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人类8型疱疹病毒(HHV-8)末端重复序列的研究进展
人类疱疹病毒8(human herpes virus,HHV-8)是1994年美国学者Chang等[1]在艾滋病(aquired immunodeficiency syndrome,AIDS)患者的卡波西肉瘤(kaposi's sarcoma,KS)组织中发现的一种新肿瘤病毒,属于γ-2疱疹病毒亚科,与猴疱疹病毒(herpers viruss simiae,HVS)和EB病毒(epsteinBarr virus,EBV) DNA序列有很高同源性,被公认为KS致病因子.之后,HHV-8不仅发现在艾滋病相关KS中,在KS 其他三种类型(经典型、非洲地方型、器官移植后相关型)中均有发现,并出现在B淋巴组织增生性疾病中,如原发性渗出性淋巴瘤(primary effusion lymphomas,PEL)及多中心卡斯特莱曼病(multicentric Castleman'sdisease,MCD)两种肿瘤关系密切.HHV-8基因组为170 kb线性双链DNA.
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人类8型疱疹病毒感染在多发性骨髓瘤发病机制中的作用
多发性骨髓瘤是以骨髓中克隆性浆细胞恶性增殖和异常聚集为特征的一种B细胞肿瘤.近,一些实验室在骨髓瘤患者骨髓树突状细胞中检测到人类8型疱疹病毒(HHV-8)DNA序列.研究表明,HHV-8基因表达产物vIRF,vIL-8R和vIL-6可能参与多发性骨髓瘤的发病机制,但绝大多数欧洲实验室报告在骨髓瘤骨髓标本中未找到HHV-8感染的证据.目前的研究还没有确定HHV-8与多发性骨髓瘤之间是必然联系,还是一种地区性的机会感染.骨髓瘤感染的HHV-8特异病毒株在其发病机制中处于何种地位及有无因果关系,仍然是争论的焦点.
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重组ORF50和ORF73融合抗原检测HHV-8病毒的探讨
目的 构建高效表达重组HHV-8病毒ORF50和ORF73融合蛋白原核表达载体,为诊断试剂国产化提供抗原.方法 设计并合成扩增ORF50和ORF73基因引物,以HHV-8感染血清DNA为模板,扩增出目的基因,连接基因片段,IPTG诱导表达重组融合蛋白.包被ELISA酶标板后对无偿献血人员血清进行检测,以市售HHV-8 ELISA试剂盒作对照.结果 与市售人疱疹病毒8型(HHV-8)ELISA试剂盒检测结果一致.结论 构建的原核表达载体可成功表达重组HHV-8病毒ORF50和ORF73融合抗原,该抗原可作为HHV-8感染检测的诊断抗原.
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Castleman病的临床研究
目的 探讨Castleman病的临床表现、病理特点、治疗方法以及转归等.方法 回顾性分析自2011年3月至2014年5月在我院诊治的10例Castleman病患者的临床表现、实验室检查、病理及治疗等资料.结果 10例患者中,男性4例,女性6例;中位年龄44岁(30～71岁);单中心型(UCD)1例,广泛型(MCD)9例;浆细胞型3例(30％),透明血管型7例(70％),无混合型,其中1例UCD患者为透明血管型.1例UCD患者手术后治愈,1例患者MCD未接受化疗,8例患者化疗患者,其中1例完全缓解,6例病情稳定,1例疾病进展.无患者转变为淋巴瘤.随访中位时间为26.5月(13 ～64月),死亡患者1例,3年预期总体生存率为84.3％.结论 CD临床表现多样,诊断主要依靠病理.UCD治疗效果较好,MCD化疗及单克隆抗体治疗效果欠佳,缓解率低.
关键词： Castleman病 人类8型疱疹病毒 治疗 预后 -
HHV-8感染与PI3K/Akt/mTOR信号转导通路研究进展
近年研究表明,PI3K-Akt/PKB/mTOR信号转导通路是细胞内重要的信号转导通路,脂类激酶PI3K和它的下游靶点Akt,即蛋白激酶B,在各种酪氨酸激酶受体诱导的致癌信号通路中发挥了重要的作用.PI3K/Akt信号通路的成分在人类大多数恶性肿瘤中都发生了改变,尤其在卡波肉瘤的增殖、存活和抵抗凋亡、血管发生中发挥了重要作用.人类8型疱疹病毒(HHV-8)可通过激活PI3K-Akt/PKB/mTOR信号转导通路抑制感染细胞的凋亡,从而维持病毒在人体内的感染和生存.本文就HHV-8与PI3K-Akt/PKB信号转导通路的关系及在卡波内瘤发生、发展中的可能机制作一综述.
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VEGF在头颈部Kaposi肉瘤中的表达及其与HHV-8病毒相关性研究
目的:研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在头颈部Kaposi肉瘤(Kaposi's sarcoma,KS)中的表达,并分析人类8型疱疹病毒(Human Herpesivirus-8,HHV-8)感染对其表达的影响,探讨VEGF与头颈部KS发生发展的关系.方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测3例头颈部KS和3例正常对照组织中VEGF mRNA表达,免疫组化S-P法检测9例头颈部KS和正常对照组织中VEGF蛋白的表达,并用Western blotting检测感染有HHV-8病毒的BCBL-1细胞和未感染HHV-8病毒的BJAB细胞中VEGF蛋白的表达水平.结果:VEGF在头颈部KS中的mRNA和蛋白表达水平均高于正常对照组织(P＜0.05),且VEGF蛋白在BCBL-1细胞中的表达较BJAB细胞高,差异有显著性(P＜0.01).结论:VEGF在头颈部Kaposi肉瘤中高表达,并且其高表达与感染HHV-8密切相关.
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组合抗原ELISA法和潜伏态IFA在HHV-8血清检测中的对比研究
目的 比较HHV-8组合抗原ELISA检测法与潜伏态病毒IFA法的检测灵敏性与特异性,并验证组合抗原ELISA法作为分子流行病学调查方法的可行性.方法 组合抗原ELISA检测法与潜伏态病毒IFA法对32例法国AIDS相关KS患者血清和23例法国肝移植后皮肤癌惠者血清检测对比;组合抗原法对12例新疆地区KS患者血清和不同地区儿童血清进行HHV-8检测,结果 32例KS患者血清组合抗原ELISA与潜伏态IFA的检出效率分别为75.0%和40.6%,其中潜伏态1FA检出的13例阳性血清,12例被组合抗原ELISA成功检出.潜伏态IFA检测阴性的19例KS血清中,组合抗原检出12例阳性血清;23例肝移植后皮肤癌患者血清潜伏态IFA检测全部阴性,而组合抗原ELISA检出1例弱阳性,2方法符合率达95.6%.组合抗原对不同地区小样本血清HHV-8检测显示出不同的结果:新疆地区12例KS血清阳性率100%;儿童血清HHV-8检测结果:新疆地区儿童感染率17.8%,四川儿童1.4%,法国儿童0.结论 该实验室建立的HHV-8组合抗原ELISA法在灵敏性方面较传统方法有明显提高,特异性方面差异较小,HHV-8组合抗原ELISA初步具备分子流行病学调查的灵敏性、特异性要求.
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卡波氏肉瘤病因学的研究进展
卡波氏肉瘤(Kaposi's sarcoma,KS)是一种缓慢进展的软组织恶性多发性色素性血管肉瘤,主要见于皮肤,也可累及内脏.根据临床表现、生物行为及特点不同可分为经典型、艾滋病相关型、非洲地方型、免疫抑制/器官移植相关型[1].KS病因学一直未能确定,KS是AIDS的早期表现之一,也是艾滋病(AIDS)常见的原发性肿瘤和致死原因,鉴于其对AIDS的特殊价值,KS引起广泛关注.现将其病因学的研究进展综述如下.
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经典型Kaposi肉瘤CD164,c-myc的检测
目的 探讨差异表达基因在经典型Kaposi肉瘤(KS)中的作用,为揭示KS的发病机制提供新的思路.方法 采集经典型KS肿瘤组织、来源于同一患者的正常皮肤组织及血清.运用巢式PCR检测是否感染了人类8型疱疹病毒(HHV-8).利用抑制性差减杂交(SSH)技术分析KS肿瘤组织差异基因表达谱.结果 患者HHV-8检测阳性,在KS肿瘤组织中差异表达的基因28条,包括基因CD164,c-myc.结论 基因CD164,c-myc在KS发病机制中可能发挥一定作用,此作用可能与HHV-8病毒感染存在一定的关系.
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新疆地区200例汉族HHV-8重组抗原血清流行病学调查分析
目的:了解新疆地区汉族人群人类8型疱疹病毒(HHV-8)流行状况.方法: 随机选择新疆地区2所三级甲等医院收治的155例汉族肿瘤患者,同时采集45例门诊就诊10岁以下汉族儿童血清,以77例四川儿童血清作为对照.采用组合抗原酶联免疫(ELISA)方法对277例样本血清进行HHV-8特异性抗体的流行病学调查.结果:155例肿瘤患者中41例血清HHV-8抗体呈现阳性反应,阳性率26.5%,45例新疆儿童8例血清阳性,阳性率17.8%,77例四川儿童中1例血清阳性,阳性率1.3%.结论: 新疆地区汉族人群为HHV-8高流行区,儿童感染率高于其他地区,性传播途径可能不是新疆地区普通人群HHV-8主要传播途径.
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人类8型疱疹病毒K8.1基因原核表达重组质粒的构建
目的:构建人类8型疱疹病毒(HHV-8)K8.1基因原核表达重组质粒,获得HHV-8外壳蛋白重组融合蛋白,为制备检测抗原建立平台.方法: 根据基因库K8.1全长基因序列和pET41a载体的多克隆位点设计引物,分别在引物两端添加特异酶切位点,以pGEM-Teasy/K8.1质粒为模板,PCR扩增 K8.1基因全长序列,克隆入原核表达载体pET-41a,构建原核表达质粒pET41a- K8.1;转化大肠杆菌DH5α,经酶切、测序鉴定其插入序列的正确性.结果: 酶切鉴定表明在约500 bp处可见酶切片段,测序结果表明构建的pET41a-K8.1原核表达质粒连接正确,插入的K8.1 基因片断为494 bp.结论: 成功构建了pET41a- K8.1原核表达质粒,为获得重组融合HHV-8外壳蛋白建立了平台.
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实时荧光PCR检测EGFR基因在新疆卡波氏肉瘤中的表达
目的 检测EGFR基因在新疆卡波氏肉瘤(Kaposi's Sarcoma,KS)中的表达并分析其与KS发生发展的关系.方法 应用SYBR Green I作为荧光染料,以GAPDH作内参照,建立检测EGFR mRNA表达的实时荧光PCR反应体系,对经病理活检证实的7例KS肿瘤组织和瘤旁正常组织中EGFRmRNA的表达水平进行检测.结果 KS肿瘤组织中EGFR表达水平低于瘤旁正常组织(t=3.865,P<0.05),并且结果有统计学意义.KS肿瘤组织中EGFR的相对表达量为0.34±0.31,瘤旁组织中为1.24±0.78(P=0.008).结论 所建立的SYBR Green I实时定量PCR方法可以成功地检测EGFR基因的表达量.KS肿瘤组织中EGFR表达水平低于瘤旁正常组织,差异有统计学意义.
关键词： 卡波氏肉瘤 人类8型疱疹病毒 表皮生长因子受体 实时定量聚合酶链反应
