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SELDI-TOF-MS蛋白指纹图谱技术在筛选肺腺癌EGFR突变的相关血清标志物中的应用
目的:分析肺腺癌血清蛋白表达谱的改变,筛选并建立肺腺癌表皮生长因子受体(EFGR)突变组与未突变组的差异表达谱.方法:应用表面增强激光解析电离化飞行时间质谱(SELDI—TOF-Ms)技术,分析100例肺冰冻切片确诊腺癌患者的血清获得蛋白表达图谱,同时将术后标本行PCR及基因检测进行表皮生长因子受体(EFGR)检测获得EGFR突变情况.用Biomarker Pattem(BPs)软件分析肺腺癌EGFR突变组与未突变组差异蛋白并初步建立诊断模型.通过盲筛进一步验证诊断模型.结果:100例肺腺癌EGFR突变组54例,其中EGFR19外显子E746-A750缺失28例,EGFR21外显子L858R点突变26例,未突变46例,分析两组病例血清有7个显著差异的蛋白波峰(P<0.05),其中蛋白质峰为M/Z 2890.91,4614.34、4887.88为3个提示肺腺癌存在EGFR突变的特异波峰.经BPs软件分析,并建立分类树模型.82例样本盲筛验证结果显示,其灵敏度为83.3%,特异度为88.2%.结论:SELDI—TOF-Ms技术可筛选出肺腺癌EGFR突变组蛋白并建立突变组与未突变组诊断的分类树模型,有望成为检测肺腺癌EGFR突变的辅助指标.
关键词： 蛋白指纹图谱技术 精准医学 肺腺癌 表皮生长因子受体(EFGR) -
血液蛋白质组与质谱仪检测流程标准化初探
目的 探讨不同的标本处理和储存条件对蛋白指纹图谱技术检测血清多肽及低分子量蛋白质(1～30 ku)的影响.方法 将血液凝固后马上分离得到的血清分装后分别置于-80 ℃ 6个月以上以及室温、4 ℃条件下2～72 h进行蛋白质质谱分析.结果 血清样本在-80 ℃6个月以上以及4 ℃或者25 ℃保存2 h或者反复冻溶1次,对多肽及低分子量蛋白质的影响相对较小.将血清用U9缓冲液稀释后放置于室温,在24 h内结果稳定.溶血会对蛋白质组的结果造成很大影响.结论 建议血液标本的处理、运送、操作及储存的蛋白质质谱分析的标准条件是:4 ℃下处理血液标本,2 h内尽快分离血清及细胞.用U9缓冲液稀释血清后,可以24 h内在室温下运送或对血清及WCX磁珠结合过程进行操作.血清应分装并长期储存在-80 ℃,但限冻溶1次.溶血标本应弃用,建议重新取血.
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癌胚抗原阴性的结直肠癌检测和结直肠癌预后相关生物标记
目的 探讨结直肠癌的发生、发展过程中患者血清质谱多肽蛋白图谱的变化, 筛选与结直肠癌预后及癌胚抗原(CEA)阴性检测相关的肿瘤标记分子.方法 用蛋白指纹图谱技术检测结直肠癌,结直肠管状腺瘤患者和健康者血清质谱多肽蛋白图谱.结果 初步筛选出对结直肠癌有代表性的7个差异蛋白;2个与其淋巴结转移相关的差异蛋白;4个与其远处转移相关的差异蛋白;3个在其根治性切除后表达下降的差异蛋白;而由3398.3 u、5477.1 u和8453.9 u组成的诊断模型对CEA阴性表达结直肠癌的阳性检测率为100%.结论 蛋白指纹图谱技术可筛选出有意义的生物标记差异蛋白,这对结直肠癌预后判断、CEA阴性的结直肠癌检测和改变结直肠癌的进程具有重要意义.
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应用蛋白指纹图谱技术筛选原发性胆汁性肝硬化患者血清特异性标志物
目的: 探讨蛋白指纹图谱技术筛选原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者血清中可用于诊断的特异性标志物.方法: 采用弱阳离子纳米磁性微球捕获血清中的蛋白,ProteinChip PBSII-C型蛋白质芯片阅读仪检测绘制成蛋白指纹图谱.所有蛋白指纹图谱采用Biomarker Wizard 3.1分析之后用Biomarker Pattems Sofiware 5.0识别终可能用于PBC诊断的蛋白标志物并优化组合建立诊断模型.结果: 在PBC患者和对照组之间找到69个差异蛋白峰(P<0.05).其中质荷比(m/z)为3445,4260,8133和16 290的蛋白峰建立PBC诊断模型.该诊断模型能很好地把PBC患者从其他肝脏疾病患者和正常人群中区分出来,其敏感性为93.3%,特异性为95.1%.经双盲实验验证,该模型对PBC诊断的敏感性为92.9%,特异性为82.4%. 结论: 采用纳米磁性微球与蛋白质芯片阅读仪联用的蛋白指纹图谱技术可以检测PBC患者血清中的特异性蛋白标志物,并建立敏感性和特异性均较高的PBC诊断模型.
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蛋白指纹图谱技术筛选神经精神狼疮的生物标志物
目的 通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)联合弱阳离子交换(WCX)磁珠法分析神经精神狼疮(NPSLE)患者脑脊液蛋白质谱,建立树形分类模型并验证其诊断价值.方法 MALDI-TOF-MS联合WCX磁珠法生成脑脊液蛋白质谱,比较NPSLE治疗前组(27例)与对照组(27例)蛋白质谱,采用t检验、Kruskal-WallisH检验和Wilcoxon检验分析2组间及NPSLE组治疗前后差异峰,建立NPSLE树形分类模型.以独立样本(12例NPSLE、12例腰椎间盘突出和9例其他自身免疫病的中枢神经系统受累患者)肓法检验该树形分类模型对诊断NPSLE的敏感性和特异性.结果 NPSLE治疗前组与对照组、NPSLE治疗前组与治疗后组相比,分别有12个和4个差异峰.以质荷比(m/z) 8595、7170、7661、7740和5806差异峰建立NPSLE树形分类模型,对54例建模组的敏感性和特异性均为92.6％,对33例独立样本盲法检验的敏感性和特异性分别为91.7％和85.7％.结论 本研究首次建立了MALDI-TOF-MS联合WCX磁珠法检测NPSLE脑脊液蛋白质谱的方法,据此建立的NPSLE树形分类模型对诊断NPSLE具有较高的敏感性和特异性.
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应用蛋白质指纹图谱技术快速鉴别诊断菌阴肺结核
目的：探索应用蛋白质指纹图谱技术于菌阴肺结核与肺炎的鉴别诊断。方法从本院临床病例中，选择菌阴肺结核和肺炎患者及健康者各60例，应用表面加强激光解吸电离飞行时间质谱技术（SELDI/ToF-Ms）和蛋白芯片技术检测血清蛋白，并应用Ciphergen蛋白芯片3．1．1软件进行比较，分析其相关蛋白峰值并进行统计学处理。结果对180例菌阴肺结核、肺炎患者、健康者的血清蛋白指纹图谱数据进行比较，发现有5个蛋白峰（1028．49、4796．56、7564．77、8048．02、11526．75 m/z ）存在显著的差异，有统计学意义（ P＜0．01）。由这5个蛋白峰组成的诊断模型鉴别诊断菌阴肺结核与肺炎的总有效率84．2％（101/120），敏感性与特异性分别为82．5％（52/63），85．9％（49/57）；阳性预测值86．7％（52/60），阴性预测值为81．7％（49/60）。诊断模型在判别肺炎、菌阴肺结核患者与健康者之间，总有效率达89．4％（161/180），特异性为100％（60/60），灵敏度为84．2％（101/120），阳性预测值100％（101/101），阴性预测值75．9％（60/79）。结论蛋白质指纹图谱技术具有方法简便、检测快速，标本用量少的优点，是筛选结核病特异性标志物的有效手段，通过蛋白质指纹图谱技术检测，发现了具有良好鉴别诊断的“诊断模型”。
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中国四川一个系统性红斑狼疮家系蛋白指纹图谱的表达研究
目的 研究系统性红斑狼疮(SLE)家系蛋白质指纹图谱的表达,寻找与SLE家族遗传相关的蛋白质标志物.方法 采用弱阳离子纳米磁性微球捕获血清蛋白,ProteinChip PBSⅡ-C型蛋白质芯片阅读仪检测7例中国四川地区SLE家系成员(包括3例确诊SLE患者)、63例散发SLE及83例健康体检者血清蛋白指纹图谱,所有蛋白指纹图谱采用Biomarker Wizard 3.10软件分析.结果 在SLE家系筛选出4个与散发SLE患者和健康对照者有明显差异的蛋白峰,其中质荷比(m/z)为9342.23的蛋白峰在SLE家系高于散发SLE患者和健康对照组(P<0.05),散发SLE患者又高于健康对照组(P<0.05);而m/z为4094.03、5905.35和 7973.53的3个蛋白峰在SLE家系低于散发SLE患者和健康对照组(P<0.05),散发SLE患者又低于健康对照组(P<0.05).结论 m/z为9342.23、4094.03、5905.35和7973.53的蛋白多肽在SLE家族成员致病中可能起重要作用,m/z为9342.23的蛋白表达越高,4094.03、 5905.35和 7973.53蛋白质表达越低,患SLE的危险度越大.这些蛋白可能成为SLE特异标志物,从而预测SLE的患病危险度,同时为SLE的生物治疗提供理论依据.
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食管鳞癌放射抗拒细胞株特征性蛋白指纹图谱的实验研究
目的：探讨食管鳞状细胞癌放射抗拒细胞株特征性蛋白指纹图谱，为进一步的临床研究提供依据。方法：确定食管鳞状细胞癌细胞株（ECa109）的亚致死剂量射线。构建食管鳞状细胞癌放射抗拒细胞株模型（ECa109－IR）。克隆生存实验、细胞增殖实验和流式细胞术检测 ECa109－IR 具有放射抗拒性。将食管鳞癌放射抗拒细胞株（ECa109－IR）与食管鳞癌放射敏感细胞株（ECa109）送至北京进行蛋白指纹图谱的检测。结果：成功构建食管鳞状细胞癌放射抗拒细胞株（ECa109－IR）。克隆生存实验、细胞增殖实验、流式细胞术证实 ECa109－IR 具有放射抗拒性。蛋白指纹图谱表明：ECa109－IR 细胞和 ECa109细胞的蛋白质荷比峰存在明显差异（P ＜0．05的差异峰为21个，P ＜0．01的差异峰为19个），21个差异表达的蛋白质峰中，13个质荷比峰在 ECa109－IR 中表达下调，8个质荷比峰在 ECa109－IR 中表达上调。结论：ECa109－IR 和 ECa109蛋白指纹图谱之间有21个存在明显差异的蛋白峰（即两者之间存在差异蛋白），这些差异蛋白峰可能与肿瘤细胞放射抗拒相关，可为食管癌的临床研究提供依据。本研究的不足之处为未进行差异表达蛋白的分离鉴定，下一步的计划是鉴定具体蛋白，提出食管鳞癌放疗敏感性的预测模型。
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蛋白指纹图谱技术在盆腔结核中的诊断价值探讨
目的 探讨血清蛋白指纹图谱技术在盆腔结核诊断中的应用价值.方法 应用蛋白指纹图谱技术(PFT)检测盆腔结核患者、健康者各25例,以Ciphergen蛋白芯片3.1.1软件比较,分析血清蛋白峰值,筛选疾病相关标志物并进行统计学处理.结果 存在有4个蛋白峰值(8048m/z、5335m/z、11700m/z和11683m/z)为高表达；其组成的诊断模型可以很好的鉴别盆腔结核与健康者,总准确率86％(43/50),特异度100％(25/25),灵敏度72％(18/25),差异有显著性(P＜0.01).结论 血清蛋白指纹图谱检测技术简便、快速,标本用量少,是筛选盆腔结核特异性标志物的有效手段,将成为盆腔结核早期诊断的指标之一.
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社区获得性肺炎蛋白指纹图谱诊断技术研究
目的 探索社区获得性肺炎蛋白指纹图谱的特点. 方法 从本院临床病例中,选择社区获得性细菌性肺炎患者与健康者各60例,进行血清蛋白指纹图谱检测,分析其相关蛋白峰值并进行统计学处理.结果 对60例社区获得性细菌性肺炎患者与60例健康者的血清蛋白指纹图谱数据进行比较,发现有3个蛋白峰(1028. 49、4796. 56、7564. 77m/z)存在显著的差异(P<0. 01). 由此3个蛋白峰组成的诊断模型判别社区获得性细菌性肺炎的总有效率为95. 8%(115/120),特异度为92. 3%(60/65)、灵敏度为100%(55/55)、阳性预测值为91. 7%(55/60)、阴性预测值为100%(60/60). 结论 蛋白质指纹图谱技术具有方法简便、检测快速,标本用量少等优点,可能成为社区获得性肺炎早期诊断的辅助指标.
