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益气活血中药脑泰方对脑缺血后海马CA2区铁跨膜转运蛋白表达的调节作用
目的:研究脑缺血后铁跨膜转运蛋白:转铁蛋白受体(Transferrin Receptor,TFR)、膜铁转运蛋白(Ferroportin,Fpn)、二价金属离子转运体(Divalent Metal Ion Transporter 1,DMTl)、人类猫白血病C亚类病毒受体(Feline Leukemia Virus Subgroup C Receptor,FLVCR)、胸腺癌抵抗蛋白(Breast Cancer Resistance Protein,BCRP)在益气活血法脑泰方(黄芪、川芎、地龙、僵蚕)干预后的表达变化.方法:随机将SD大鼠分为假手术组、模型组、脑泰方低、中、高剂量组(3、9、27 g/kg).各组大鼠预处理灌胃给药连续3d,大脑中动脉栓塞法(Middle Cerebral Artery Occlusion,MCAO)模型制备术后连续灌胃给药3d,1次/d.术后3d取材,免疫组织化学及Western-blot检测TFR、Fpn、DMT1、FLVCR、BCRP的表达.结果:脑泰方高剂量组缺血海马CA2区TFR表达明显降低(P＜0.05),DMT1量的表达减少(P＜0.05),Fpn表达明显增高(P＜0.05).脑泰方各剂量组FLVCR表达明显增高(P＜0.05),各脑泰方治疗组BCRP表达与模型组无差异.结论:脑泰方通过减少TFR、DMT1的表达,抑制铁的细胞内转运,增加Fpn、FLVCR的表达,促进胞内铁的外排,调节铁代谢,起到神经元的保护作用.
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脑泰方提取物对局灶性脑缺血大鼠血管内皮生长因子表达的影响
目的:探讨脑泰方提取物对大鼠局灶性脑缺血后血管内皮生长因子(VEGF)及VEGF mRNA的影响.方法:30只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、脑复康组、脑泰方低、中、高剂量组.通过月桂酸钠损伤血管内皮细胞来复制局灶性脑缺血模型,采用免疫组化和RT-PCR法检测各组大鼠脑内VEGF阳性细胞数和VEGF mRNA的表达,同时评价大鼠神经功能.结果:脑缺血后,药物组神经功能症状得到改善,尤以脑泰方中剂量组变化显著(P<0.01);假手术组大鼠脑内有少量VEGF阳性细胞,脑缺血后VEGF阳性细胞表达增加,与模型组比较,脑泰方中剂量组VEGF阳性细胞数明显增多(P<0.01),而且VEGF mRNA的表达也显著加强(P<0.01).结论:脑泰方提取物增强大鼠局灶性脑缺血后VEGF及VEGF mRNA的表达,可能是其抗脑缺血的作用机制之一.
关键词： 局灶性脑缺血 血管内皮生长因子(VEGF) 脑泰方提取物 -
脑泰方提取物预处理对脑缺血再灌注沙土鼠海马神经元的影响
目的:探讨脑泰方提取物预处理减轻沙土鼠脑缺血再灌注损伤的作用.方法:采用钳夹双侧颈总动脉建立沙土鼠脑缺血模型,将65只沙土鼠随机分为假手术组,脑缺血再灌注损伤组(IR组)、脑缺血预处理组(IPC组)、脑泰方提取物预处理组(NPC组),根据再灌注不同时间(24、48、72 h和7天).将IR组、IPC组、NPC组各分4个亚组(n=5).观察各时相沙鼠海马CA1区神经元状况,海马CA1区存活神经元数目.结果:(1)IPC组、NPC组与IR组同期比较,海马CA1区存活神经元数目明显增多(P<0.05),脑组织结构明显改善;(2)各组不同时相比较:随着再灌注时间延长,海马CA1区存活神经元数目逐渐减少,至第7天达低;(3)药物预处理组与缺血预处理组比较:海马CA1区存活神经元数目差异无显著性意义(P>0.05).结论:脑泰方提取物预处理具有抑制沙土鼠脑缺血再灌注损伤的作用.
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大鼠脑缺血后海马CA2区FLVCR和BCRP的表达及益气活血法干预
目的 研究脑缺血后血红素铁转运蛋白人类猫白血病C亚类病毒受体(feline leukemia virus subgroup Creceptor,FLVCR)及胸腺癌抵抗蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)随时间表达及益气活血法脑泰方(黄芪、川芎、地龙、僵蚕)提取物干预对FLVCR及BCRP表达的影响.方法 实验分两步进行,第一部分实验:随机将SD大鼠分为2h、6h、12h、24 h、72 h组,采用大脑中动脉栓塞法(middle cerebral artery occlusion,MCAO)行大鼠局灶性脑缺血模型制备,分别在术后2h、6h、12 h、24 h、72 h各时间点取材,通过免疫组织化学及RT-PCR检测FLVCR和BCRP及FLVCR mRNA和BCRP mRNA随时间表达的变化.第二部分实验,随机将SD大鼠分为假手术组、模型组、脑泰方低、中、高剂量组(3、9、27 g/kg).各组大鼠预处理藻胃给药连续3天,MCAO模型制备术后连续藻胃给药3天,每日1次.术后3天取材,电镜检测海马神经元内铁样颗粒分布,免疫组织化学及RT-PCR检测FLVCR和BCRP及FLVCR mRNA和BCRP mRNA表达.结果 72 h组FLVCR表达明显降低(P＜0.05),BCRP的表达2h、6h较高,12 h、24 h、72 h表达明显降低(P＜0.05);电镜下脑泰方各剂量组神经元内铁样颗粒聚集较模型组减少.脑泰方高剂量组FLVCR及FLVCR mRNA表达明显增加(P＜0.05),BCRP表达无明显改变.结论 大鼠脑缺血后第72 h FLVCR表达下降,益气活血中药脑泰方提取物干预可增加脑缺血后FLVCR的表达,促进血红素铁的外排,可能是治疗脑缺血损伤的新机制.
关键词： 猫白血病C亚类病毒受体 胸腺癌抵抗蛋白 脑泰方提取物 脑缺血 -
脑泰方提取物对rhTNFα诱导人脐静脉内皮细胞凝血、纤溶功能改变的影响
目的探讨重组人肿瘤坏死因子α(rhTNFα)对血管内皮细胞凝血、纤溶功能的影响,脑泰方提取物(NTE)对其的作用.方法将融合生长的人脐静脉内皮细胞(HUEC)随机分为空白对照组、NTE对照组、rhTNFα组和NTE高、中、低剂量组,检测100ng/mL的rhTNFα作用24h后内皮细胞冻融液的促凝活性、条件培养液中血管性假血友病因子(vWF)含量和组织型纤溶酶原激活物(tPA)、纤溶酶原激活物抑制物(PAI)的活性.结果与空白对照组比较,NTE对照组vWF含量和tPA活性变化无显著性(P＞0.05)、PAI活性和促凝活性显著下降(P＜0.01),rhTNFα组促凝活性、PAI活性以及vWF含量显著升高(P＜0.01),tPA活性变化无显著性(P＞0.05);与rhTNFα组比较,NTE各剂量组促凝活性和PAI活性显著降低(P＜0.05或P＜0.01),NTE中、高剂量组vWF含量均明显减少(P＜0.05或0.01),NTE低剂量组vWF含量减少无显著性(P＞0.05);NTE对rhTNFα诱导的促凝活性、vWF含量及PAI活性升高的抑制作用均具有明显的剂量效应关系(r分别为-0.83、-0.85、-0.76,P＜0.05).结论 NTE能显著抑制正常内皮细胞的促凝活性和PAI活性,对rhTNFα诱导内皮细胞促凝活性、PAI活性及vWF含量的升高均有较好的抑制作用,提示脑泰方对血管内皮细胞抗血栓功能具有较好的调节作用.
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脑泰方提取物抗肿瘤坏死因子诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的研究
目的观察重组人肿瘤坏死因子α(rhTNF-α)诱导人脐静脉内皮细胞(HUEC)凋亡及中药脑泰方提取物(NTE)的作用.方法将融合生长的HUEC随机分为空白对照组(正常培养,不加rhTNF-α)、NTE对照组(加中剂量NTE,不加rhTNF-α)、rhTNF-α组(仅加100 ng/mL rhTNF-α)和NTE高、中、低剂量组(加100ng/mLrhTNF-α和6 mg/mL、2mg/mL、0.67mg/mLNTE),观察rhTNF-α作用24h后内皮细胞吖啶橙/溴乙啶双重荧光染色和凋亡细胞计数.结果荧光显微镜下可见,空白对照组和NTE对照组HUEC为正常结构的活细胞、染色质主要着亮绿色,凋亡细胞率分别为14.0%和14.5%;rhTNF-α组与NTE低剂量组细胞大多呈均匀橙色,染色质多被染为橘红色,以固缩状或圆珠状为主,凋亡细胞率分别为75.0%和63.5%;NTE高、中剂量组细胞多呈亮绿色,凋亡细胞率分别为43.5%和53.0%.结论一定浓度的肿瘤坏死因子引起的内皮细胞损伤主要表现为细胞凋亡,脑泰方提取物可明显抑制这种凋亡的过度发生.
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脑泰方提取物预处理减轻沙土鼠脑缺血再灌注损伤作用研究
目的探讨脑泰方提取物预处理减轻沙土鼠脑缺血再灌注损伤的作用.方法采用钳夹双侧颈总动脉建立沙土鼠脑缺血模型,将130只沙土鼠随机分为假手术组(SOG),脑缺血再灌注损伤组(IRG组)、脑缺血预处理组(IPG组)、脑泰方提取物预处理组(NPG组),根据再灌注不同时间(24、48、72 h和7 d).将IRG组、IPG组、NPG组各分4个亚组(n=10).观察各时相沙鼠,海马CA1区存活神经元数目、脑组织含水量以及脑毛细血管通透性.结果①IPG组、NPG组与IRG组同期比较,脑含水量、伊文思蓝含量明显降低(P<0.05或0.01),海马CA1区存活神经元数目明显增多(P<0.05);②各组不同时相比较:随着再灌注时间延长,脑含水量、伊文思蓝含量测量值于第72 h达到高;海马CA1区存活神经元数目至第7 d达低;③药物预处理组与缺血预处理组比较:海马CA1区存活神经元数目、脑含水量差异不明显(P>0.05),脑组织伊文思蓝含量差异有显著性意义(P<0.05).结论脑泰方提取物预处理具有抑制沙土鼠脑缺血再灌注损伤的作用.
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脑泰方提取物抗肿瘤坏死因子诱导人脐静脉内皮细胞损伤的研究
目的观察肿瘤坏死因子α(TNF-α)对培养的人脐静脉内皮细胞的损伤作用及中药脑泰方提取物(NTE)的保护作用.方法将融合生长人脐静脉内皮细胞(HUEC)随机分为空白对照组、TNF-α组、NTE对照组和NTE高、中、低剂量组,观察100?ng/ml的TNF-α作用24?h后内皮细胞显微形态的改变及培养液中血管性假血友病因子(vWF)含量.结果 TNF-α作用后细胞形态发生显著变化,相差显微镜及普通光镜下主要表现为较多细胞收缩成圆形固缩状,细胞间隙变宽,甚至发生脱落并出现异常颗粒;部分细胞纵轴拉长,横轴缩小,表现为成纤维细胞型外观,培养液中vWF含量显著升高(P<0.01);NTE高剂量组、中剂量组细胞拉长,细胞间隙略增宽,但细胞及核边界尚清楚,形态较规则,与TNF组比较,圆形固缩状细胞数目减少,vWF含量明显降低(P<0.05, P<0.01);单独添加中剂量NTE 24?h后细胞形态和生长状况及vWF含量与空白对照组无明显差异(P>0.05).结论一定剂量的NTE对TNF-α诱导的HUEC损伤有较好的保护作用.
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脑泰方提取物对局灶性脑缺血大鼠CD34表达的影响
目的 探讨脑泰方提取物对缺血脑组织CD34表达的影响.方法 30只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、脑复康组、脑泰方低、中、高剂量组.通过月桂酸钠损伤血管内皮细胞来复制局灶性脑缺血模型,采用免疫组化方法检测各组大鼠缺血脑组织CD34的表达.结果 脑缺血后,CD34微血管呈阳性表达,脑泰方提取物中、高剂量组表达高于模型组(P<0.05).结论 脑泰方提取物能够增强缺血脑组织CD34的表达,促进局部血管新生和微血管的建立.
