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巨噬细胞功能相关的易感基因多态性与结核病相关性的研究进展
宿主巨噬细胞的功能状态将影响Mtb感染后的不同结局,不同个体之间巨噬细胞功能的差异并非只是免疫系统自身调节的结果,还与巨噬细胞功能相关基因的多态性有关,包括影响巨噬细胞杀伤能力的基因、影响巨噬细胞活化能力的基因、影响巨噬细胞凋亡水平的基因等.对巨噬细胞功能相关的易感基因多态性与肺结核易感性的相关性研究所取得的成果进行综述,结果显示:部分巨噬细胞功能相关的易感基因多态性与结核病易感性具有相关性,而且这种相关性不仅存在种族差异,还与结核病的临床类型有关.
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我国结核病基础研究的回顾与展望
结核病基础科研围绕着人体与结核分枝杆菌斗争的方方面面全方位地展开,从结核分枝杆菌的基因组DNA到转录组RNA,从其表达的蛋白质到其代谢的产物,再到结核分枝杆菌对人体的致病作用及人体对其产生的免疫应答,希望寻找出干预的措施、控制的手段.研究内容非常丰富,篇幅所限,难以面面俱到,笔者只是根据中文文献试图阐述我国在细菌学、免疫学、分子生物学、疫苗、新药方面的主要研究和取得的重要进展,也试图指出研究的前景和存在的问题.
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PCR-DS利福平耐药结核分枝杆菌发现rpoB545点突变分析
利福平(rifampin,RFP)的长期与广泛使用,已造成结核分枝杆菌利福平耐药性菌株的广泛存在,对结核病的治疗产生了重要的影响.现已证实结核分枝杆菌的利福平耐药性,同药物作用的靶分子RNA聚合酶β亚基的编码基因rpoB突变有关[1].本文采用套式PCR技术,对获自女性盆腔结核患者及肺结核患者的结核菌株进行PCR扩增及其产物的序列分析,发现rpoB基因545位点突变,现将结果报告如下.
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基于可变数目串联重复序列的痰液结核分枝杆菌检测方法建立及初步应用
目的：结核分枝杆菌散在分布重复单位及可变数目串联重复序列（ MIRU-VNTR）是一项应用于结核分枝杆菌分子分型的技术，本研究基于该技术旨在建立一种直接应用临床痰液标本检测结核分枝杆菌的实验室方法。方法：根据扩增条件及临床检测的实际需要，优化选择八个 MIRU-VNTR 位点（ MTUB21、MTUB04、QUB18、QUB26、QUB11b、MIRU31、MIRU10和MIRU26）作为检测靶标，收集130例肺结核患者和200例非肺结核患者（其他肺部疾病）的痰液样本，分别以传统的罗氏培养法和临床诊断的方法为标准，用MIRU-VNTR分析和荧光定量聚合酶链反应（ FQ-PCR ）对上述样本进行检测。结果：以罗氏培养法为标准时， MIRU-VNTR 的灵敏度为93.1％，特异度为97.7％；FQ-PCR 检测的灵敏度为94.0％，特异度为96.7％，MIRU-VNTR分析与FQ-PCR检测结果准确度差异无统计学意义（χ2＝0.352， P＝0.569）。以临床诊断为标准时， MIRU-VNTR分析的灵敏度为86.9％，特异度为100％；FQ-PCR 检测的灵敏度为87.7％，特异度为99.0％，两种方法检测结果准确度差异无统计学意义（χ2＝0.030， P＝0.862），且MIRU-VNTR分析中未发现假阳性结果。在MIRU-VNTR检测为阳性的结果中，98.2％（111／113）的样本分子编码互不相同，只有1.8％（2／113）分子编码一致（皆为54685538）。结论：应用临床痰液标本建立的基于MIRU-VNTR的结核分枝杆菌快速检测方法有着较好的应用价值。
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几种结核菌感染检测方法在儿童结核性脑膜炎早期诊断中的应用
[目的]比较结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)、结核菌素试验(PPD)、结核抗体、结核杆菌DNA荧光定量检测(TB-DNA)等方法在儿童结核性脑膜炎(TBM)早期诊断中的应用价值.[方法]回顾性分析2012年2月至2013年8月本院收治并明确诊断的TBM及非TBM病例共82例的临床资料.[结果]在几种方法中,TBM组用T-SPOT.TB法检测阳性率约为90.7％,而非TBM组则未检测出阳性结果,其他方法误诊率均较高.[结论]几种结核感染诊断方法中,采用T-SPOT.TB法检测具有明显的优势,在TBM的早期诊断中具有重要的应用价值.
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结核分枝杆菌早期分泌蛋白CFP-10的原核表达
目的 构建结核分枝杆菌(MTB)早期分泌蛋白CFP-10原核表达载体并进行诱导表达.方法 通过PCR技术从结核分枝杆菌H37 Rv基因组中扩增出lhp基因片段,目的基因片段克隆至表达载体pET-32a(+),构建pET-32a-CFP-10重组表达质粒,将其转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达.结果 成功地构建原核表达载体pET-32a-CFP-10,以重组体转化E.coli BL21(DE3),成功进行诱导表达.结论 成功构建CFP10的原核表达质粒,高效表达目的蛋白CFP-10,为进一步研究其免疫学功能奠定了基础.
关键词： 分枝杆菌 结核/遗传学 细菌蛋白质类/遗传学 遗传载体
