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2017年河南省登革热疑似病例的实验室诊断与分子溯源
目的 对2017年河南省报告的登革热疑似病例进行实验室确诊,从分子水平追踪其来源.方法 血液标本(3～5 ml)来源于2017年河南省传染病监测网络直报系统中上报的8例登革热疑似病例,按照《全国登革热监测方案》对病例进行个案调查.血液样本分离血清后,通过检测血清中登革病毒非结构蛋白1抗原(NS1)、IgM和IgG抗体以及病毒RNA进行实验室确诊;对于登革病毒RNA检测阳性的样本进行荧光PCR分型诊断和E基因序列扩增,阳性扩增产物测序后进行同源性比对.结果 8个登革热疑似病例中6例确诊为登革热实验室诊断病例,均为境外输入;其中5例病例登革病毒RNA检测阳性,经分型检测发现,登革病毒1型为1例,2型和3型各2例;对1例登革病毒2型和1例3型病例成功进行了分子溯源,其中由巴基斯坦输入的登革病毒2型病例核酸序列属于cosmopolitan基因型,与巴基斯坦2013年登革病毒2型KJ010186一致性高,为99.0%;由马来西亚输入的登革病毒3型病例核酸序列属于Ⅰ型基因型,与2014年新加坡登革病毒3型KX224276一致性高,为99.0%.结论 2017年河南省登革热病例经实验室诊断和分子溯源证实均为输入性病例,未引起本地流行.
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浙江省2013年输入性登革热病例病原分子溯源
目的 对2013年浙江省登革热病例进行实验室确诊与病原的分子溯源.方法 对患者血清样本同时进行登革热病毒IgM抗体和核酸检测及病毒分离,阳性分离株采用RT-PCR方法扩增E基因,进行核苷酸序列测定和同源性与进化分析.结果 18例患者发病前均有在境外登革热流行区暴露史,从患者18份血清样本中检测到登革热病毒IgM抗体阳性15份(83.3％),核酸阳性8份(44.4％),分离到登革热1型病毒6株,4型1株.6株登革热1型株之间E基因核苷酸和氨基酸同源性分别为90.9％～99.7％和96.8％～100％,与浙江省2004年登革热1型株之间核苷酸和氨基酸同源性分别为91.4％～98.5％和96.6％～99.0％;E基因进化树显示,登革热1型株位于GⅠ、GⅣ和GⅤ基因亚型上,登革热4型株位于GⅠ亚型上,2013年7株登革热病毒与浙江省2004-2009年登革热病毒之间亲缘关系较远.结论 证实2013年浙江省登革热病例均为输入性,输入国为菲律宾、安哥拉、斯里兰卡和巴西等;登革热1型株基因亚型分别为亚洲型、南太平洋型和美洲月非洲型,登革热4型株为东南亚型;登革热4型病毒为浙江省首次分离.
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秦皇岛口岸首例输入性登革热病例的分子溯源
目的：对2012年秦皇岛口岸的首例登革热输入性病例进行分子溯源，确定病毒的基因型别及感染来源。方法应用ELISA方法和实时荧光RT?PCR方法对患者进行初筛，利用RT?PCR法扩增病毒的NS1基因并测序，根据获得的序列进行同源性分析、遗传距离计算及系统进化树的构建。结果从患者2份血清（QHD-01-BS1和QHD-01-BS2）中检测到IgM抗体阳性，从QHD-01-BS1及尿液（QHD-01-US）中检测到登革热2型病毒的NS1基因。同源性分析发现QHD-01-BS1（US）与COM基因型中的印度株GWL39 INDI-01和GWL18 INDI-01同源性高，为97.3%；QHD-01-BS1（US）的遗传距离与COM基因型遗传距离小，为0.04；进化分析显示QHD-01-BS1（US）与GWL39 INDI-01和GWL18 INDI-01亲缘关系近。结论分子溯源证实患者感染的登革热病毒与来源于印度的登革热2型病毒亲缘关系近，指示其传染源极有可能在印度。
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CODEHOP RT-PCR方法在汉坦病毒基因型别鉴定和分子溯源中的应用
目的 分析CODEHOP RT-PCR方法对于汉坦病毒(HV)基因型别鉴定和分子溯源中的应用效果.方法 选取实验室保存的汉滩型病毒阳性鼠肺样品DX0901和汉城型病毒阳性鼠肺样品DX1101,用CODEHOP RT-PCR扩增HV病毒L基因片段并测序,进行Blast同源性比对和系统发生分析.结果 两份样品均获得478 bp大小的RT-PCR扩增产物,汉滩病毒DX0901与汉滩病毒株Nc167同源性为接近,遗传距离为0.142.汉城病毒DX1101与汉城病毒株ZT10,ZT71,Z37同源性为接近,遗传距离为0.049.结论 CODEHOP RT-PCR方法可以有效的用于对汉坦病毒进行基因型别鉴定和分子溯源.
关键词： 汉坦病毒 CODEHOP RT-PCR 基因型别 分子溯源 -
海南1例感染类鼻疽伯克霍尔德菌的溯源调查
目的 对海南1例类鼻疽患者进行感染溯源调查,为类鼻疽防控提供科学依据.方法 采集患者住所周边环境中的泥土、水等样品并进行类鼻疽病原菌分离.通过细菌学试验、16 S rDNA测序、特异诊断PCR等方法对疑似菌株进一步鉴定.通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)、多位点序列分型(MLST)、多位点可变数串联重复序列分析(MLVA_4)等技术比较并确定环境分离菌株与临床菌株的同源性.结果 采集的58份环境样品中,自患者及邻居家水井水中共分离出3株类鼻疽伯克霍尔德菌(简称类鼻疽伯克菌).PFGE、MLST、MLVA等分子分型结果证实,1株自患者家井水中分离的类鼻疽伯克菌与患者临床分离株同源.结论 患者及其邻居家水井均被类鼻疽伯克菌污染,水井水很可能是该患者感染类鼻疽病的感染源.
