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雄芍汤调节TGF-β/Smad通路有效部位的研究
目的：研究雄芍汤抗肝纤维化的药效物质基础，筛选其调节TGF-β/Smad通路的有效部位。方法：Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组、扶正化瘀胶囊组（扶正组）、雄芍汤组（雄芍组）、粗多糖组（多糖组）、总苷组、总生物碱组（总碱组），二甲基亚硝胺（DMN）腹腔注射复制大鼠肝纤维化模型。造模成功后，开始灌胃给药，治疗组分别给予扶正化瘀胶囊（0.105 g·mL-1）、雄芍汤粗多糖提取物（35.420 mg·mL-1）、雄芍汤总苷提取物（25.725 mg·mL-1）、雄芍汤总生物碱提取物（0.196 mg·mL-1），正常组与模型组灌服等量生理盐水，每日1次，疗程4周。4周后处死取材，实时荧光定量PCR检测肝组织TGF-β1 mRNA表达， Western blotting检测肝组织Smad3、Smad7蛋白表达。结果：与模型组比较，各治疗组TGF-β1 mRNA、Smad3蛋白表达均显著降低，Smad7蛋白表达均显著升高（P<0.05或P<0.01），总苷组Smad7、总碱组与模型组无显著性差异。结论：粗多糖部位和总苷部位为雄芍汤调节TGF-β/Smad通路的有效部位。
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中医药干预糖尿病肾病TGF-β /Smad通路的研究现状
糖尿病肾病是糖尿病常见并发症之一,目前干预TGF-β/Smad通路治疗糖尿病肾病已成为一个热点,中医药在糖尿病肾病中干预TGF-β/Smad通路的研究已经取得一定成果,向人们展现了其广泛的应用前景.
关键词： 糖尿病肾病 中医药 TGF-β/Smad通路 -
Fox L在TGF-β/Smad通路中对肝星状细胞活化的影响
肝纤维化是肝脏内弥漫性细胞外基质(特别是胶原)过度沉积的结果, 如果肝纤维化进行性发展, 常演变为肝硬化. 而肝星状细胞的激活则是肝纤维化的核心事件, 是细胞外基质分泌的主要细胞, 其中的TGF-β/Smad通路是肝星状细胞内主要的信号传导通路之一, 在细胞外基质的合成中起着重要作用. 由于在该信号通路下游Smad复合物只能与靶基因形成松散连接, 所以必然存在着相应的协同蛋白质使整个复合物紧密连接, 而近研究发现,Fox L转录因子中的Fox L2可能与整个Smad复合物形成了分子伴侣关系, 他有可能加强了Smad复合物与靶基因的结合的稳定性.
关键词： Fox L2 TGF-β/Smad通路 肝星状细胞 螺旋-转角-螺旋 -
甲基化酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷对瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF-β/smad信号通路的影响
目的 探讨甲基化酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷对瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF-β/smad信号通路的影响.方法 收集瘢痕疙瘩及正常皮肤组织各15例,免疫组化检测磷酸化smad2(p-smad2)和磷酸化smad3(p-smad3)在瘢痕疙瘩和正常皮肤中的阳性表达率;将瘢痕疙瘩分为实验组和对照组,实验组以5-氮杂-2-脱氧胞苷(5×10-5mmol/L)干预,对照组用等量的DMEM培养液,采用组织块法培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞,流式细胞仪分析5-氮杂-2-脱氧胞苷(5×10-5mol/L)对瘢痕疙瘩成纤维细胞周期及凋亡的影响;Western blot检测各组p-smad2、p-smad3、TGF-β1和smad7的表达变化;细胞免疫荧光染色法观察各组瘢痕疙瘩成纤维细胞内p-smad2和p-smad3蛋白的影响.结果 瘢痕疙瘩组织中p-smad2和p-smad3阳性表达率明显高于正常皮肤组织中p-smad2和p-smad3阳性表达.流式细胞仪显示5-氮杂-2-脱氧胞苷干预瘢痕疙瘩成纤维细胞后,细胞停滞于G0/G1期比例增加并且细胞凋亡率增加,瘢痕疙瘩成纤维细胞中p-smad2和p-smad3蛋白的表达减少,同时,TGF-β1蛋白表达减少,smad7蛋白表达回升.此外,5-氮杂-2-脱氧胞苷抑制smad2和smad3磷酸化及核转移.结论 甲基化酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷可抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖及促进其凋亡,其作用机制可能与抑制TGF-β/smad信号通路有关.
关键词： 瘢痕疙瘩 成纤维细胞 5-氮杂-2-脱氧胞苷 TGF-β/Smad通路 -
屈膝点按叩揉法影响TGF-β/Smad通路促进损伤肌腱修复的作用机制研究
[目的]通过分析屈膝点按叩揉法对调控肌腱干细胞(TSCs)成肌腱分化相关通路蛋白的影响,探讨该手法对髌腱炎损伤修复的机制.[方法]50只SD大鼠按随机数字表法随机分成5组,每组10只运用局部胶原酶Ⅰ注射建立大鼠髌腱炎模型,造模后治疗组采用屈膝点按叩揉法治疗,针剂组采用局部糖皮质激素注射治疗,CPM组运用持续被动运动(CPM)治疗仪治疗,模型组及正常组同条件饲养.通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测调控肌腱干细胞(TSCs)成肌腱分化相关通路蛋白的表达.[结果]治疗组、针剂组、CPM组转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad-2、腱调蛋白(Tnmd)、胶原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ)蛋白的表达均高于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05),治疗组TGF-β1、Smad-2、Tnmd、CollagenⅠ蛋白的表达高于针剂组、CPM组,且差异有统计学意义(P<0.05).[结论]屈膝点按叩揉法能够影响TGF-β/Smad信号通路调控TSCs分化行为产生对髌腱炎的修复作用.
关键词： 屈膝点按叩揉法 TGF-β/Smad通路 肌腱 修复 -
芪连扶正胶囊调控TGF-β/smad信号通路抑制肺癌转移的研究
目的:观察芪连扶正胶囊对TGF-β/smad通路相关分子表达的影响,探讨其相关机制.方法:体外培养肺癌A549细胞,制备芪连扶正胶囊含药血清,按实验分组干预,Western blotting检测TβR Ⅰ、TβRⅡ、Smad2/3、Smad4、Smad7的表达,RT-PCR检测TGF-β1 mRNA表达.结果:芪连扶正胶囊含药血清可上调TβR Ⅰ、TβRⅡ、Smad2/3、Smad4表达,下调Smad7、TGF-β1mRNA在肺癌A549细胞中的表达,其中,各药组分子表达量除芪连扶正胶囊低剂量组外,与对照组相比均有显著性差异(P＜0.01),与化疗组相比,联合组及芪连扶正胶囊各组亦有显著性差异(P ＜0.05或P＜0.01).结论:芪连扶正胶囊合药血清可通过纠正TGF-β/smad通路紊乱发挥抗肺癌转移作用.
关键词： 芪连扶正胶囊 TGF-β/Smad通路 肺癌 转移 -
海风藤对人肾小球系膜细胞TGF-β/Smad信号通路影响
目的:探讨海风藤对血管紧张素Ⅱ诱导的人肾小球系膜细胞TGF-β/Smad传导通路的影响.方法:培养人肾小球系膜细胞,分为正常组,模型组,海风藤高剂量(10 mg/mL)、中剂量(1 mg/mL)、低剂量(0.1 mg/mL)组.经预实验筛选结果,采用10-8 mol/L血管紧张素Ⅱ诱导模型组及海风藤各组人肾小球系膜细胞增殖,采用MTT法检测正常组、模型组及海风藤药液培养的经血管紧张素Ⅱ诱导的人肾小球系膜细胞于24、48、72 h等时间点的细胞活性.收集培养48 h时间点各组细胞,采用Western blot法及Real-time-PCR法分别检测Smad2、3蛋白表达及TGF-β、Smad7 mRNA的表达.结果:模型组与正常组比较,培养24、48、72 h内,系膜细胞显著增殖;海风藤各组能够抑制其增殖;于48 h时间点收集的系膜细胞中Smad2、Smad3含量及TGF-β mRNA的表达显著上升(P＜0.05),Smad7 mRNA的表达显著降低(P＜0.05);海风藤高、中、低各组与模型组比较,均能逆转上述变化,但量-效依赖趋势并不显著.结论:血管紧张素Ⅱ能够有效刺激肾小球系膜细胞增殖,海风藤可能通过多靶点抑制TGF-β/Smad信号通路的传导,从而抑制延缓肾小球硬化.
关键词： 海风藤 人肾小球系膜细胞 TGF-β/Smad通路 血管紧张素Ⅱ -
α-乳香酸灌胃对小鼠肾间质纤维化的防治作用及其机制探讨
目的 观察α-乳香酸灌胃对小鼠肾间质纤维化的防治作用,并探讨其机制.方法 雄性C57/BL小鼠52只,分为假手术组、模型组和乳香酸组.假手术组行单侧输尿管分离术,其余两组行单侧输尿管结扎术诱导肾间质纤维化.乳香酸组术后第1天开始给予α-乳香酸60 mg/kg灌胃,连续21 d.将各组小鼠麻醉后取血液、肾脏组织.检测血清尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、丙二醛(MDA)和总超氧化物歧化酶(t-SOD);采用HE染色和MASSON染色观察各组小鼠肾脏组织病理变化;采用Western blotting 法检测各组小鼠肾脏组织中的TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7、α-SMA蛋白,采用qPCR法检测TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7、α-SMA mRNA.培养HK-2细胞并分为对照组、实验1组、实验2组,实验1、2组下缺氧条件下培养48 h制作肾间质纤维化细胞模型.实验2组缺氧处理前加入25 μg/mL的α-乳香酸.培养48 h后采用Western blotting 法检测各组细胞中的TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7、α-SMA蛋白.结果 模型组小鼠血清BUN、Scr、MDA水平高于假手术组,SOD水平低于假手术组(P均<0.01).乳香酸组小鼠血清BUN、Scr、MDA水平低于模型组,SOD水平高于模型组(P均<0.05).肾脏组织病理观察结果显示,乳香酸组病理改变及肾小管间质纤维化程度较模型组明显减轻.模型组小鼠肾脏组织中TGF-β1、Smad2、Smad3、α-SMA mRNA及蛋白相对表达量高于假手术组,Smad7 mRNA及蛋白相对表达量低于假手术组;乳香酸组小鼠肾脏组织中TGF-β1、Smad2、Smad3、α-SMA mRNA及蛋白相对表达量低于模型组,Smad7 mRNA及蛋白相对表达量高于模型组(P均<0.05).实验1组细胞中TGF-β1、Smad2、Smad3、α-SMA相对表达量高于对照组,Smad7相对表达量低于对照组;实验2组TGF-β1、Smad2、Smad3、α-SMA相对表达量低于实验1组,Smad7相对表达量高于实验1组(P均<0.05).结论 α-乳香酸对小鼠肾间质纤维化有防治作用,作用机制可能与TGF-β1、Smad2、Smad3、α-SMA表达下调及Smad7表达上调有关.
关键词： 肾纤维化 α-乳香酸 人肾小管上皮细胞 TGF-β/Smad通路
