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2010-2015年湖北省乙型流感病毒流行和进化分析
目的 了解2010-2015年湖北省乙型流感病毒流行分布和基因进化情况.方法 通过测序和全球流感共享数据库(global initiative on sharing all influenza data,GISAID)获得2010-2015年湖北省乙型流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuramidinase,NA)氨基酸序列,分别对其进行系统进化树、氨基酸突变位点和三维建模分析,结合同期病毒分离株流行分布,分析重配株基因进化与病毒流行分布间的关系.结果 2010-2015年湖北省乙型流感病毒存在系内重配和系间重配,首例重配株出现后,该病毒都会形成较大流行.同期病毒在HA四个主要抗原表位上发现的突变位点有:Nll6K、N129S、A146T、K162R和N197S,在NA上发现了神经氨酸酶活性突变位点D197N,三维建模表明该位点并非直接与底物或抑制物接触.结论 2010-2015年湖北省乙型流感病毒的流行与该病毒的基因进化关系密切,监测该病毒抗原表位突变位点和耐药突变位点有助于深入分析其进化特性.
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河北卢龙县猪与人G3型A组轮状病毒进化关系研究
对存于中国疾病控制预防控制中心病毒病预防控制所病毒性腹泻室的一例卢龙G3型仔猪GARV LLZ212的主要基因片段VP7、VP4、VP6、VP2和NSP2-5进行扩增,确定其基因型,并探讨其与当地人G3型GARV的进化关系.采用逆转录-聚合酶链式反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR),对LLZ212标本及6例当地儿童G3型GARV阳性标本的VP7、VP4、VP6、VP2和NSP2-5进行扩增,并进行序列测定.应用A组轮状病毒自动分型工具(RotaC v2.0)对各个片段进行分型.应用DNAStar和MEGA5.0软件包与GenBank上的参考株进行同源性和系统进化分析.卢龙猪LLZ212基因型为G3-P [8]-I5-C1-N1-T1-E1-H1,6株人GARV基因型均为G3-P [8]-I1-C1-N1-T1-E1-H1.LLZ212基因片段VP7、VP4、NSP4和NSP5分别与人GARV E885、CMH014/07、Wa和RMC321株同源性高,且进化树在同一亚枝内;LLZ212基因片段VP6、NSP2和NSP3均与猪GARV PRG921株同源性高,基因片段VP2与猪GARV OSU株同源性高,且进化树在同一亚枝内.确定一株罕见G3-P[8]-I5-C1-N1-T1-E1-H1型猪GARV,可能为人-猪重配株,LLZ212基因片段VP7、VP4、NSP4和NSP5与人GARV同源性高,LLZ212基因片段VP6、VP2、NSP2和NSP3猪GARV同源性高.
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流感 H10亚型重配病毒在不同细胞生长能力的比较
目的：评估两株流感H10亚型重配病毒在不同细胞内的生长特性，筛选可用于疫苗生产的细胞。方法基于A／Jiangxi-donghu／346／2013（H10N8）病毒的表面基因，利用反向遗传技术构建以高产PR8病毒为骨架的RG-H10N8（6＋2）和RG-H10N1（7＋1）两种重配病毒，在SPF鸡胚增殖病毒后，经序列测定确认，以质粒拯救RG-PR8病毒为对照，比较病毒在MDCK和Vero细胞上的生长敏感性；以相同MOI感染MDCK细胞后，比较病毒的生长特性。结果两种流感H10重配病毒和RG-PR8病毒在MDCK细胞上均能检测到病毒滴度，但是在Vero细胞上，RG-H10N8检测不到病毒滴度， RG-H10N1和RG-PR8可以检测到病毒滴度；用相同的MOI感染MDCK细胞后，RG-PR8生长能力强于两种重配病毒，两种重配病毒间差异不大。结论两种流感H10重配病毒在MDCK细胞上生长能力较好，MDCK较Vero细胞对H10重配病毒更敏感，来源不同的NA会影响病毒在Vero细胞上的生长敏感性。
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利用反向遗传技术进行B型重配流感病毒的构建
目的 反向遗传技术是流感病毒疫苗株构建和基因特性研究的重要方法,本研究旨在构建B型流感病毒反向遗传平台,进而拯救B型流感病毒.方法 研究中利用含有双启动子的pHW2000为载体,对B/Florida/4/2006病毒的8个基因片段构建质粒,获得8个节段的重组质粒后,共转染293T及MDCK混合细胞,收集上清液及细胞碎片,采用接种鸡胚及细胞传代方法,拯救B型流感病毒.结果 研究中发现可以利用该系统拯救B/Florida/4/2006病毒,拯救病毒的血凝滴度为HA 128～256/50μl,电镜下重配病毒颗粒多呈球形.结论 研究结果表明该系统可用于B型流感病毒的拯救,并可进一步利用该系统构建基因突变病毒,用于B型流感病毒的特性分析和疫苗株的构建.
