浙江大学学报（医学版）杂志
Journal of Zhejiang University(Medical Sciences) 절강대학학보（의학판）
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变性高效液相色谱分析法在人类基因组单核苷酸多态性检测中的应用
目的:检测白种人和汉族人RDH8基因序列中单核苷酸多态性(SNP)位点,探讨变性高效液相色谱分析法(DHPLC)在基因组研究中的效能.方法:建立8个由白种人和汉族人基因组DNA组成的混合样品池,并进行PCR扩增.其产物以DHPLC检测,发现杂合子信号后,对单独DNA样本进行DHPLC检测及直接测序确定其突变类型.以DHPLC结合DNA样本混合技术在150个汉族人和20个欧洲白种人样本中测定SNP的基因频率.结果:在RDH8基因中共检测到17个SNP,其中12个为新发现的,5个为已报道的;11个SNP在筛查阶段发现,6个在基因频率检测阶段发现;2个仅在白种人样本中检测到,3个SNP的MAF在两种人种间有较明显的差异;汉族人基因频率检测确定了7个常见SNP.结论:DHPLC能有效地用于基因组SNP的检测,结合DNA混合技术,更能提高其检测效力,有效地应用于基因频率的测定.
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初始小剂量L-甲状腺素治疗先天性甲状腺功能低下症疗效研究
目的:探讨左旋甲状腺素替代治疗先天性甲状腺功能低下症(CH)的适剂量.方法:138例CH患儿按总T3(TT3)、总T4(TT4)和TSH的水平分为亚临床型、轻型和重型三组,各组分别给予(3.5±1.0)μg/(kg.d)、(4.3±0.7)μg/(kg.d)、(4.7±0.6)μg/(kg.d)剂量的左旋甲状腺素片,并于1、2、3个月复测血清TT3、TT4和TSH浓度,结合临床表现及时调整剂量;治疗至2岁左右测试发育商.结果:138例患儿左旋甲状腺素起始平均剂量为(4.3±0.9)μg/(kg.d).治疗1个月后各组患儿的平均TT3和TT4水平达正常范围;2个月后TT3和TT4水平达正常范围的上 1/2,临床无甲状腺功能低下的表现,但此时仍有32.6%的患儿TSH水平高于正常范围.治疗后各组临床和生化指标达正常的时间无差异(P＝0.925),三组间的起始剂量有显著性差异(P<0.01);各组间3个月内的平均用药剂量亦有显著性差异(P<0.01).18例患儿治疗至2岁,智力测试平均发育商为116.7±17.0.结论:治疗CH的起始用药剂量以(4.3±0.9)μg/(kg.d)为宜;CH的治疗好根据临床症状和生化指标及时调整药量,做到剂量个体化.
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幽门螺杆菌cagA基因片段原核表达载体的构建及其cagA基因和CagA蛋白及感染者血清抗体的检测
目的:构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)cagA基因片段的原核表达系统,建立ELISA检测CagA及其抗体,了解表达CagA的Hp菌株(CagA+Hp)感染与所致疾病种类的关系.方法:从快速尿素酶试验阳性的156例患者胃黏膜活检标本中分离Hp.采用PCR检测109株Hp cagA基因,并从临床菌株Y06中扩增2 148 bp的cagA基因片段(cagA1).构建cagA1原核表达系统,用SDS-PAGE检查目的重组蛋白(rCagA1)的表达情况,用Western blot和免疫双扩散试验鉴定rCagA1的免疫反应性和抗原性.建立ELISA,检测109株Hp CagA表达和相应患者血清中CagA抗体.分析CagA+ Hp感染与胃炎和消化性溃疡的关系.结果:80.8%胃黏膜活检标本中分离出Hp(126/156),97.2%的Hp菌株(106/109)cagA基因阳性.与文献报道比较,所克隆的cagA1片段核苷酸和氨基酸序列同源性分别为94.83%和93.30%.所构建的原核表达系统表达的rCagA1量约为细菌总蛋白的30.0%.rCagA1能与Hp全菌抗体发生结合反应,免疫家兔产生双扩散效价为1∶4的抗体.92.6%菌株(101/109)可表达CagA,88.1% 患者(96/109)血清CagA抗体阳性.消化性溃疡标本中CagA+ Hp菌株分离阳性率(97.9%)高于胃炎标本(88.5%),但无统计学差异(χ2=3.48,P>0.05).结论:本实验构建的原核表达系统表达的rCagA1有良好的免疫反应性和抗原性,建立的ELISA可用于Hp CagA及其抗体的检测,分离的Hp菌株cagA基因携带率和CagA表达率均很高.消化性溃疡和胃炎与其感染的Hp是否表达CagA无明显关系.
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三维动态增强磁共振血管造影评价肝移植术后血管狭窄的诊断价值
目的:评价三维动态增强磁共振血管造影(3D DCE MRA)对判断肝移植术后血管狭窄的临床应用价值.方法:对20例肝移植术后患者行3D DCE MRA检查,血管显示分级评分及血管吻合口相对于受体吻合口侧血管狭窄程度的测定,并将结果与超声及DSA检查结果对照.结果:3D DCE MRA显示,本组20例患者血管与背景组织对比佳,肝动脉、门静脉、肝静脉及下腔静脉显示良好;肝动脉显示轻度狭窄和正常者11例,中度狭窄者5例,重度狭窄者4例.除1例吻合口重度狭窄者DSA显示中度狭窄外,其余门静脉、肝静脉及下腔静脉吻合口狭窄程度与超声或/和DSA检查结果一致.结论:3D DCE MRA是肝移植术后是否存在血管狭窄的一种有效检查手段.
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牙种植体结合上皮形成的动物实验
目的:观察牙种植体结合上皮形成的组织学过程.方法:HE染色及增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化染色,观察Beagle狗1、3、6、9、12、15、20、30 d共8个时间段的牙种植体结合上皮区.结果:种植术后第12 d在牙种植体周围结合上皮开始形成,PCNA呈强阳性表达;第15 d上皮细胞增生趋于平稳,PCNA表达减弱;第20 d有类似天然牙的结合上皮细胞附着,PCNA维持低水平表达.结论:纯钛牙种植体周围能形成类似天然牙的结合上皮.
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子宫内膜异位症患者血清和腹腔液中白细胞介素-16的检测
目的:探讨白细胞介素-16(IL-16)在子宫内膜异位症(内异症)发病中的作用.方法:应用酶联免疫吸附分析法(ELISA)检测22例不同期别的内异症患者和22例非内异症对照者的血清和腹腔液中IL-16水平.结果:内异症组血清和腹腔液中IL-16水平的中位数分别为290.5 pg/ml和539.4 pg/ml,与对照组(分别为296.6 pg/ml和778.1 pg/ml)比较差异均无显著性(P>0.05).按内异症分期,内异症组Ⅰ期+Ⅱ期患者的血清及腹腔液中IL-16水平均显著高于Ⅲ期+Ⅳ期患者(P<0.05,P<0.01).对照组血清及腹腔液中IL-16水平也均显著高于Ⅲ期+Ⅳ期内异症患者(P<0.05,P<0.01).另外,内异症患者血清IL-16水平与其自身腹腔液中IL-16水平之间无相关性(rs=0.1824,P>0.05).结论:晚期内异症患者的血清和腹腔液IL-16水平降低;IL-16可能参与内异症的发展过程.
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博莱霉素诱导幼兔肺动脉高压病理生理的研究
目的:研究幼兔气管内注射博莱霉素(BLM)后肺动脉高压的发生发展.方法:将1月龄幼兔分为2周对照组和BLM组,4周对照组和BLM组.测定其肺动脉收缩压(PASP)、舒张压(PADP)和平均压(MPAP),观测幼兔肺大体结构和中小肺动脉病理变化、管壁厚度指数(TI)、面积指数(AI),以及肺动脉内皮细胞VEGFmRNA、eNOSmRNA的表达和超微结构.结果:在幼兔气管内注射BLM 2周时,与对照组比PASP为(25.2±7.0 vs 16.5±2.9)mmHg,PADP为(13.1±3.8 vs 8.8±4.2)mmHg,MPAP为(18.4±4.7 vs 12.1±4.0)mmHg,TI为(0.65±0.16 vs 0.52±0.16),AI为(0.84±0.14 vs 0.74±0.17),VEGFmRNA为(0.45±0.11 vs 0.83±0.09),eNOSmRNA为(0.45±0.12 vs 0.79±0.12);4周时PASP为(23.8±7.1 vs 16.7±2.3)mmHg,PADP为(13.8±6.6 vs 7.3±1.5)mmHg,MPAP为(17.6±6.3 vs 11.3±1.9)mmHg,TI为(0.64±0.15 vs 0.52±0.11),AI为(0.85±0.10 vs 0.71±0.15),VEGFmRNA为(0.46±0.15 vs 0.81±0.19),eNOSmRNA为(0.44±0.12 vs 0.89±0.14).结论:1月龄幼兔气管内注射4 U/kg BLM(20 U/ml)2周及4周后,可以导致肺动脉内皮细胞结构发生改变,中小肺动脉管壁增厚、管腔变小,肺动脉压力明显增高,肺动脉内皮细胞VEGFmRNA和eNOSmRNA表达减少.
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遗传性珊瑚状白内障突变晶状体蛋白分子构型及超微结构分析
目的:探讨珊瑚状遗传性白内障家系P23T突变的γD晶状体蛋白与病变晶状体结构的关系.方法:记录晶状体摘除术前的晶状体裂隙灯照片;应用SWISS-MODEL程序,建立人γD晶状体蛋白及其P23T突变体的计算机立体结构模型;透射和扫描电镜观测晶状体提取物.结果:蛋白立体结构模型分析发现,P23T的突变降低了蛋白终分子总势能,使蛋白表面结构发生改变.电镜检查发现,白内障晶状体内有大小不等的结晶片和异常的卵圆形结构,晶状体上皮细胞出现裂解.结论:γD晶状体蛋白P23T突变体可能与晶状体内异常结晶片和晶状体上皮细胞的病理改变有关,其发生机制还有待分子动力学的研究.
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中国一先天性静止性夜盲家系5个已知突变位点的排除
目的:检测中国一常染色体显性先天性静止性夜盲(ADCSNB)大家系相关基因的致病性突变位点及此病临床表型特征.方法:从该家系16名患者和14名正常成员的外周静脉血提取基因组DNA.根据已报道的与ADCSNB有关的3个基因的5个位点的杂合错义突变设计引物,利用聚合酶链反应扩增5个位点所在的外显子,扩增产物纯化后用MegaBACE1000全自动毛细管测序仪测序.利用罗兰视觉电生理检查仪进行全视野视网膜电流图检查.结果:患者暗适应a波正常,b波明显降低.16名患者和14名正常成员在已报道的5个位点均未检测到突变.结论:该家系符合ADCSNB特征,但分子缺陷未涉及这5个位点的点突变或缺失,这显示ADCSNB可能具有遗传异质性.
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PLGA/Ⅰ型胶原复合支架用于组织工程化骨再造的研究
目的:采用PLGA/Ⅰ型胶原复合改良生物支架,构建组织工程化骨组织.方法:采用Ⅰ型胶原和聚乳酸-聚乙醇酸共聚物(PLGA)复合,制作改良的生物支架,将原代培养的成骨细胞接种于复合支架上,培养1周,扫描电镜观察成骨细胞在支架上的生长及黏附情况;同时,将细胞-支架复合体自体异位植入,并取材观察其成骨情况.结果:经鉴定,原代培养的细胞符合成骨细胞的特征;扫描电镜:在生物支架上大量成骨细胞呈簇状生长,并形成多个细胞突起;大体标本:4个月时可见骨块形成;自体异位植入后1个月可见新生骨组织形成,周围有多个活性成骨细胞和骨母细胞,至4个月时骨组织渐趋成熟.结论:Ⅰ型胶原和PLGA复合支架是一种理想的生物可降解支架,可用于组织工程化骨再造的研究.
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溶酶体参与蓖麻毒素A链降解途径的研究
目的:研究溶酶体在蓖麻毒素A链(RTA)细胞内转运过程中的作用.方法:用DNA重组技术,将溶酶体的靶向信号肽KFERQ连接在RTA的羧基端;将构建好的重组质粒pKK223.3-RTA和pKK223.3-RTA-KFERQ转化感受态大肠杆菌JM109,经IPTG诱导表达RTA和RTA-KFERQ蛋白;重组蛋白质用Blue-Sepharose6B亲和柱纯化,以MTT法分别测定纯化后的RTA与RTA-KFERQ蛋白对体外培养的HEPG2(人肝癌细胞)、Hela(人宫颈癌细胞)、A549(人肺癌细胞)3种细胞的毒性作用.结果:在大肠杆菌中成功表达了RTA和RTA-KFERQ.与RTA相比较,纯化的重组蛋白在体外有相似的蛋白质合成抑制活性,RTA-KFERQ对HEPG2、Hela和A549细胞的毒性分别减少了约49.87%、54.18%、88.68%.结论:RTA不能完全被溶酶体灭活,RTA可能存在溶酶体外的降解途径.
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蓖麻毒素的提取及其抗肿瘤作用研究
目的:研究蓖麻毒素的提取方法和对肿瘤细胞的杀伤作用.方法:根据Nicolson和Blaustein的方法稍加改良,通过PBS提取、硫酸铵分段盐析、Sephrose 4B亲和层析和Sephadex G100凝胶过滤等步骤,从去壳蓖麻籽中提取天然蓖麻毒素;采用细胞培养,以MTT法分析不同浓度蓖麻毒素对肿瘤细胞的杀伤作用.结果:用亲和层析和凝胶过滤等步骤提纯的蓖麻毒素,分子量为63 kD,由2个亚基组成.细胞毒性分析:蓖麻毒素在高浓度下(5×10-8mol/L～5×10-10mol/L)对正常细胞和结肠癌细胞的杀伤效率无差异(P>0.05),而在低浓度下(5×10-11mol/L～5×10-13mol/L)两者有显著性差异(P<0.01);各种浓度蓖麻毒素对白血病细胞K562和大肠癌细胞SW480的杀伤作用无统计学上的差别(P>0.05).结论:蓖麻毒素在低浓度下对肿瘤细胞的杀伤有选择性,对白血病细胞K562和大肠癌细胞SW480的杀伤作用在各种浓度下无选择性.
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丝瓜籽核糖体失活蛋白luffin-a基因的克隆和表达
目的:从丝瓜籽中克隆HIV整合酶抑制剂luffin-a基因,并构建其表达载体.方法:根据报道的cDNA序列,用RT-PCR的方法从未成熟的丝瓜籽中克隆luffin-a基因,T-A克隆后鉴定核苷酸序列.构建表达载体pET-44a(+)-luffin-a,转化大肠杆菌BL21(DE3),并经IPTG诱导表达.用透析法对包含体复性;SDS-PAGE鉴定luffin-a表达产物,用MTT法分析其生物学活性.结果:克隆的luffin-a基因与国外报道的核苷酸序列同源性为99.73%,其所编码的氨基酸序列完全一致.经SDS-PAGE分析:luffin-a主要存在于包含体中.MTT法测定:复性后蛋白具有与蓖麻毒素A链相似的细胞毒性.结论:本研究成功地构建了luffin-a的表达系统,所表达蛋白经复性后具有生物学活性.
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蓖麻毒素A链与绿色荧光蛋白基因的融合表达和活性测定
目的:表达蓖麻毒素A链(RTA)与绿色荧光蛋白(GFP)的融合蛋白 (GFP-RTA),用于蓖麻毒素A链在细胞内的转运机理研究.方法:采用PCR法从重组质粒pKK233.2-RTA中扩增出蓖麻毒素A链基因,然而将其插入真核表达质粒pEGFPC1,构成GFP-RTA融合基因;GFP-RTA经PCR扩增,与T载体连接,用内切酶从T-GFP-RTA中切下GFP-RTA片段,插入原核表达质粒pET-28a(+);在BL21(DE3)中表达GFP-RTA融合蛋白,通过金属螯合和层析纯化,MTT法检测融合蛋白的细胞毒性.结果:测序发现插入的融合基因全长序列完全正确,SDS-PAGE鉴定表达产物分子量正确;经诱导表达后,菌体产生绿色荧光,MTT法表明该融合蛋白呈现与RTA相似的细胞毒性.结论:从大肠杆菌表达的蓖麻毒素A链与绿色荧光蛋白的融合蛋白,具有蓖麻毒素A链和绿色荧光蛋白的生物学活性,可用于蓖麻毒素A链在细胞内的转运途径研究.
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活体染毒时藻毒素LR诱导大鼠肝脏P53和Bax蛋白的表达
目的:观察活体情况下微囊藻毒素LR暴露对大鼠肝脏P53、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响.方法:SD大鼠灌胃染毒,运用Western blot检测大鼠肝脏P53、Bcl-2和Bax蛋白表达情况.结果:与对照组相比,除了0.1 μg/kg LR暴露实验组外,其余各实验组P53和Bax表达都明显升高(P<0.05),而且随着微囊藻毒素LR暴露浓度的升高呈升高趋势;Bcl-2表达没有明显的变化.结论:在活体情况下P53和Bax在微囊藻毒素LR诱导的细胞凋亡中可能起重要作用, 而Bcl-2似乎不参与这一过程.
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DNA甲基转移酶与早期胚胎发育
哺乳动物胚胎中存在两种类型的DNA 甲基转移酶(DnmT):一种是维持型的DnmT1,用于保持子代细胞与母细胞相同的DNA特异性甲基化模式;另一种是新发型的Dnmt3,主要负责建立胚胎发育分化过程中的组织特异性甲基化模式,在卵母细胞中母本印记基因的建立等方面也起一定作用.DnmT对胚胎的正常发育至关重要,其表达缺失或异常表达均可导致胚胎、胎儿的发育异常.
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纤维支气管镜在口腔颌面外科困难气管插管中的应用
目的:探讨纤维支气管镜用于口腔颌面外科困难气管插管的效果及临床价值.方法:58例困难气管插管的患者在表面麻醉辅以适当的镇静镇痛的情况下行纤维支气管镜引导下清醒经鼻气管插管.结果:58例患者均一次顺利完成气管插管.结论:应用纤维支气管镜引导下清醒鼻插管,能安全有效地解决口腔颌面外科中的困难气管插管问题.
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腹腔镜肾蒂淋巴管结扎术治疗乳糜尿
目的:探讨腹腔镜肾蒂淋巴管结扎治疗乳糜尿的手术方法和疗效,探索乳糜尿的微创治疗新途径.方法:本组3例5侧乳糜尿患者,均为男性,年龄43～67岁,平均49.7岁;双侧2例,左侧1例;行经腹腔途径腹腔镜下肾蒂淋巴管结扎术.结果:手术均取得成功,无1例改开放手术;单侧手术时间平均72 min,术中平均出血52 ml,术后肠道功能恢复时间20～72 h,平均42.7岁;术后乳糜尿消失,平均住院6 d,随访6～18个月,平均12.6个月无复发.结论:腹腔镜肾蒂淋巴管结扎术具有创伤少、出血少、恢复快、并发症少等特点,而且淋巴管结扎完全、可靠,近期疗效满意.
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卵巢成熟畸胎瘤超声诊断误诊原因分析
目的:探讨卵巢成熟畸胎瘤超声误诊的原因,以进一步提高超声诊断符合率.方法:总结29例经手术及病理确诊为卵巢成熟畸胎瘤的超声图像,分析其误诊原因.结果:超声诊断卵巢成熟畸胎瘤的误诊率为7.0%,其误诊的超声图像可分为4类:①单房或多房囊性块,内液清,共14例(48.3%);②单房囊性块,内液稠或伴不规则强回声,2例(6.9%);③壁立结节征9例(31.0%);④回声杂乱型4例(13.8%).结论:卵巢成熟畸胎瘤壁上头节微小或有神经组织成分时,其超声图像可能不具特征性,易导致误诊,主要误诊为卵巢囊肿和卵巢囊腺瘤,故检查时应特别观察囊内微小结构,寻找卵巢畸胎瘤典型特征,并结合临床检查以进一步提高超声诊断准确性.
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建立小鼠异位心脏移植模型
目的:建立小鼠腹腔异位心脏移植模型.方法:选用建康C57近交系小鼠和BALB/c近交系小鼠,参考大鼠心脏移植Ono式模型,并加以改良.同系移植组(n=20)供、受体均采用BALB/c小鼠;同种异品系移植组(n=20)供体为C57近交系小鼠,受体为BALB/c近交系小鼠.结果:成功建立了小鼠腹腔异位心脏移植模型,供心热缺血时间为(0.9±0.05)min,冷缺血时间为(34.8±0.7)min,手术成功率为90%.同系移植组小鼠心脏移植物获得长期存活(＞100 d);同种异品系移植组小鼠心脏移植物存活期为(7.5±0.1)d.结论:提高供心的摘取技术及受体的血管吻合技术是手术成功的关键.
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天然蛋白毒素的研究和临床应用展望
天然蛋白毒素根据其来源可分为植物、细菌和真菌蛋白毒素等家族.其中,植物蛋白毒素包括有双链结构的毒素和单链核糖体失活蛋白,一般具有N-糖苷酶的活性,可催化核糖体28S RNA的保守位点脱嘌呤,从而失活核糖体60S亚基.细菌蛋白毒素具有结构的多样性,可以失活延长因子2(EF-2)或激活G蛋白,引起细胞功能障碍.毒素一般通过受体介导的内吞作用进入细胞,逆分泌途径进行运输和转位.天然蛋白毒素具有抗肿瘤和抗病毒作用,有良好的临床应用前景.
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对称性坐骨联体畸形一例
对称性联体畸形十分罕见,而坐骨联体畸形所占比例更少.我院2000年收治一例对称性坐骨联体畸形,并成功进行了联体畸形分离术,现总结如下.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
