非O157产志贺毒素大肠埃希菌分离株血清型鉴定及主要毒力基因分析

目的 了解中国不同来源非O157产志贺毒素大肠埃希菌分离株血清型及主要毒力基因的流行情况.方法 采用O抗原基因簇特异性聚合酶链反应(PCR)结合全套O抗血清凝聚法确定O血清群,以PCR扩增和测序fliC基因确定H型;采用PCR方法对所有菌株进行stx1、six2、eae及ehxA基因检测.结果 434株非O157 STEC分离株中,除不可分型菌株外,共检测出82种O血清群和28种H型,其中O20∶H30、O2∶H32和O2∶ H45为优势血清型.stx1、stx2和stx1+stx23种志贺毒素基因型的检出率分别为25.35％、64.98％和9.68％,而eae和ehxA基因的阳性率分别为3.92％和32.95％.仅15株菌同时携带3种毒力基因,且主要为血清型O26∶ H11的腹泻患者分离株.结论 我国非O157 STEC分离株血清型复杂多样,同时检测eae和ehxA基因对于发现高致病潜力的菌株具有重要参考价值.

产志贺毒素大肠埃希菌分离株多位点可变数目串联重复序列分析

目的 探讨多位点可变数目串联重复序列分析[multiple-locus VNTR(variable-number tandem repeats)analysis,MLVA]分型方法对产志贺毒素大肠埃希菌分离株的分型效果,初步了解菌株分子流行病学特征.方法 采用7个VNTR位点对70株产志贺毒素大肠埃希菌分离株进行分析,并根据多态性位点的重复数目利用BioNumerics软件进行聚类分析.结果 70株菌株被分为46种MLVA型别,O157与非O157菌株可分为A、B两个明显不同的群.除少部分菌株外,不同宿主来源、志贺毒素型别及血清型的非O157菌株与MLVA型别存在较好的相关性.结论 7个VNTR位点的MLVA分型方案对于产志贺毒素大肠埃希菌的菌株分型、暴发溯源等具有一定的参考价值,但仍需进一步完善.

stx-PCR方法、Vero细胞毒性试验和酶联免疫试剂盒3种方法检测产志贺毒素大肠埃希菌的评估

目的 评价stx-PCR方法、Vero细胞毒性试验和酶联免疫试剂盒3种方法在检测产志贺毒素大肠埃希菌的特异性和敏感性的差异.方法 运用stx-PCR方法、Vero细胞毒性试验和酶联免疫试剂盒分别对29株大肠埃希菌参考菌株和45株食品分离大肠埃希菌株进行检测.结果 stx-PCR方法可以判定50株菌携带stx基因,同时Vero细胞毒性试验可以判定这些菌株具有细胞毒性,两者的一致性为100％;酶联免疫试剂盒能判定其中38株菌具有志贺毒素.结论 3种方法都具有很好的特异性.stx-PCR方法和Vero细胞毒性试验较酶联免疫试剂盒具有更高的敏感性,试剂盒适用于食源性疾病暴发事件中产志贺毒素大肠埃希菌的快速筛选,stx-PCR方法推荐作为实验室常规快速检测方法,Vero细胞毒性试验是检测产志贺毒素大肠埃希菌是否具有志贺毒素生物学活性的金标准方法.

2株不同产志贺毒素大肠埃希菌O157感染症一例

患儿,男,2001年2月20日出生,发育正常,于12月6日开始出现灰白色水样腹泻(6～8次/24 h,未见血性腹泻)、肠鸣、呕吐、厌食等症状,无溶血性尿毒综合征,体温正常,病前有食用牛奶和水果史.采用血清学和生物化学方法,12月8日采集患儿粪便标本(1 ml)增菌培养.增菌培养物经大肠埃希菌(E.coli)O157免疫色层技术(E.coli O157快检金卡,郑州博赛生物技术研究所和美国BINAX公司产品)检测,中国和美国的两种检测卡均显强阳性,增菌培养液浸至检测线区域即呈现出比照线粗且颜色更深的阳性线,随后取增菌培养物和免疫磁珠集菌物分别划线接种于Chromagar O157平板上并于37℃培养24 h,得到许多直径为2 mm、外周透明而中央区呈兰绿色(1号菌)和直径为1 mm外周透明而中央区呈兰红色(2号菌)的两种圆形光滑菌落,其他形态的菌落很少甚至不出现(免疫磁珠集菌物).

山梨醇发酵产志贺毒素大肠埃希菌O157∶H-的特征与检测

山梨醇发酵产志贺毒素大肠埃希菌O157∶H-(sorbitol-fermenting Shiga toxin-producing Escherichia coli O157∶H-,简称SF STEC O157∶H-)已成为欧洲大陆感染性腹泻的主要原因[1,2].本文综述SF STEC O157∶H-菌株的致病性、感染流行病学、表型和分子特征以及适宜的微生物学诊断技术.

猪源产志贺毒素大肠埃希菌耐药性及超广谱β内酰胺酶基因型分析

目的 了解我国猪源产志贺毒素大肠埃希菌(Shiga to xin-producing Escherichiacoli,STEC)产超广谱β内酰胺酶(Extendedspect rumβ-lactamases,ESBLs)情况及其基因型.方法 对22株分离自重庆地区2个规模化养殖场健康猪粪的STEC菌株进行药物敏感性检测、ESBLs表型确证及7种类型(blasHV,blaLEN,blaOKP,blaTEM,blaCTXM,blaGEs及blaKPC)ESBLs基因型PCR检测和测序分析.结果 22株携带stx2e的STEC菌株中2株对所有23种测试抗生素敏感,其余菌株除对亚胺培南和美罗培南敏感外,对其他抗生素均存在不同程度耐药.10株STEC菌株(占45.45％)产ESBLs酶.PCR检测其中 1株为blaCTXM1基因型,其余9株为blaCTX M-9+blaTEM1基因型.结论 重庆地区猪源STEC中存在较高比例的产ESBLs菌株.在加强人和动物STEC感染检测与监测的同时,应进行细菌耐药性监测.

弥散黏附性大肠埃希菌研究进展

大肠埃希菌（ Escherichia coli，E．coli）是人和温血动物肠道及环境中的常见细菌，部分携带特殊毒力因子的大肠埃希菌可成为致病性大肠埃希菌，根据引起疾病的类型可分为引起腹泻的肠道致病性大肠埃希菌（或致泻性大肠埃希菌）（Diarrheagenic E．coli，DEC）及肠外致病性大肠埃希菌（ ex-traintestinal E．coli，ExPEC）。 ExPEC主要包括引起泌尿道感染的尿道致病性大肠埃希菌（ uropathogenic E．coli，UPEC）和引起败血症和脑膜炎等的新生儿脑膜炎大肠埃希菌（ neonatal meningitis E．coli，NMEC）。根据毒力因子、致病机制、临床表现及流行病学等特征，目前主要将DEC分为6类，即肠产毒性大肠埃希菌（ enterotoxigenic E．coli，ETEC）、肠致病性大肠埃希菌（ enteropathogenic E．coli，EPEC）、肠侵袭性大肠埃希菌（ enteroinvasive E．coli，EIEC）、肠出血性大肠埃希菌（ enterohe-morrhagic E．coli， EHEC）或产志贺毒素大肠埃希菌（ Shigatox-in-producing E．coli，STEC）、肠集聚性大肠埃希菌（enteroag-gregative E．coli，EAEC）以及弥散黏附性大肠埃希菌（ diffusely adherent E．coli，DAEC）［1］。

008 一组由产志贺毒素大肠埃希菌O26:H11菌株引起的溶血性尿毒综合征

双重实时荧光定量PCR检测产志贺毒素大肠埃希菌Stx1和stx2基因

目的 建立一种检测产志贺毒素大肠埃希菌(STEC)的双重实时荧光定量PCR法.方法 根据stx1和stx2及其变种序列,设计PCR引物和TaqMan探针,建立双重实时荧光定量PCR检测体系,进行灵敏度和特异性评价,并对STEC模拟粪便标本及动物粪便标本进行检测分析.结果 双重实时荧光定量PCR检测含志贺毒素基因重组质粒的灵敏度为1×102 copies/反应体系；该法对17种常见肠道病原菌均无特异性扩增,对47株不同志贺毒素类型及变种的已知STEC菌株的检测特异性为100％；对模拟粪便标本的检测下限为3.55×103 CFU/g;对动物粪便标本的检测阳性率高于细菌分离培养.结论 建立的双重实时荧光定量PCR可作为不同志贺毒素类型及变种的STEC菌株的快速鉴定方法,亦可用于人感染性腹泻标本和动物粪便标本STEC感染的快速筛查.

非O157产志贺毒素大肠埃希菌研究进展

产志贺毒素大肠埃希菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)是一类能产生一种或一种以上志贺毒素的大肠埃希菌的总称,包括400余种血清型,其中以O157∶H7血清型为主.近年来,非O157 STEC在世界范围内引起散发感染和暴发的报道明显增加,但由于非O157 STEC血清型多样,菌株间表型差异较大,目前尚无一种有效的能用于所有非O157 STEC菌株分离的方法,因此非O157 STEC的流行情况可能被低估.本文就非O157 STEC的病原学、致病机制、流行病学特征、实验室诊断、治疗和预防等方面的研究进展做一简要综述.

第四次欧盟产志贺毒素大肠埃希菌外部质量控制考核结果评价

目的 通过参加国际外部质量控制考核,提高实验室检测能力,确保检测结果的准确性、可重复性和可比性.方法 于2013年参加了第四次欧盟产志贺毒素大肠埃希菌(shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)和其他致泻性大肠埃希菌(diarrhoeagenic Escherichia coli,DEC)外部质量控制考核.对考核菌株进行了血清分型、表型分型、基因分型及stx/vtx亚分型等检测并上报结果.根据世界卫生组织(world health organization,WHO)大肠埃希菌和克雷伯菌参比实验室反馈结果进行综合评估.结果 在15株菌的14个考核项目中,本实验室有12个项目的考核结果远高于WHO全球食源性感染网络(global foodbome infections network,GFN)成员国的平均成绩(其中10个项目共计150个指标全部正确),另2项超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum beta-lactamases,ESBLs)和β-葡萄糖醛酸苷酶试验的考核结果正确率分别为87％和80％.结论 通过参加本次国际外部质量考核,提高了本实验室产志贺毒素大肠埃希菌及其他致泻性大肠埃希菌的检测能力,但表型分型能力还需要提高.

我市首次分离到O157:H7大肠杆菌分离株的生化特征、毒力因子与耐药性的探讨

目的:了解金华市外环境中O157:H7大肠杆菌分离株中生化特征、毒力因子的携带与耐药情况.方法:直接分离接种于O157显色培养基.结果:从51份样品中分离出2株O157:H7大肠杆菌,对这2株O157:H7大肠杆菌分离株进行PCR毒力因子的测定,携带eaeA、stx2毒力因子.结论:药敏试验结果显示,这两株O157:H7大肠杆菌分离株对利福平类、四环素耐药.

产志贺毒素大肠埃希菌的特殊类型

产志贺毒素大肠埃希菌(STEC)的菌种以O157:H7为代表,但现在已扩展至近70个血清型.STEC的重要生化反应特征是不发酵山梨醇,现已在德国、捷克发现能在24h内发酵山梨醇的菌株,且其H抗原缺失.少数不产生志贺毒素、stx基因为阴性的发酵山梨醇的O157:H菌株也在欧洲发现.以上新情况使STEC的检出更具挑战性.

产志贺毒素大肠埃希菌与溶血性尿毒综合征

大部分腹泻相关的溶血性尿毒综合征(haemolytic uraemic syndrome,HUS)是由产志贺毒素的大肠埃希菌引起,其病理生理不同于血栓性血小板减少性紫癜.在产志贺毒素大肠埃希菌(shiga-toxin-producing Escherichia coli,STEC)中,O157:H7是全球范围内与HUS发生具相关性的细菌.除普通磨碎牛肉外,许多媒介物均能将该病原体传播给人类而发病.急性感染病人一般不使用抗生素、镇静剂、麻醉药和非甾体类消炎药,一般建议医院采用静脉补液疗法.HUS的治疗仍然是支持性的,目前没有特殊治疗方法.预防HUS发生的好办法是防止产志贺毒素细菌的早期感染.

产志贺毒素大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶基因型的研究

目的 探讨产志贺毒素大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶(extended spectrum β-lactamases,ESBLs)类型及耐药机制.方法 采用纸片琼脂扩散法筛选36株产志贺毒素大肠埃希菌产ESBLs菌株,接合传递实验、质粒谱分析、PCR检测耐药基因和DNA序列分析产ESBLs菌株的表型和基因型.结果 双纸片扩散法证明有2株产志贺毒素大肠埃希菌产ESBLs,美国株E.coli 5 nonO157:H7和中国株E.coli 27 O157:H7对头孢他啶等第三、第四代头孢菌素和氨基糖苷类抗生素耐药,并能通过5.8kb的质粒传递给受体菌.PCR检测含有blaTEM基因.DNA同源分析表明861bp的blaTEM DNA片段与blaTEM-1 DNA片段同源.结论 产志贺毒素大肠埃希菌美国株和中国株产生相同类型的ESBLs,表现出对第三、第四代β-内酰胺酶类抗生素耐药.