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早期糖尿病视网膜病变模型大鼠玻璃体腔注射安维汀后房水细胞因子变化
背景：关于抑制血管生成药安维汀治疗早期糖尿病视网膜病变大鼠的机制研究多数局限于血管内皮生长因子，而结缔组织生长因子和色素上皮衍生因子也在其中起重要的作用。
目的：探讨安维汀玻璃体腔注射在早期糖尿病视网膜病变模型大鼠应用后房水细胞因子的变化及意义。
方法：经链脲佐菌素诱导10周建立早期糖尿病视网膜病变模型大鼠，分别采用安维汀(1.25，2.5 mg)和生理盐水进行玻璃体腔注射。
结果与结论：ELISA 检测显示，与生理盐水注射组比较，两个安维汀注射组房水中血管内皮生长因子质量浓度降低，色素上皮衍生因子和结缔组织生长因子质量浓度增高(P<0.05)，但两组间上述细胞因子的浓度差异无显著性意义(P>0.05)。结果证实，安维汀玻璃体腔注射在早期糖尿病视网膜病变大鼠应用促进新生血管的细胞因子血管内皮生长因子水平降低，抑制新生血管的细胞因子色素上皮衍生因子质量浓度升高，促进结缔组织生长因子水平升高。 -
构建大鼠白细胞介素1β基因shRNA腺病毒载体
背景：特异性下调白细胞介素1β蛋白的表达可以有效缓解外周神经损伤后病理性疼痛。与siRNA相比，shRNA可以更加稳定、高效地抑制目的基因的表达，但是单纯的shRNA无法高效地进入靶细胞中发挥对目的基因的下调作用，而腺病毒载体具有宿主范围广、感染效率高以及能够在宿主细胞中稳定表达等特点。
目的：构建大鼠白细胞介素1β基因的shRNA腺病毒载体并检测其对目的基因表达的影响。
方法：根据NCBI查询获得的大鼠白细胞介素1β基因序列设计3条 siRNA 并合成相应的 shRNA，分别为shRNA1、shRNA2、shRNA3。采用3’和5’单链退火得到的shRNA片段与经过BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切的pHBAd/U6/GFP干扰载体连接，构建白细胞介素1βshRNA腺病毒载体穿梭质粒。测序后将穿梭质粒与骨架质粒共转染HEK293细胞，进行白细胞介素1β基因的shRNA腺病毒载体(rAd/shRNAs)的包装与扩增，分别为rAd/shRNA1、rAd/shRNA2、rAd/shRNA3。将rAd/shRNAs感染大鼠H9C2细胞，使用荧光显微镜观察其感染效率，采用Western Blot 检测rAd/shRNAs对目的基因表达的影响。
结果与结论：测序结果显示白细胞介素1β基因的3条shRNA腺病毒载体穿梭质粒中的序列分别与所设计的3条 shRNA 序列相同；并成功构建了大鼠白细胞介素1β基因的 shRNA 腺病毒载体(rAd/shRNA1、rAd/shRNA2、rAd/shRNA3)。rAd/shRNA1、rAd/shRNA2、rAd/shRNA3均可以下调白细胞介素1β的表达，其中rAd/shRNA2的下调效果明显。 -
凋亡素原核表达载体构建及活性测定
背景：体外合成或通过基因工程表达的凋亡素 Apoptin 是一种可以特异性地诱导肿瘤细胞凋亡，而对人体正常细胞无毒性和转化活性的蛋白，为抑制肿瘤的生长提供可能。
目的：构建凋亡素基因的原核表达载体，优化诱导蛋白表达的相关条件，检测纯化所得目的蛋白的活性。
方法：将已构建好的凋亡素基因亚克隆至原核表达载体 pET-28b(+)中，将该质粒转化至大肠杆菌E.coli宿主菌中，以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)对其进行诱导表达，聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析目的蛋白，并检测所表达的目的蛋白对肿瘤细胞的增殖抑制作用。
结果与结论：凋亡素基因被成功的克隆至 pET-28b(+)，在26℃、IPTG 0.5 mmol/L诱导8 h的情况下，Apoptin为包涵体表达，表达产物经 SDS-PAGE 分析，在相对分子质量约15000的位置出现目的蛋白条带，大小与预期结果一致，经变复性和亲和层析纯化后，获得高纯度目的蛋白，进一步检测发现其对肺癌细胞 H460及H1299具有一定的促凋亡作用。实验成功构建了凋亡素原核表达载体PET-28b-Apoptin，获得了具有一定生物活性的目的蛋白，为进一步研究凋亡素的功能和开发其应用价值研究奠定了基础。 -
灯盏花素干预糖尿病模型大鼠睾丸组织增殖细胞核抗原和c-fos的表达
背景：有研究表明灯盏花素可影响2型糖尿病大鼠的生殖能力，但其作用机制少有报道。
目的：探讨灯盏花素对2型糖尿病大鼠睾丸增殖细胞核抗原和原癌基因c-fos表达的影响作用。
方法：选取36只健康雄性大鼠随机分为对照组、模型组和灯盏花素组各12只。模型组和灯盏花素组采用链脲佐菌素连续腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型，大鼠血糖监测达到16.7 mmol/L作为建模标准，对照组大鼠予以同等容积的柠檬酸缓冲液单次腹腔注射。灯盏花素组采用灯盏花素注射液10 mg/(kg?d)连续4周腹腔注射，其他2组在相同时间注入等量生理盐水。
结果与结论：干预4周后，血清睾酮检测、免疫组织化学染色和PCR检测结果显示，血清睾酮水平、增殖细胞核抗原、c-Fos蛋白及mRNA表达：对照组>灯盏花素组>模型组(P<0.05)；血糖水平：对照组<灯盏花素组<模型组(P<0.05)。结果证实，灯盏花素可以通过增强增殖细胞核抗原和c-fos的表达，保护2型糖尿病大鼠的生殖功能。 -
体积分数95%乙醇建立薄型子宫模型大鼠子宫内膜中波蛋白和血管内皮生长因子的变化
背景：乙醇化学损伤法能够有效对大鼠子宫进行薄型子宫内膜建模，薄型子宫内膜增殖相关蛋白表达减少，有助于研究薄型子宫内膜相关发生机制，为临床治疗提供指导。目的：探索高浓度乙醇致薄型子宫后子宫内膜中波蛋白和血管内皮生长因子的表达变化。方法：SD雌鼠右侧子宫缓慢注入0.3 mL体积分数95%乙醇建立薄型子宫模型，左侧子宫注入等量生理盐水作为对照侧。结果与结论：与对照侧相比，大鼠损伤侧子宫内膜明显变薄，腺体数量减少，结构紊乱，波蛋白和血管内皮生长因子表达明显降低。说明体积分数95%乙醇损伤可有效建立大鼠薄型子宫内膜动物模型，且与增殖相关的蛋白在薄型子宫内膜中表达出现变化。
