSD - 95的细胞定位情况.结果 在正常对照组中,视网膜外丛状层有大量的PSD -95存在.视神经损伤后,PSD - 95在视网膜中的表达显著减少,损伤后1d,PSD -95在视网膜外层表达量低,在损伤后7 d PSD- 95的表达恢复正常水平并维持到损伤后14 d.免疫荧光双标染色结果显示视神经损伤后1 d PSD - 95与视杆细胞的标记物rhodopsin共定位减少,损伤后7d部分恢复.结论 视神经钳夹伤导致了视网膜PSD -95表达量的减少和分布的改变,可能是视网膜神经元损伤后自我保护的一种反应.
关键词： 突触后密度蛋白-95 视神经损伤 视网膜 -
加减薯蓣丸对血管性痴呆大鼠海马突触再生和可塑性影响的研究
[目的]探讨加减薯蓣丸(Modified Dioscorea Pills,MDP)对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠学习记忆功能及海马突触再生与突触可塑性的影响.[方法]40只SD大鼠按照随机数字表分为手术组28只及假手术组12只.手术组采用改良双血管阻断(2-vessels occlusion,2-VO)法建立VD模型,术后按随机数字表再分为药物组12只、模型组11只,假手术组仅分离颈总动脉,不结扎.药物组用MDP浓缩汤剂(10g/kg.d)灌胃45d,模型组和假手术组以0.9％氯化钠溶液灌胃,剂量、疗程同药物组.采用水迷宫行为学实验评价各组大鼠智能差异,免疫组化测定海马CA1区突触素(synaptophysin,SYP)、突触后密度蛋白-95(postsynaptic density protein-95,PSD-95)及微管相关蛋白-2(microtubule associated protein-2,MAP-2)表达;透射电镜观察突触超微结构的改变.[结果]与模型组比较,药物组大鼠水迷宫行为学表现明显改善;药物组大鼠海马CA1区SYP、PSD-95、MAP-2蛋白表达明显升高,与模型组及假手术组比较均有统计学差异(P＜0.01);电镜下可见模型组大鼠海马CA1区突触间隙模糊,突触前后膜肿胀、空化,难以区分突触前后膜;突触小泡减少,线粒体固缩,内质网脱颗粒.药物组突触数量丰富,结构基本完整,线粒体正常、突触小泡较为丰富.[结论] MDP通过上调突触相关蛋白的表达保护缺血条件下的神经突触,并增强突触可塑性,促进突触再生,从而改善突触的信息传递,是其治疗VD取得临床良效的机制之一.
关键词： 加减薯蓣丸 血管性痴呆 突触素 突触后密度蛋白-95 微管相关蛋白-2 -
突触后密度蛋白-95在大鼠坐骨神经损伤后的表达
为了探讨突触后密度蛋白-95(PSD-95)在周围神经损伤过程中的表达变化,本实验建立大鼠坐骨神经夹伤模型,采用荧光定量PCR(real-time PCR)和Western blotting对PSD-95 mRNA及其蛋白水平进行定量检测,应用免疫荧光双标技术观察PSD-95与神经型一氧化氮合酶(nNOS)的共定位情况.结果显示,PSD-95 mRNA及其蛋白在正常坐骨神经中度表达,损伤后迅速下降;PSD-95 mRNA从损伤后2 d开始表达上调;而其蛋白水平于损伤后1周明显升高.免疫荧光双标染色证实在坐骨神经损伤后1周PSD-95与nNOS共定位于Schwann细胞上,而与神经丝蛋白NF-200共定位不明显.本研究结果提示PSD-95通过nNOS参与了周围神经损伤修复过程.
关键词： 突触后密度蛋白-95 坐骨神经 神经型一氧化氮合酶 NMDA受体 大鼠 -
A 型流感病毒 NS1与突触后密度蛋白-95的相互作用
目的： A型流感病毒NS1蛋白是一种多功能的致病因子，能够与被感染细胞中的多种蛋白相互结合，影响并干扰宿主细胞内的信号转导、蛋白质合成及抗病毒反应。突触后密度蛋白（Postsynaptic density protein95，PSD-95）主要存在于神经元及SH-SY-5Y等神经来源的细胞株中。假设NS1能够与PSD-95结合，则更有利于了解A型流感病毒对神经元及相关细胞的作用机制。方法通过酵母双杂交，GST-pull down 及免疫荧光技术分别从体外和体内两方面检测NS1与PSD-95的相互作用。结果酵母双杂交表明，仅转染PGAD-NS51/PGBK-PSD-95的QDO有菌落生长，且α-半乳糖苷酶活性显著高于阳性对照；而转染PGAD-NS32/PGBK-PSD-95的QDO无菌落生长；GST-pull down表明仅NS51与PSD-95孵育后，能够被Western-blot检测到；免疫荧光表明NS51与PSD-95可能存在共定位，而NS32与PSD-95则不存在共定位。结论 H5N1（A/chicken/Guangdong/1/2005）的NS1能够与PSD-95结合；反之，H3N2（A/Shantou/602/06）的NS1则不能。
关键词： 非结构蛋白 突触后密度蛋白-95 流感病毒
