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重组Klenow-HSA融合蛋白的构建、纯化及其稳定性
目的:提高Klenow酶的热稳定性和储藏稳定性.方法:利用PCR的方法扩增DH5α染色体DNA,构建编码Klenow和人血清白蛋白第三功能区(HSA-D3)的融合蛋白表达质粒,并在大肠杆菌中获得高效表达.分别对Klenow酶和Klenow-HSA融合蛋白进行纯化,并进行活性及稳定性的研究.结果:发现Klenow-HSA融合蛋白在大肠杆菌中呈可溶性表达.体外实验证实这种融合蛋白具有与Klenow聚合酶相同的活性,其稳定性明显提高.结论:融合蛋白确实能增加Klenow酶的热稳定性和储存稳定性,为研制新一代高稳定性Klenow酶提供了基础.
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热休克蛋白融合蛋白对人树突状细胞分化成熟的刺激作用
目的:研究热休克蛋白融合蛋白对人树突状细胞分化成熟的刺激作用.方法:采用GM-CSF和IL-4将人外周血单核细胞诱导成未成熟树突状细胞,然后用热休克蛋白融合蛋白刺激其分化成熟,以单核细胞条件培养液(MCM)和模拟的单核细胞条件培养液(MCM mimic)为对照.以流式细胞仪检测树突状细胞表面分子的表达情况.结果:热休克蛋白融合蛋白可以刺激树突状细胞表面表达CD40、CD80、CD86和HLA-A2分子.结论:热休克蛋白融合蛋白可诱导人树突状细胞分化成熟.
关键词: 树突细胞 热休克蛋白质类 重组融合蛋白质类/生物合成 -
HSA/IL1ra融合蛋白的纯化及生物学活性研究
目的:纯化HSA/IL1ra融合蛋白并对其生物学活性进行检测.方法:采用亲和层析及离子交换层析分离纯化HSA/IL1ra融合蛋白,检测其对IL1引起的对A375 S2的杀伤保护作用.结果:获得的HSA/IL1ra融合蛋白HPLC纯度在98%以上,并且具有与天然IL1ra相似的、对IL1杀伤A375 S2细胞的保护作用.结论:获得高纯度的HSA/IL1ra融合蛋白并且具有相应的生物学活性.
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蓖麻毒素A链与绿色荧光蛋白基因的融合表达和活性测定
目的:表达蓖麻毒素A链(RTA)与绿色荧光蛋白(GFP)的融合蛋白 (GFP-RTA),用于蓖麻毒素A链在细胞内的转运机理研究.方法:采用PCR法从重组质粒pKK233.2-RTA中扩增出蓖麻毒素A链基因,然而将其插入真核表达质粒pEGFPC1,构成GFP-RTA融合基因;GFP-RTA经PCR扩增,与T载体连接,用内切酶从T-GFP-RTA中切下GFP-RTA片段,插入原核表达质粒pET-28a(+);在BL21(DE3)中表达GFP-RTA融合蛋白,通过金属螯合和层析纯化,MTT法检测融合蛋白的细胞毒性.结果:测序发现插入的融合基因全长序列完全正确,SDS-PAGE鉴定表达产物分子量正确;经诱导表达后,菌体产生绿色荧光,MTT法表明该融合蛋白呈现与RTA相似的细胞毒性.结论:从大肠杆菌表达的蓖麻毒素A链与绿色荧光蛋白的融合蛋白,具有蓖麻毒素A链和绿色荧光蛋白的生物学活性,可用于蓖麻毒素A链在细胞内的转运途径研究.