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Bex2抑制神经胶质瘤细胞凋亡及其与 JNK/MAPK 通路关系的研究
目的：研究 Bex2对神经胶质瘤细胞凋亡的影响并探讨其作用机制，为胶质瘤的基因治疗提供理论和实验依据。方法①利用前期构建 pEGFP-N1- Bex2真核表达载体，脂质体转染法过表达 Bex2后12、24、48、72 h 收集 U251神经胶质瘤细胞，用流式细胞术检测细胞凋亡率，用免疫印迹法检测 Bex2基因的表达及活化型 caspase-3、p-JNK、p-c-Jun 的变化。②收集临床神经胶质瘤手术标本，通过免疫组织化学检测 Bex2、活化型caspase-3、p-JNK、p-c-Jun 蛋白的表达，并与正常脑组织比较，分析它们之间的相关关系。结果①流式细胞术检测结果显示，过表达 Bex2后12、24、48、72 h 各时间点细胞凋亡率明显低于空载体组（P<0.05），转染48 h 组低于其他时间点组（P<0.05）。免疫印迹法检测表明，转染后48 h 细胞的活化型 caspase-3、p-JNK、p-c-Jun 含量较空载体组和空白对照组降低（P<0.05）。②免疫组织化学结果表明，神经胶质瘤组织较正常脑组织中 Bex2表达增高，活化型 caspase-3、p-JNK、 p-c-Jun 蛋白低表达（P<0.05）。结论 Bex2在神经胶质瘤组织中高表达，并通过下调 JNK/MAPK 通路活性抑制胶质瘤细胞凋亡，进而促进肿瘤的发生和发展。
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N-乙酰半胱氨酸防止帕金森病鼠黑质神经元凋亡
目的:研究N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcystein,NAC)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)诱导的帕金森病小鼠黑质神经元凋亡的保护机制.方法:采用MPTP制备帕金森病(Parkinson disease,PD)小鼠模型,应用生化技术检测黑质区域谷胱甘肽(GSH)浓度及超氧化物歧化酶(SOD)活力,用尼氏(Nissl)染色、TH组化染色、活化型Caspase 3组化染色及TUNEL染色观察黑质神经元的损害情况,并计算神经元的凋亡率,同时应用蛋白免疫印迹法检测黑质神经元磷酸化JNK及磷酸化c-Jun蛋白表达水平.另经NAC预处理该模型后,对上述指标进行检测.结果:NAC预处理能提高黑质区域GSH的浓度及降低SOD活力,减轻PD鼠黑质致密带Nissl阳性神经元和TH阳性神经元的脱失现象,减少磷酸化JNK及磷酸化c-Jun蛋白表达水平,使活化型Caspase 3表达减少并降低黑质神经元的凋亡率.结论:NAC能减少MPTP诱导的小鼠黑质神经元凋亡,其机制与抗氧化及阻断JNK细胞凋亡通路的激活有关.
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异氟醚对大鼠脑缺血/再灌注诱导c-Jun磷酸化的影响
目的 观察大鼠脑缺血/再灌注后c-Jun蛋白磷酸化情况以及异氟醚对其的影响.方法 四动脉结扎法建立大鼠脑缺血模型.随机分为假手术组、直接脑缺血/再灌注组、吸入2 h 1.5 MAC异氟醚脑缺血/再灌注组和吸入纯氧2 h脑缺血/再灌注组, 全脑缺血15 min后分别再灌注6 h.再灌注6 h的大鼠进行磷酸化c-Jun(p-c-Jun)的免疫印迹和免疫组化检测.结果 缺血前吸入1.5 MAC异氟醚组大鼠的c-Jun磷酸化水平明显低于直接脑缺血/再灌注组和吸入纯氧2 h脑缺血/再灌注组(P<0.05).结论 异氟醚抑制c-Jun蛋白的磷酸化可能是其对大鼠缺血/再灌注性脑损伤产生保护作用的机制之一.
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人参皂苷 Rg1对帕金森病小鼠黑质多巴胺能神经元凋亡及EphB1、TH、P-c-Jun蛋白表达的影响
目的：观察人参皂苷Rg1对MPTP所致帕金森病（ PD）模型小鼠黑质多巴胺能神经元凋亡及酪氨酸羟化酶（TH）、EphB1和P-c-Jun蛋白表达的影响。方法：将27只C57BL／6小鼠等分为对照组、模型组和人参皂苷Rg1组。腹腔注射人参皂苷Rg1预防给药3 d，腹腔注射MPTP构建PD模型。观察不同时间点小鼠游泳情况。 MPTP给药2周后采用TUNEL染色检测小鼠黑质多巴胺能神经元凋亡情况，采用免疫组化检测黑质EphB1蛋白的表达，采用Western blot检测黑质TH、P-c-Jun蛋白的表达。结果：模型组小鼠不同时间点游泳实验分值低于对照组和人参皂苷Rg1组（P均＜0．05）。模型组黑质多巴胺能神经元凋亡数、EphB1阳性细胞数和P-c-Jun蛋白相对表达量均高于对照组和人参皂苷Rg1组，而模型组黑质TH蛋白相对表达量低于对照组和人参皂苷Rg1组（P均＜0．05）。结论：人参皂苷Rg1可能通过减少黑质多巴胺能神经元凋亡以及降低EphB1、P-c-Jun的表达而改善PD的症状。
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溶血磷脂酸对背根神经髓鞘相关基因Mag和髓鞘形成负性调节转录因子c-Jun表达的影响
目的 探讨单次鞘内注射溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)对背根神经(dorsal root,DR)髓鞘相关基因Mag和髓鞘形成的负性调节转录因子c-Jun表达的影响以及其作用机制.方法 实验1:鞘内注射LPA(1 nmol),在不同的时间点(1h、3h、1d、2d、3d、7d、14d)行髓鞘相关基因Mag的实时荧光定量PCR(Real-time PCR).实验2:鞘内注射LPA(1 nmol),在不同的时间点(1h、3h、6h、24h、3d、5d)行c-Jun、p-c-Jun的Western blot.实验3:预先30 min给予JNK抑制剂SP600125(0.5 μ.g)鞘内注射,再给LPA(1 nmol)鞘内注射,在不同的时间点(20、40、60、120、180 min)行c-Jun的Western blot.结果 (1)给予LPA后1h髓鞘相关基因Mag的mRNA水平明显的降低,一直持续到注射后第7天,但第14天时不明显.(2)给予LPA(1 nmol)鞘内注射之后1h,c-Jun明显升高,一直持续到第3天,但第5天不明显;p-c-Jun也在加LPA后1h明显升高,但只持续到6h,24h不明显.(3)预先30 min给JNK抑制剂SP600125后,不能抑制DR c-Jun的升高.结论 在给予LPA之后DR髓鞘相关基因Mag是下调的;在给予LPA之后髓鞘形成的负性调节转录因子c-Jun和p-c-Jun都是升高的,但c-Jun不是通过经典的JNK-c-Jun通路发挥作用.
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前列腺癌细胞株PC-3经Doc处理后p-c-jun和AR的表达变化
目的 探讨多西紫杉醇的细胞毒性化疗反应的分子机制.方法 对体外的免疫印迹、荧光素酶和细胞生存率进行分析,研究PC-3细胞暴露在多西紫杉醇后p-c-jun的过表达与AR的相互作用.结果 多西紫杉醇治疗PC-3细胞敏感,细胞对多烯紫杉醇的敏感性与p-c-jun水平呈负相关.转染c-jun基因转染到PC-3细胞降低了多烯紫杉醇的敏感性,而转染c-jun和AR基因则可以恢复到中等程度敏感性.p-c-jun与AR蛋白水平之间没有发现直接相关性.对多烯紫杉醇的治疗反应,体内模型的结果与体外研究结果是一致的.结论 p-c-jun可能是多西紫杉醇对前列腺癌治疗的分子机制之一.
