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构建大鼠白细胞介素1β基因shRNA腺病毒载体
背景：特异性下调白细胞介素1β蛋白的表达可以有效缓解外周神经损伤后病理性疼痛。与siRNA相比，shRNA可以更加稳定、高效地抑制目的基因的表达，但是单纯的shRNA无法高效地进入靶细胞中发挥对目的基因的下调作用，而腺病毒载体具有宿主范围广、感染效率高以及能够在宿主细胞中稳定表达等特点。
目的：构建大鼠白细胞介素1β基因的shRNA腺病毒载体并检测其对目的基因表达的影响。
方法：根据NCBI查询获得的大鼠白细胞介素1β基因序列设计3条 siRNA 并合成相应的 shRNA，分别为shRNA1、shRNA2、shRNA3。采用3’和5’单链退火得到的shRNA片段与经过BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切的pHBAd/U6/GFP干扰载体连接，构建白细胞介素1βshRNA腺病毒载体穿梭质粒。测序后将穿梭质粒与骨架质粒共转染HEK293细胞，进行白细胞介素1β基因的shRNA腺病毒载体(rAd/shRNAs)的包装与扩增，分别为rAd/shRNA1、rAd/shRNA2、rAd/shRNA3。将rAd/shRNAs感染大鼠H9C2细胞，使用荧光显微镜观察其感染效率，采用Western Blot 检测rAd/shRNAs对目的基因表达的影响。
结果与结论：测序结果显示白细胞介素1β基因的3条shRNA腺病毒载体穿梭质粒中的序列分别与所设计的3条 shRNA 序列相同；并成功构建了大鼠白细胞介素1β基因的 shRNA 腺病毒载体(rAd/shRNA1、rAd/shRNA2、rAd/shRNA3)。rAd/shRNA1、rAd/shRNA2、rAd/shRNA3均可以下调白细胞介素1β的表达，其中rAd/shRNA2的下调效果明显。
