首页 > 文献资料
-
转基因动物模型在毒理学中的应用
目的 转基因动物模型是人类疾病研究的一个重要工具,它在毒理学中的应用也非常广泛,可以作为部分传统毒理学方法的替代试验,并具有比传统毒理学方法更广泛的研究价值.转基因动物模型在毒理学中的应用以毒理学机制研究多,其次,在毒理学安全评价、基因功能分析等方面发挥着较大的作用,本综述主要从这三方面来阐述转基因动物模型在毒理学中的应用.
-
大鼠γ谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位基因5'端调控序列初步分析
目的分析大鼠γ谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)催化亚单位(GCLC)基因5'端调控区域和相应转录因子的特性.方法克隆1 760 bp大鼠GCLC上游调控基因并构建含荧光素酶基因的报道载体GCLC-Luc(GCLC/pGL-3),利用外切核酸酶Ⅲ将大鼠GCLC基因的5'端序列单向切成不同长度的缺失体,将所构建的GCLC-Luc及其11个缺失体转染大鼠肺泡上皮细胞,通过测量转染后细胞的荧光素酶活性确定该基因的调控区域,并通过转录因子分析软件分析出可能与这些调控区域结合的转录因子,后通过电泳迁移率改变实验(EMSA)以明确该调控区的顺式元件和转录因子.结果实验成功地克隆出大鼠GCLC上游调控基因及其报道载体GCLC-Luc及GCLC-Luc的11个缺失体.将GCLC-Luc及其缺失体转染肺泡上皮细胞并分析荧光素酶活性:GCLC-Luc(-1 758/+2-Luc),缺失体1(-1 231/+2-Luc),缺失体2(-1 108/+2-Luc),缺失体3(-1 087/+2-Luc),缺失体4(-876/+2-Luc),缺失体5(-745/+2-Luc),缺失体6(-705/+2-Luc),缺失体8(-613/+2-Luc),缺失体9(-595/+2-Luc),缺失体10(-403/+2-Luc)和缺失体11(-111/+2-Luc)的荧光素酶值分别为(90 012±2 445)、(77 652±840)、(149 927±4 915)、(71 588±1 108)、(99 283±2 612)、(75 443±1 438)、(282 772±7 046)、(96 891±2 275)、(148 917±5 966)、(258 991±5 015)和(895±49)U.EMSA证实核因子1(NF-1)、CCAAT/增强子结合蛋白(C/EBP)能与-705～-613 bp区段的序列结合,活化蛋白1(AP-1)、核因子κB(NF-κB)能与-403～-111 bp区段的序列结合,上游刺激因子(USF)能与-745～-705 bp区段的序列结合.结论 GCLC基因的-403～-111 bp和-705～-613 bp区段属正调控区域,NF-1、C/EBP、AP-1、NF-κB等转录因子能与这些正调控区域结合并可能参与GCLC基因的表达调控;-745～-705 bp属负调控区域,USF能与该负调控区域的E-box元件结合,提示E-box与USF相互作用可能抑制GCLC基因的表达.
关键词： 谷氨酰-半胱氨酸连接酶 基因功能分析 氧化性应激 肺疾病 慢性阻塞性 -
关注干细胞研究进展发挥医学影像学在该领域的作用
干细胞研究是一门新兴的学科,干细胞生物学研究与应用几乎涉及所有的生命科学和生物医学领域,除了在细胞治疗、器官移植、基因治疗具有重要作用外,还将在新基因发掘与基因功能分析、新药开发、组织工程等领域发挥重大的影响.因此,随着1998年人胚胎干细胞的分离及体外培养获得成功后,干细胞研究热潮一浪高过一浪.1999年美国<科学>(
)杂志推举干细胞研究为21世纪重要的10项科学领域之首,2000年入选世纪"十大"科技进展,2002年再次入选 杂志的"六大"科技领域. -
基因芯片数据的标准化及分析方法
随着人类基因组计划的发展,编码人类全部染色体的约3～4万条基因被发现,人类基因组计划由此进入后基因组时代,研究重点由发现基因转向探索基因的功能,由此产生了用于基因功能分析的新技术和新方法[1].基因芯片是生物芯片中发展成熟的一种高通量处理技术,它提供了从染色体水平分析基因表达模式的手段,而它所产生的大量数据对数据的分析和信息的提取提出新的挑战,如基因芯片数据的标准化,差异表达基因的鉴别,基因功能的分类,基因间的网络调控模式的分析等.
-
人类甾体生成因子1基因变异体G146A的功能分析
本研究新发现一个人类甾体生成因子1(SF-1)变异体:SF-1-P(G146A, GGG→GCG).与野生型相比,SF-1-P的转录激活活性下降25%,无显性负效应,蛋白稳定性如常,与转录协同因子的相互作用及活细胞亚核分布也无明显异常.等位基因C的分布频率在肾上腺皮质疾患人群明显上升.
-
日本血吸虫一种新腺苷酸激酶全长cDNA的克隆与功能分析
目的对用表达序列标签(Expression Sequence Tag,EST)策略从日本血吸虫尾蚴cDNA文库中筛选出的新基因进行功能预测.方法用NCBI站点的BLASTx及BLASTn程序对所获得的新基因序列进行同源性搜索;用NCBI BLAST站点的blast two sequence程序对同源性高的基因进行核苷酸及氨基酸水平的同源性比较;利用Motif Scan in a Protein Sequence对cDNA序列所编码的蛋白质进行结构域搜索;利用CD-Search程序对目标蛋白进行保守区域搜索.结果发现一个与曼氏血吸虫22 kDa单核苷酸激酶mRNA高度同源的日本血吸虫新基因,基因与氨基酸水平的同一性均分别为86.0%和87.0%;蛋白结构域搜索及保守区域搜索结果显示,该cDNA序列所编码的蛋白质是一种腺苷酸激酶. 结论用EST策略筛选新基因是一个可行的方法,所筛到的日本血吸虫新基因编码一种腺苷酸激酶,全长编码序列与曼氏血吸虫腺苷酸激酶mRNA高度同源.
-
小发夹RNA介导的基因沉默及其应用
0 引言发夹结构的RNA(hairpin RNA)是RNA二级结构中简单的.它是由一条RNA单链自身折叠,形成双链的茎,再加上一条单链的环构成,因此,发夹结构RNA又称为茎-环结构RNA,在整个生物界中普遍存在.近,一类特殊的发夹RNA-小发夹RNA显示参与了转录后基因表达的调控,这些shRNA在基因稳定沉默中起重要的作用.shRNA介导的RNA干扰技术已经成为研究哺乳动物细胞体内外基因功能强有力的工具.
-
磁性对比剂标记的细胞移植研究进展
细胞移植研究是一门新兴的学科,移植细胞的生物学研究与应用不仅在细胞治疗、器官移植、基因治疗上具有重要作用,还将在新基因发掘与基因功能分析、新药开发、组织工程等领域发挥重大的影响.
-
RNAi作用机制研究进展及其应用
RNA干扰(RNA interference,RNAi)是由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)引发的转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing,PTGS)[1].RNA干扰可以简单、有效、特异地下调细胞中基因的表达,它不但是研究基因功能的一种有力工具,而且为特异性基因治疗提供了新的技术手段.本文介绍了目前RNA干扰作用机制,与之相关的酶、蛋白、"扳机点"和调节因子,及RNA干扰在生物学方面的应用.
-
卵巢癌抗增殖基因的研究进展
卵巢癌是威胁妇女生命的常见妇科恶性肿瘤之一,虽然发病率在女性生殖系统恶性肿瘤中居第2位,但由于约70%的卵巢癌临床发现时已属晚期,卵巢癌的死亡率居女性生殖系统恶性肿瘤的首位.肿瘤发生为多步骤过程,包括癌基因的激活和/或抑癌基因的失活作用而导致细胞增殖增强与凋亡受到抑制,卵巢癌的发生亦是与细胞增殖分化相关的癌基因、抑癌基因多阶段相互作用的结果 .基因功能的异常导致肿瘤发生,由于正常细胞在其发生、发展、分化的各阶段均可发生基因异常,这就导致新的治疗策略-基因治疗的产生.基因治疗在肿瘤领域的成功应用为卵巢癌的基因治疗奠定了基础.对于卵巢癌治疗的新探索中,基因治疗令人瞩目,在动物实验及对一些卵巢癌Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期临床患者的研究中取得了一定疗效,成为继手术、化疗、放疗之后全新且前景广泛的一种治疗模式.
