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癫痫模型大鼠海马齿状回神经元凋亡及凋亡诱导因子与胱天蛋白酶3联合表达的意义
目的 观察大鼠戊四氮癫痫模型海马齿状回神经元凋亡情况及凋亡诱导因子(apoptosis-inducing factor,AIF)、胱天蛋白酶(Caspase)-3阳性表达的意义.方法 将12只Wistar大鼠随机分为模型组和空白对照组,每组6只.模型组大鼠腹腔注射戊四氮,空白对照组大鼠腹腔注射生理盐水.造模成功后观察模型组与空白对照组大鼠海马齿状回组织切片尼氏染色及AIF、Caspase-3蛋白表达的情况.结果 空白对照组和模型组大鼠海马齿状回区尼氏染色400倍镜下单个视野神经细胞计数分别为(99.76±11.89)、(78.69±10.94)个,Caspase-3灰度值分别为154.81±16.06、131.65±16.81,AIF蛋白灰度值分别为173.09±9.57、158.34±6.33,组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 依赖Caspase的Caspase-3和不依赖Caspase的AIF两种凋亡途径均参与了癫痫导致的神经细胞凋亡过程.
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戊四氮点燃慢性癫痫大鼠脑组织TrkB及GLT-1的表达分析
目的 分析戊四氮(PTZ)点燃慢性癫痫模型SD大鼠脑组织酪氨酸激酶受体B(TrKB)及谷氨酸转运体1(GLT-1)的表达变化,为进一步研究胶质细胞BDNF/TrkB信号通路与GLT-1的相关性提供实验依据,为癫痫的防治提供靶位线索.方法 SD大鼠40只随机分成模型组(30只)及对照组(10只),采用PTZ点燃法制作慢性癫痫大鼠模型.运用Western技术分析SD大鼠PTZ点燃后7天海马及颞叶皮层TrkB和GLT-1的蛋白表达、采用免疫荧光双标法分析SD大鼠PTZ点燃后7天海马及颞叶皮层GFAP/TrkB双标阳性细胞的表达,并与对照组进行比较.结果 SD大鼠慢性癫痫发作后,海马及颞叶皮层TrkB和GLT-1蛋白的表达均明显上调、GFAP/TrkB双标阳性细胞平均光密度值较对照组明显增高(P＜0.05).结论 PTZ点燃慢性癫痫SD大鼠海马及颞叶皮层脑组织TrkB表达上调与GLT-1表达异常之间可能存在内在联系,BDNF/TrkB信号通路可能通过改变PTZ点燃慢性癫痫SD大鼠胶质细胞中GLT-1的生物效应来影响或参与癫痫过程.
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慢性癫痫大鼠脑组织GAT-1的表达变化及其与星形胶质细胞的相关性
目的 研究γ-氨基丁酸转运体-1(GAT-1)与胶质纤维酸性蛋白(GFAP)在戊四氮点燃的慢性癫痫大鼠脑中的变化.方法 采用免疫组化技术分别标记正常SD大鼠和戊四氮点燃的慢性癫痫大鼠发作后海马及外侧皮质区GAT-1和GFAP,结合Western blot实验结果分析其变化关系.结果 GAT-1和GFAP在慢性癫痫发作后,均有不同程度的表达增高,GAT-1增高更明显.结论 GAT-1和GFAP的同方向变化证明,在慢性癫痫发作后,GAT-1的表达增高并不只是由于星形胶质细胞的增生所致.
关键词： γ-氨基丁酸转运体-1 癫痫 胶质纤维酸性蛋白 戊四氮 -
氯喹对癫痫大鼠海马区神经元自噬的影响
目的:研究戊四氮诱导大鼠癫痫发病过程中出现的神经元自噬现象,探讨氯喹对神经元自噬现象的影响,探讨氯喹缓解癫痫的作用机制.方法:Wistar大鼠24只随机分为对照组、戊四氮致痫组及氯喹干预组.观察各组大鼠行为表现和脑电图变化,用HE、Nissl染色检测各组大鼠海马区神经元的损伤程度,应用免疫组化检测各组海马自噬标记物微管相关蛋白l轻链3 (LC3)的表达.结果:对照组无痫样发作,脑电图波形正常,神经元处于正常状态,自噬处于低水平;戊四氮致痫组有重型的痫样发作,脑电图记录呈高频高幅的癫痫波形,并且出现神经元的大量死亡(P＜0.05),LC3较对照组表达增高(P＜0.05);氯喹干预组有轻型痫样发作,与戊四氮致痫组对比,脑电图记录癫痫波形减少,神经元的损伤明显减轻(P＜0.05),LC3的表达显著升高(P＜0.05),自噬过程被抑制.结论:氯喹可以有效的抑制癫痫发作过程中出现的神经元自噬现象,减少神经元的死亡,从而达到缓解癫痫发作的作用.
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不同剂量氯喹对戊四氮慢性致痫大鼠脑内nNOS表达的影响
目的:观察不同剂量氯喹对戊四氮慢性致痫大鼠脑内神经型一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,nNOS)表达的影响,探讨氯喹在癫痫发生发展过程中的作用.方法:健康雄性SD大鼠50只,随机分为对照组(10只)、戊四氮致痫组(10只)；氯喹干预1组(10只)；氯喹干预2组(10只)；氯喹干预3组(10只).观察大鼠行为学表现,应用免疫组织化学和Western Blot方法观察不同剂量氯喹对慢性致痫大鼠脑内nNOS表达的影响.结果:戊四氮致痫组nNOS明显增多,与对照组相比差异具有显著性(P＜0.05)；氯喹可抑制nNOS的表达,氯喹干预2、3组与对照相比差异无显著性(P＞0.05).结论:氯喹能够剂量依赖性的抑制nNOS的表达,提示氯喹可通过其对nNOS的抑制作用达到抗癫痫效应.
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痫愈益智汤对癫痫大鼠行为和海马脂质过氧化的影响
目的:观察中药复方痫愈益智汤对癫痫大鼠的发作,学习记忆能力及海马脂质过氧化的影响.方法:以戊四氮(pentylenetetrazole,PTZ)腹膜腔注射建立大鼠慢性点燃模型,实验分为四组:生理盐水组(normalsaline,NS)、病愈益智汤组(XianyuYizhi,XYYZ)、丙戊酸钠口服液组(SodiumValproateOralSolution,VPA)和丙戊酸钠口服液病愈益智汤联用组(VPA+XYYZ),每组15只.各组在造模同时即开始灌胃给药,持续4周.完全点燃的大鼠进行水迷宫实验.用比色法检测海马丙二醛(malondialdehyde,MDA)、还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平和总超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)活力.结果:XYYZ组、VPA组和VPA+XYYZ组大鼠点燃率、死亡率明显低于NS组,点燃潜伏期也明显长于NS组.大鼠水迷宫实验中,XYYZ组和VPA+XYYZ组大鼠穿越平台的次数明显多于NS组(P＜0.05).各干预组在平台所在象限停留的时间明显长于NS组(P＜0.05).各干预组和NS组相比,大鼠海马内MDA含量明显降低(P＜0.05),GSH和SOD含量明显升高(P＜0.05).结论:痫愈益智汤通过抗氧化损伤机制保护神经元,从而拮抗癫痫的发生并对癫痫鼠的认知功能起到改善作用.
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氯喹对戊四氮慢性致痫大鼠海马GluR2及nNOS表达的影响
目的:观察氯喹对戊四氮慢性敛痫大鼠海马α-氨基羟甲基异恶唑丙酸(amino-3-hydroxy-5-methylisoxazole-4-propionic acid,AMPA)受体(GluR2)及神经型一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,nNOS)表达的影响,探讨氯喹在癫痫发生发展中的作用.方法:30只健康雄性SD大鼠,随机分为3组:对照组(10只)、戊四氮致痫组(10只)、氯喹干预组(10只),观察大鼠行为表现和脑电图的改变.应用Western Blot检测大鼠海马GluR2含量的改变,免疫组化检测nNOS的变化.结果:对照组无癫痫发作,戊四氮敛痫组癫痫发作严重(Ⅲ～Ⅴ级),氯喹干预组痫样发作与戊四氮致痫组相比较轻(Ⅰ～Ⅲ级,P＜0.05)；戊四氮敛痫组脑电记录呈频发高幅的痫样波,氯喹干预组痫样波幅低且缓；与对照组相比,癫痫组GluR2表达减弱(P＜0.05),氯喹干预组与对照组比较差异有显著性(P＜0.05)；nNOS在戊四氮敛痫组表达强,以海马为著,与对照组比较差异有显著性(P＜0.05),氯喹干预组与对照组比较无显著性差异(P＞0.05).结论:氯喹可以通过调节GluR2的含量和抑制nNOS的表达,表明氯喹可能是预防和治疗癫痫的理想药物.
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西酞普兰对戊四氮点燃癫痫大鼠行为学及海马5-HT能递质系统影响的在体微透析研究
为研究5-羟色胺(5-HT)能神经递质在癫痫形成过程中的变化及西酞普兰(CTP)对其的影响,本研究用CTP(1 mg/kg·d灌胃)预干预1周后,对戊网氮(PTZ,30 mg/kg·d,腹腔注射)点燃癫痫过程中的行为学及在不同时间点对大鼠海马进行微透析取样,经高效液相电化学检测技术在活体观察了30只自由活动大鼠5-HT及其代谢产物5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)水平和5-HT转化率(5-HIAA/5-HT)的动态变化.结果显示:PTZ注射后在CTP组发作潜伏期延长,发作程度轻和点燃时间延长,发作死亡率降低.点燃早期,CTP组大鼠的海马5-HT水平升高,5-HT转化率降低,与对照组和VFZ组比较,有显著性差异(P<0.05);点燃晚期CTP组和PTZ组与对照组比较5-HT水平和5-HT转化率均显著降低(P<0.05).本研究结果提示PTZ点燃过程中,早期CTP升高脑内5-HT水平,可能直接抑制了引起爆发放电的动作电位,而抑制发作;晚期脑内5-HT神经元丢失和受体减少,功能减退,而导致CTP的作用减退.
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白藜芦醇对戊四氮致痫大鼠脑脊液、血清S1OOB蛋白的影响
目的 研究白藜芦醇(Res)对戊四氮致痫大鼠脑脊液、血清S100B蛋白的影响.方法 采用戊四氮(PTZ)腹腔注射建立慢性癫痫模型,造模成功后予以Res(15 mg/kg·d)灌胃干预10 d；采用酶联免疫吸附法测定脑脊液、血清S100B蛋白含量,海马标本行Nissl染色.结果 经28 d连续给药,18只大鼠符合Racine点燃标准,Res干预组大鼠痫性发作潜伏期明显延长,且发作时间明显低于癫痫模型组、二甲基亚砜组(P＜0.05).海马Nissl染色提示Res干预对大鼠海马CA1、CA3区神经元有保护作用(P＜0.05),而对齿状回保护作用不明显(P＞0.05).Res干预组大鼠脑脊液、血清S100B蛋白含量低于癫痫模型组、二甲基亚砜组(P＜0.05).结论 Res降低PTZ致痫大鼠脑脊液、血清S100B蛋白含量,或许减缓癫痫发作脑损伤发挥神经保护作用.
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白藜芦醇对戊四氮致痫大鼠的学习记忆能力的影响
目的 研究白藜芦醇对戊四氮致痫大鼠的空间学习记忆能力的影响.方法 采用戊四氮亚惊厥剂量腹腔注射建立慢性癫痫模型,造模成功后予以白藜芦醇15 mg/kg灌胃干预10 d,行Morris 水迷宫实验测试大鼠的空间学习和记忆能力.结果 经28 d连续给药,18只大鼠符合Racine点燃标准,Res干预组大鼠痫性发作潜伏期明显延长,且其发作时间明显低于癫痫模型组、二甲基亚砜组,差异有统计学意义(P＜0.05).定位航行试验:实验第1、2d,各组大鼠逃避潜伏期差异没有统计学意义,而第3、4、5d癫痫模型组、二甲基亚砜组大鼠逃避潜伏期比正常对照组明显延长,Res干预组大鼠逃避潜伏期明显低于癫痫模型组、二甲基亚砜组,差异有统计学意义(P＜0.05).空间探索试验:将原站台撤去后,癫痫模型组、二甲基亚砜组穿越原站台次数和象限逗留时间,比正常对照组明显减少；同Res干预组相比减少,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 白藜芦醇对戊四氮致痫大鼠具有抗癫痫和改善其空间学习记忆能力.
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去势对戊四氮点燃大鼠癫痫模型的行为学表现
目的 研究去势对戊四氮点燃大鼠癫痫模型行为学表现的影响.方法 采用戊四氮腹腔注射制作癫痫大鼠模型,对照研究去势大鼠同正常大鼠的潜伏期及持续时间等行为学表现.结果 大鼠癫痫模型全部点燃,去势组平均潜伏期(8.09±0.89) min((-x)±SD)长于非去势组的(3.94±0.65) min((-x)±SD).发作时间也有所缩短,去势组(19.16 ±3.06) min((-x)±SD)略短于非去势组的(26.37±2.90) min((-x)±SD) (P ＜0.05).非去势组点燃时间明显短于去势组,非去势组平均点燃时间(20.83±6.15) d((-x)±s),而去势组平均点燃时间(24.6±5.64) d((-x)±SD).结论 戊四氮点燃大鼠致痫模型是一种成熟的、较为安全的癫痫模型.去势后,SD雄鼠较正常非去势SD雄鼠相比致痫潜伏期延长、持续时间缩短、发作频率及程度减轻,点燃时间也明显长于正常SD雄鼠.
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柴胡总皂甙对戊四氮慢性点燃大鼠海马γ-氨基丁酸表达的影响
目的 研究柴胡总皂甙对戊四氮(PTZ)慢性点燃癫痫模型大鼠海马区γ-氨基丁酸(GABA)表达的影响.方法 48只健康SD大鼠被随机均分为6组,即空白对照组(A组)、生理盐水组(B组)、丙戊酸钠(VPA)组(C组)和柴胡总皂甙高、中、低三种剂量组(D组、E组、F组).除A组不做处理外,其他各组采用腹腔注射PTZ慢性点燃造模,造模同时给予VPA、柴胡总皂甙等不同处理因素,连续4周后取脑组织切片进行GABA免疫组化染色,从阳性细胞数、灰度值分析结果.结果 B组海马CA1、CA2、DG区的阳性细胞数高于其他各组(P＜0.05),而各区阳性细胞灰度值低于其他各组(P＜0.05).结论 柴胡总皂甙可以影响PTZ点燃大鼠海马的GABA水平,发挥抑制PTZ对大鼠点燃的作用.
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抗痫煎剂对戊四氮诱导小鼠癫痫模型的影响
目的:观察抗痫煎剂对戊四氮(pentylenetetrazole,PTZ)诱导小鼠癫痫模型的抗痫作用.方法:先用PTZ腹腔注射造成小鼠急性痫性发作模型,再分别用生理盐水(A组),苯巴比妥(B组)、抗痫煎剂(C组)灌胃法给药,2次/d,共15天,第16天3组再予PTZ腹腔注射,然后记录痫性发作的潜伏期、痫性发作的级别、持续时间以及惊厥发作次数.结果:抗痫煎剂能明显降低致痫大鼠惊厥潜伏期、发作级别、惊厥持续时间以及发作次数.结论:抗痫煎剂对PTZ诱导小白鼠癫痫模型有较好的抗癫痫作用.
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戊四氮致痫幼鼠颞叶和海马区Cx43的表达及天麻素干预
目的 在建立戊四氮点燃幼鼠癫痫模型的基础上,观察各组大鼠行为学改变、颞叶与海马区缝隙连接蛋白Cx43的表达变化及天麻素的干预研究.方法 将50只21日龄Wistar幼鼠(50～70 g)随机分为5组,分别为空白对照组、戊四氮组、天麻素大剂量组、天麻素小剂量组及丙戊酸钠组,每组10只.根据Racine分级法,观察大鼠行为学改变并记录大鼠痈性发作级别和次数,在点燃4周后常规方法心脏灌注、固定及取脑组织,采用免疫组织化学方法显示各组动物脑组织切片Cx43表达的情况.结果 在实验2周时,戊四氮组发作率为100%,天麻素小剂量组、大剂量组及丙戊酸钠组发作率均低于戊四氮组(P<0.05);4周后,天麻素小剂量组、大剂量组发作率与戊四氮组比较,差异无统计学意义(P>0.05),但丙戊酸钠组发作率明显低于戊四氮组,其差异具有统计学意义(P<0.05);4周后,戊四氮组点燃率为100%,天麻素大、小剂量组及丙戊酸钠组点燃率均低于戊四氮组fP<0.01).戊四氮点燃4周后,实验各组发作级别比较,差异有统计学意义(X2=49.71,P<0.01),戊四氮组发作级别高(秩次为700.12),其次是天麻素小剂量组(秩次为547.60)、天麻素大剂量组(秩次为522.60)、丙戊酸钠组(秩次为502.10)及空白对照组(秩次为273.50).戊四氮点燃4周后,在各组实验大鼠颞叶皮质及海马区,戊四氮组Cx43表达量较其他组多,差异具有显著性统计学意义(P<0.01),且天麻素大剂量组的表达量小于天麻素小剂量组(q=2.811,2.647,P<0.05),而大剂量组与丙戊酸钠组比较,其差异没有统计学意义(q=1.203,1.116,P>0.05).结论 Cx43表达的增加可能是癫痫发作产生的一个原因;天麻素能够降低致痫大鼠惊厥的易感性及抑制大鼠颞叶和海马区Cx43表达,抑制了异常缝隙连接的形成,达到抗癫痫形成.
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定痫灵抗癫痫作用的实验研究
目的:探讨定痫灵抗癫痫作用.方法:采用大鼠戊四氮(PTZ)惊厥法,观察大鼠惊厥发生率,惊厥发生潜伏期及惊厥发作持续时间.结果:定痫灵能明显抑制大鼠戊四氮惊厥发生率,缩短惊厥发和持续时间,潜伏期延长,并能降低阈剂量小鼠戊四氮半数惊厥剂量(CD50).结论:本品有一定的抗惊厥作用.
