中国生物制品学杂志
Chinese Journal of Biologicals 중국생물제품학잡지
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
- 影响因子： 0.41
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1004-5503
- 国内刊号： 22-1197/Q
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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烟酰胺腺嘌呤二核苷酸与氢氧化铝联合佐剂对HBsAg诱导小鼠体液免疫应答的影响
目的 研究烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(Nicotinamide adenine dinucleotide,NAD)与氢氧化铝联合佐剂对HBsAg诱导小鼠体液免疫应答的影响.方法 将NAD与氢氧化铝按不同剂量联合后,与不同剂量的HBsAg混合,分别经肌肉注射免疫ICR小鼠1针或2针(间隔2周),每只注射0.2ml,并设阴性对照组(生理盐水)、单纯抗原对照组、单纯铝佐剂对照组和单纯NAD对照组,共23组,每组6只.分别于末次免疫后2、4、6、8、10、12周采血,分离血清,采用ELISA法检测小鼠血清中抗HBsAg IgG水平;试验期内,观察小鼠是否发生异常状况;14周后,取佳剂量免疫组及阴性对照组小鼠心、肝、脾、肺组织做组织切片,进行病理分析.结果 阴性对照组在各时间点均未检测到抗HBsAg IgG抗体,除联合佐剂12组外,其余各组血清抗HBsAg IgG抗体水平均在末次免疫后第6周达峰值,随着时间的延长,抗体水平呈下降趋势;联合佐剂14组(HBsAg 2 μg+氢氧化铝100 μg+NAD 2.5μg)产生的抗体水平高,且持续时间较长,其对HBsAg的体液免疫增强效应显著优于单纯抗原对照组、单纯铝佐剂对照组及单纯NAD佐剂对照组(P＜0.05).试验期内,各组小鼠均未出现异常反应;佳剂量免疫组(14组)及阴性对照组组织切片观察结果显示,均为发生病变.结论 NAD与氢氧化铝联合佐剂能显著增强HBsAg诱导的小鼠特异性体液免疫应答,在免疫剂量范围内,联合佐剂安全性良好.
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氢氧化锌胶体与三磷酸腺苷二钠联用对狂犬病疫苗诱导小鼠体液免疫应答的增强作用
目的 制备氢氧化锌[Zn(OH)2]胶体,并检测其单独或与三磷酸腺苷二钠(Disodium adenosine tripho-sphate,简称ATP)联用对狂犬病疫苗诱导小鼠体液免疫应答的增强作用.方法 采用葡萄糖酸锌作为锌源,与NaOH反应制备Zn(OH)2胶体溶液,对其进行纯化及检测,并进行小鼠急性毒性试验;将不同剂量的Zn(OH)2胶体单独或与不同剂量的ATP联用,与狂犬病疫苗(0.25 IU)混合,免疫ICR小鼠,并设生理盐水对照组和抗原对照组,每组8只,Zn(OH)2和Zn(OH)2+ ATP和生理盐水对照组采用单次免疫,抗原对照组分别免疫1、2、3、5次,分别于初次免疫后4、8、12、16周采血,分离血清,检测血清中抗狂犬病病毒特异性IgG抗体水平.结果 所制备Zn(OH)2胶体溶液大吸收波长为213nm,可观察到明显的丁达尔现象,浓度为6 mg/ml,经光学色差显微镜及扫描电镜观察合格,小鼠急性毒性试验未观察到急性毒副作用.大部分佐剂组抗体水平高于抗原单次免疫组,但均未达到抗原5次免疫组水平;0.27和0.21 mg Zn(OH)2组在初次免疫后8周内有高水平抗体产生;0.27 mg Zn(OH)2组在初次免疫后16周出现抗体水平反弹性升高;0.18 mg Zn(OH)2+1.0 mg ATP组和0.18 mg Zn(OH)2+0.5 mg ATP组在初次免疫后4周内产生的抗体水平较高,之后逐渐下降;2次和3次免疫抗原对照组在初次免疫后8周内,其抗体水平不及佐剂组.结论 所制备的Zn(OH)2胶体佐剂单独或与ATP联用均可增强狂犬病疫苗诱导小鼠特异性体液免疫应答,且安全性良好,有望应用于疫苗生产.
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双启动子双报告基因真核表达质粒的构建及表达
目的 构建双启动子双报告基因真核表达质粒,并在293T细胞内进行表达.方法 分别以pEGFP-N1和pDsRed-Nl为模板,PCR扩增EGFP和DsRed基因,插入表达载体pCI中,分别构建重组表达质粒pCI-EGFP和pCI-DsRed,利用载体上BglⅡ和BamH Ⅰ为同尾酶的特点,将两个表达质粒酶切后拼接,构建双启动子双报告基因重组真核表达质粒pCI-cmvDsRed-cmvEGFP,转染293T细胞,荧光显微镜观察EGFP和DsRed的表达,Western blot和流式细胞术检测EGFP和DsRed蛋白的表达.结果 重组真核表达质粒pCI-cmvDsRed-cmvEGFP经酶切鉴定和测序证实构建正确,两启动子为顺向相连;EGFP和DsRed蛋白在293T细胞中可同时正确表达.结论 成功构建了双启动子双报告基因真核表达质粒,并在293T细胞中表达,为实现两种外源基因在真核细胞内的同步表达及示踪提供了有效的分子工具.
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野生型着丝粒蛋白-E基因沉默对人结肠癌HCT116细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响
目的 利用RNA干扰技术下调野生型着丝粒蛋白E(Wild type centromere protein E,CENP-EWT)基因的表达,观察CENP-EWT基因沉默对结肠癌HCT116细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响.方法 将HCT116细胞分为空白对照组、空载体转染组和CENP-EWT shRNA转染组,转染48 h后,采用巢式PCR检测细胞中CENP-EWT基因mRNA的转录水平;MTT法检测细胞的增殖活力;Hoechst法检测细胞的凋亡比例;Transwell小室试验检测细胞的迁移和侵袭能力.结果 与空白对照组和空载体转染组相比,CENP-EWT shRNA转染组可有效抑制CENP-EWT基因的转录水平(P＜0.05);CENP-EWT shRNA转染组细胞的增殖活力明显下降(P＜0.05);细胞凋亡比例明显增加(P＜0.01),细胞的迁移和侵袭能力明显增强(P＜0.01).结论 CENP-EWT基因沉默能够抑制人结肠癌HCT116细胞增殖,诱导细胞凋亡,但同时能增强细胞的迁移和侵袭能力.
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我国狂犬病流行毒株JX08-45适应细胞培养后的生物学特性
目的 鉴定我国狂犬病流行毒株JX08-45适应细胞培养后(命名为JX08-45CC株)的生物学特性.方法 通过全基因组序列分析比对、小鼠脑内和外周攻毒试验和免疫原性试验,分别对JX08-45CC株的基因组特点、毒力和免疫原性进行鉴定.结果 JX08-45CC株的基因组序列与JX08-45株比对,共出现16个核苷酸突变点和7个氨基酸突变点,其中6个氨基酸变异发生在G蛋白(333位精氨酸未改变)编码区,L蛋白仅有1个氨基酸突变;在G蛋白氨基酸变异中,4个突变序列在其他细胞适应毒株CVS-11、CTN-1、Nishigahara、SAG2、Flury-LEP和SRV9中也普遍存在.JX08-45CC株培养滴度≥107TCID50/ml时,脑内接种小鼠的致死率为100％,滴度为102～106 TCID50/ml时,脑内接种小鼠的致死率为20％～80％;滴度为105 ～ 108 TCID50/ml时,外周肌肉接种小鼠,致死率为10％ ～ 70％;脑内和外周攻毒小鼠的潜伏期均为7～9 d,并于发病后24 ～ 48 h死亡.JX08-45CC株与狂犬病病毒CVS-11、ERA、SRV9和Flury-LEP株的中和抗体滴度差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 已对JX08-45CC株的基因组序列、毒力和免疫原性等生物学特性进行了鉴定,为开发具有我国自主知识产权的兽用狂犬病灭活疫苗候选株奠定了基础.
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Ⅳ型登革病毒中国株LD34在KMB17细胞上的适应性及其生物学特性
目的 研究Ⅳ型登革病毒中国株LD34在人胚肺二倍体细胞KMB17上的传代适应性及其生物学特性.方法 将Ⅳ型登革病毒中国株LD34在C6/36细胞上扩增,并采用微量细胞病变法测定病毒的感染性滴度.以2.0 MOI的病毒接种KMB17细胞传代培养,筛选KMB17细胞适应株,并进行培养条件的优化.将Ⅳ型登革病毒中国株LD34 KMB17细胞适应株连续传10代,测定病毒的感染性滴度,免疫荧光法检测病毒的抗原性,RT-PCR法扩增登革病毒的特异性基因.结果 筛选出的Ⅳ型登革病毒中国株LD34在KMB17细胞上的佳培养条件为病毒接种MOI 0.4,培养基血清浓度5％;其感染KMB17细胞后可产生明显的细胞病变(CPE),连续传10代,病毒滴度达7.75 CCID50/ml;第10代病毒的抗原性呈阳性;第10代病毒能扩增出511 bp的登革病毒特异性基因和393 bp的Ⅳ型登革病毒特异性基因.结论 获得了Ⅳ型登革病毒中国株LD34 KMB17细胞适应株,病毒保持了原始毒株的基本生物学特性,且具有较好的抗原性.
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中蜂囊状幼虫病毒LN-QY株VP3蛋白空间结构及其B细胞抗原表位的预测
目的 预测中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV )LN-QY株VP3蛋白的空间结构及其B细胞抗原表位.方法 采用RT-PCR法从感染CSBV的蜜蜂幼虫总RNA中扩增结构蛋白VP3基因,与pMD18-T载体连接后,转化感受态大肠杆菌DH5α,提取质粒,双酶切鉴定并测序,通过与SBV-KOR、CSBV-UK株VP3基因序列的比对,获得LN-QY株VP3基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列,建立VP3蛋白的3D结构.在此基础上,应用DNAStar软件中的Protean模块综合分析结构蛋白的柔性区域、亲水性、表面可能性以及抗原指数等参数.结果 VP3结构蛋白的空间构象较规则,其可能的B细胞抗原表位区域位于4个区域:25-50,101-109,112-120,250-268氨基酸区段,其中,可能出现抗原表位的2个区域在100-150和250-300氨基酸区段,应作为抗原表位研究的重点区域.结论 预测了CSBV LN-QY株VP3蛋白的空间结构及其B细胞抗原表位,为CSBVVP3蛋白单克隆抗体的制备以及表位疫苗的设计奠定了理论基础.
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翻译调控肿瘤蛋白的原核表达及纯化
目的 原核表达并纯化翻译调控肿瘤蛋白(Translationally controlled tumor protein,TCTP).方法 以人乳腺癌细胞系MCF-7总RNA为模板,PCR扩增TCTP基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.His Trap FF层析柱纯化重组蛋白后,进行Western blot鉴定.结果 克隆的目的基因序列正确,未发生碱基突变;重组表达质粒经双酶切鉴定构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为20 000,主要以包涵体形式表达;纯化后纯度为80％,可与兔抗人TCTP多克隆抗体特异性结合.结论 已成功在大肠杆菌BL21(DE3)中表达并纯化了TCTP,为进一步研究其在肿瘤等疾病发生、发展及治疗中的作用奠定了基础.
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DNA聚合酶中宿主细胞核酸残留的分析
目的 分析市售不同厂家DNA聚合酶中的宿主细胞核酸残留.方法 根据E coli 16S rRNA基因序列设计特异引物及探针,建立基于Taqman探针技术的Real-time PCR检测方法,检测基因工程制品中E.coli的核酸残留.结果 建立的Real-time PCR法检测市售不同厂家的DNA聚合酶中均有宿主细胞E.coli核酸残留,但不同来源的DNA聚合酶其宿主细胞核酸残留量不同.结论 应用PCR方法检测基因工程产品,尤其是E.coli制备的生物制品时,应注意DNA聚合酶中核酸残留对检测结果的影响;应用Real time PCR法定量检测时,建议将Ct值控制在30以内,以减小DNA聚合酶背景残留物的影响.
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非灌流法分离大鼠肝星形细胞及其鉴定
目的 采用非灌流法分离大鼠肝星形细胞(Hepatic stellate cell,HSC),并进行鉴定.方法 采用非灌流法结合酶消化法分离大鼠肝脏细胞,密度梯度离心进一步分离HSC,油红染色检测HSC胞质中的脂滴,免疫组化法检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-Smooth muscle actin,α-SMA)、结蛋白(Desmin)及神经胶质酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达.结果 非灌流法结合酶消化法可成功分离大鼠HSC;密度梯度离心纯化的HSC经油红染色,细胞核周围可见红色脂滴;该细胞中α-SMA、结蛋白及GFAP的免疫组化染色结果均呈阳性,细胞着色率可达90％以上.结论 成功建立了大鼠HSC的非灌流分离模式,所获得的HSC纯度较高,该方法稳定简便,具有一定的推广应用价值.
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诊断用鼠疫噬菌体悬液制备方法的改进及其应用
鼠疫噬菌体裂解试验是经典的鼠疫病原学诊断方法之一,也是鼠疫病原学"四步检验"中主要的一项检验.在现行的鼠疫诊断标准中,仍将鼠疫噬菌体裂解试验的结果作为鼠疫菌的判定依据[1].在鼠疫诊断试验中所采用的特异性噬菌体为(φ)A1122噬菌体,其可以生长在几乎所有分离的鼠疫菌上,用此噬菌体制备的噬菌体悬液效价的高低直接影响着噬菌带的宽窄及噬菌完全程度,也影响试验结果的判定,这充分表明制备高效价噬菌体悬液的重要性.
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A群脑膜炎球菌荚膜多糖排溢法ELISA的建立及初步应用
目的 建立A群脑膜炎球菌荚膜多糖(Group A meningococcal polysaccharide,GAMP)排溢法ELISA,并进行验证及初步应用.方法 采用改良过碘酸盐氧化法制备抗GAMP-HRP.以抗GAMP单克隆抗体包被酶标板,抗GAMP-HRP作为酶标抗体,建立检测GAMP的排溢法ELISA.采用棋盘滴定法确定包被抗体及酶标抗体的佳工作浓度,并对其特异性、敏感性及重复性进行验证.采用建立的排溢法ELISA检测GAMP-TT系列层析样品中的GAMP抗原活性,并与传统一步法ELISA及二步法ELISA进行比较.结果 建立的排溢法ELISA的包被抗体佳浓度为20 μg/ml,酶标抗体佳工作浓度为1:128.该方法的特异性良好,敏感性与一步法和二步法相当,批内和批间变异系数与一步法相当;该方法检测GAMP-TT层析样品中的GAMP抗原活性的结果与二步法ELISA基本一致.结论 排溢法ELISA的操作步骤与一步法ELISA大致相似,但较二步法ELISA显著简化,其对一步法ELISA中Hooks效应的纠正效果与二步法ELISA相同.
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乙型脑炎减毒活疫苗皮下感染入脑试验半定量检测法的方法学验证
目的 采用半定量法对乙型脑炎减毒活疫苗皮下感染入脑动物试验进行方法学验证.方法 引入逐日观察打分的方法,将皮下感染入脑试验由定性转变为半定量动物试验,验证该方法的精密度(重复性)、中间精密度、准确度、特异性.结果 皮下感染入脑试验半定量检测方法具有良好的精确度(重复性),中间精密度及特异性.各项验证参数均达到预先设定的可接受标准.结论 该方法与用途一致,且与供试品相适宜,可用于乙型脑炎减毒活疫苗的质量控制.
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重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白受体结合活性检测方法的改进
目的 对重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体(Tumor necrosis factor receptor,TNFR)-抗体融合蛋白的受体结合活性检测方法进行改进.方法 采用夹心ELISA法对系列稀释的重组人Ⅱ型TNFR -抗体融合蛋白供试品和参比品进行检测,通过四参数方程拟合,计算二者的半数有效浓度(EC50),分析其受体结合活性.对改进的方法进行精密性和准确性验证,并与原方法进行比较.结果 重组人Ⅱ型TNFR-抗体融合蛋白供试品和参比品均存在量效关系,符合四参数方程y=(A - D)/[1+(X/C)B]+D;3批重组人Ⅱ型TNFR-抗体融合蛋白经3次测定,受体结合活性分别为(133±8)、(114±4)和(138±9)BU,符合其质量标准中受体结合活性65～135 BU的规定,变异系数分别为6.02％、3.51％和6.52％;1批供试品经3次重复测定,回收率为(107.67±7.50)％;3批供试品采用原方法和改进方法分别重复测定3次,受体结合活性差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 改进的方法精密性好,准确性高,可作为重组人Ⅱ型TNFR-抗体融合蛋白受体结合活性的常规检测方法.
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低pH胃蛋白酶-甲苯消化法灭活破伤风免疫血浆中脂包膜病毒效果验证
目的 验证低pH条件下胃蛋白酶-甲苯消化法对不同核酸类型的脂包膜病毒的灭活效果.方法 以水疱性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)作为RNA指示病毒,以伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)作为DNA指示病毒,将破伤风免疫血浆样品经低pH(3.2±0.2)、0.2％甲苯、6～ 12活力单位胃蛋白酶处理后各取27 ml,分别加入3 ml指示病毒(9:1),在(30.0±1)℃水浴中分别振摇10、30、60、90 min灭活病毒.以Vero细胞、PK-15细胞为基质,采用96孔细胞病变法检测残余病毒滴度,验证病毒灭活效果.结果 破伤风免疫血浆样品经低pH胃蛋白酶及甲苯消化处理90 min后,VSV和PRV两种指示病毒的灭活效果分别为3.12～3.88和5.25～5.38 logTCID50/0.1 ml.结论 采用低pH胃蛋白酶-甲苯消化法对破伤风免疫血浆中PRV灭活效果较好,而对VSV灭活效果有待提高.
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家禽类白细胞介素-2的研究进展及其应用前景
白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)是一种由T淋巴细胞分泌的T细胞生长因子,具有多种免疫调节功能和生物学活性.随着分子生物学、免疫学理论和技术的发展,应用重组表达技术生产IL-2已成为目前研究的热点.本文主要对家禽类IL-2基因的克隆、重组表达、纯化及其免疫活性等方面的研究进展作一综述,并对其应用前景进行展望.
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单克隆抗体治疗卵巢癌的研究进展
卵巢癌是妇科恶性肿瘤致死率高的癌症.近年已开始应用单克隆抗体药物治疗卵巢癌,其优点是可避免传统化疗方法引起的正常组织细胞毒作用.目前,国内外学者已开展了单克隆抗体治疗卵巢癌的应用价值评估.其中,多种单抗药物在Ⅰ/Ⅱ期临床研究中显示出良好的抗癌作用.本文就单克隆抗体药物治疗卵巢癌作一综述.
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卡他莫拉菌抗原的研究进展
卡他莫拉菌(Moraxella catarrhalis,MC)是人体特有的病原菌,可引起上下呼吸道感染.随着多价肺炎球菌及b型流感嗜血杆菌多糖结合疫苗在很多国家相继列入免疫计划,使得研制有关MC疫苗成为当务之急.近年来,MC疫苗的研发处于抗原筛选阶段,筛选的候选疫苗抗原主要集中在病原菌细胞表面的保守性抗原表位.目前所有候选抗原均是基于动物实验来筛选的.本文对近年卡他莫拉菌候选抗原的研究进展作一综述.
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口含低剂量干扰素α的免疫调节作用
Ⅰ型干扰素α(Interferonα,IFNα)和β(Interferon β,IFNβ)除了具有较强的抗病毒作用外,在对自身或外来抗原的免疫调节中也起着重要作用.本文对口含低剂量IFNα在局部和系统免疫调节中的作用作一综述.
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痘苗病毒滴度测定用国家标准品的制备
目的 制备病毒载体疫苗滴度测定用国家标准品.方法 以鸡胚成纤维细胞制备痘苗病毒,经密度梯度超速离心纯化后,加入天花疫苗保护剂,分装冻存,分发至我国4个不同实验室,按照统一的结晶紫染色蚀斑法实验方案进行协作标定,每次实验稀释后取2个稀释度,每个稀释度设5个平行孔,计算各实验室检测结果的几何均数,对标准品中痘苗病毒滴度进行赋值.检测病毒标准品于不同温度下保存不同时间的稳定性,并对病毒标准品的各项质量指标进行检定.结果 4个实验室共测定44次,4个实验室间的检测结果差异无统计学意义(P＞0.05),各实验室检测结果的几何平均数为3.05×106 PFU/ml,95％CI为2.00×106～4.65×106 PFU/ml,标准差为0.09,总变异系数1.41％.制备的痘苗病毒标准品于4℃可稳定放置10 d,37℃放置稳定性较差.制备的痘苗病毒标准品装量检查合格(1 ml/支);pH值为6.9;无菌试验合格;分装重量精密性为0.95％.结论 制备的痘苗病毒标准品可作为痘病毒载体疫苗滴度测定用标准品.
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产肠毒素大肠杆菌K88菌毛蛋白与大肠杆菌不耐热肠毒素b亚单位的原核表达及其鼻腔免疫效果
目的 原核表达产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)K88菌毛蛋白与大肠杆菌不耐热肠毒素(Heat-labile enterotoxin,LT)b亚单位(LTb),并评价其鼻腔免疫效果.方法 采用PCR技术分别扩增不含信号肽的K88和LTb基因,克隆至表达载体pQE30中,构建重组表达质粒pQE30-K88和pQE30-LTb,转化大肠杆菌M15,IPTG诱导表达.表达的重组K88和LTb蛋白纯化、复性后,进行SDS-PAGE分析.分别用K88单独、K88联合LTb滴鼻免疫BALB/c小鼠,以生理盐水作为对照,每次间隔1周,共4次,末次免疫后10d,分离血清,并收集鼻腔和小肠黏膜冲洗液,间接ELISA法检测各组血清特异性IgG和黏膜sIgA抗体水平.结果 重组表达质粒pQE30-K88和pQE30-LTb经双酶切和测序证实构建正确;表达的重组K88和LTb蛋白相对分子质量分别为28 100和12 500,表达量分别约占菌体总蛋白的35％和40％,主要以包涵体形式存在;纯化复性后的重组蛋白纯度均可达95％以上.K88联合LTb滴鼻免疫组血清特异性IgG及鼻腔、小肠黏膜冲洗液中特异性SIgA水平均较K88单独免疫组和对照组明显增高,且差异有统计学意义(P＜0.01).结论 在大肠杆菌中高效表达并纯化了重组K88和LTb蛋白,K88联合LTb滴鼻免疫BALB/c小鼠后,可增强特异性血清抗体反应,且诱导了黏膜免疫应答,为将来开发新型的ETEC基因工程疫苗奠定了基础.
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C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗制备工艺的优化
目的 优化C群脑膜炎球菌多糖-破伤风类毒素(Tetanus toxoid,TT)结合疫苗的制备工艺.方法 分别采用衍化的降解多糖与TT结合、衍化TT与降解多糖结合和1-氰基-4-二甲基氨基吡啶·四氟化硼(CDAP)活化降解多糖后衍化再与TT结合的方法制备C群脑膜炎球菌多糖蛋白结合物PSAH-TT、PS-AHTT和PSCDAPAH -TT,并进行生化指标和抗原性检测,与溴化氰(CNBr)活化多糖衍化与TT的结合物PSCNBrAH-TT进行免疫原性比较,确定适制备工艺,并制备2批结合疫苗,与市售疫苗进行免疫原性比较.结果 3种方法制备的多糖蛋白结合物生化指标存在差异,以PSCDAPAH-TT收率高,且均保持了多糖的抗原性及免疫原性,并有免疫加强效应;PSCDAPAH-TT免疫2针后抗体GMT水平高于PSAH-TT和PS-AHTT,差异有统计学意义(P＜0.05),3针后抗体GMT水平仍高于PSAH-TT和PS-AHTT,但差异无统计学意义(P＞0.05),PSCDAPAH-TT免疫2针和3针后抗体GMT水平均高于PSCNBrAH-TT,且2针后差异有统计学意义(P＜0.05),3针后差异也无统计学意义(P＞0.05),但制备的2批PSCDAPAH-TT疫苗免疫2针和3针后的抗体GMT水平均明显高于市售疫苗,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 经CDAP活化降解多糖后衍化再与载体蛋白结合制备的疫苗具有较好的免疫原性.
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产肠毒素大肠杆菌987P菌毛蛋白FasA亚单位的原核表达及其免疫原性
目的 表达、纯化产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC) 987P菌毛蛋白FasA亚单位,并检测其免疫原性.方法 将去掉5′端信号肽序列的fasA基因克隆至原核表达载体pQE-30中,构建重组表达质粒pQE-30-fasA,转化E.coli M15,0.5 mmol/L IPTG诱导表达.表达的融合蛋白6×His-FasA经Ni-Agarose His纯化和复性后,经皮下多点注射免疫BALB/c小鼠,每次100 μg,共免疫3次,间隔2周,末次免疫10 d后,摘除小鼠眼球取血,分离血清,采用间接ELISA法检测抗血清效价.结果 重组表达质粒pQE-30-fasA经PCR、双酶切和测序证实构建正确;表达的6×His-FasA融合蛋白相对分子质量约为18 500,主要以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的30％;纯化的蛋白纯度可达95％,浓度为0.6 mg/ml,免疫小鼠所得抗血清效价为1:125 000.结论 已成功在E.coli M15中表达了6×His-FasA融合蛋白,纯化的融合蛋白免疫原性良好,为进一步研制以双歧杆菌为表达系统的新型ETEC亚单位口服疫苗奠定了基础.
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复合疫苗佐剂促进蛋白抗原通过交叉提呈和交叉致敏诱生CD8+CTL反应的研究
目的 研究CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG-oligodeoxynucleotides,CpG-ODN)与Al(OH)3或Montanide ISA720等组成的复合佐剂在小鼠体内促进蛋白抗原通过交叉提呈和交叉致敏诱生CD8+ CTL反应的能力.方法 以鸡卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)为抗原,分别以CpG X1、Al(OH)3(即Alum)、Montanide ISA720、CpG X1+Alum和CpG X1+Montanide ISA720为疫苗佐剂,分别于0和4周经肌肉注射免疫C57BL/6小鼠,体积均为100μl,分别含20 μg OVA、20 μg CpG X1、74μl Montanide ISA720和/或100 μg Alum.通过胞内细胞因子染色和体内CTL杀伤试验评价不同佐剂对细胞免疫应答的影响,通过表达OVA的黑色素瘤和李斯特菌攻击模型评价不同佐剂在免疫预防和免疫治疗中的作用.结果 与OVA组相比,Al(OH)3本身不能有效诱生小鼠的细胞免疫应答;CpG X1或Montanide ISA720单独使用能够在一定程度上增强抗原特异性CD8+T细胞的IFNγ分泌和CTL活性,但不增强抗原特异性CD4+T细胞反应.两种复合佐剂具有比单佐剂更强的细胞免疫佐剂效应,其中CpG X1+ Montanide ISA720只能增强抗原特异性CD4+和CD8+T细胞的IFNγ分泌,而CpG X1+Alum不仅能够增强抗原特异性CD4+和CD8+T细胞的IFNγ分泌,还能够增强CD8+CTL的杀伤活性.在黑色素瘤和李斯特菌攻击模型中,CpG X1+Alum佐剂显示出良好的预防和治疗效果.结论 CpG X1与Al(OH)3组成的复合佐剂能够有效促进蛋白抗原通过交叉提呈和交叉致敏诱生功能性CD8+CTL反应.
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绿茶提取物表没食子儿茶素-3-没食子酸酯对人卵巢癌HO-8910细胞增殖及Wnt/β-catenin信号通路相关基因表达的影响
目的 研究绿茶提取物表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(Epigallocatechin-3 gallste,EGCG)对人卵巢癌HO-8910细胞增殖及细胞内Wnt/β-catenin信号通路相关基因表达的影响,探讨EGCG抑制卵巢癌细胞生长的机制.方法 用不同浓度的EGCG(10、20和40 μg/ml)处理体外培养的人卵巢癌HO-8910细胞不同时间(24、48和72 h),采用MTT法检测细胞的增殖活力;流式细胞术检测细胞周期的变化;RT-PCR和Westem blot分别检测细胞中β-catenin和下游靶基因CyclinD1 mRNA的转录水平和蛋白的表达水平.结果 EGCG可明显抑制HO-8910细胞的增殖活力,且抑制作用呈剂量-时间依赖性(P＜0.05);40μg/mlEGCG干预后,HO-8910细胞主要阻滞于G0/G1期,且在48 h阻滞作用为明显;EGCG可显著降低HO-8910细胞中β-catenin和CyclinD1基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平,且呈剂量-时间依赖性(P＜0.01).结论 EGCG可抑制HO-8910细胞的增殖,其机制可能与其抑制Wnt/β-catenin信号通路的活性有关,提示EGCG可能在卵巢癌的治疗中具有一定的应用前景.
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小剂量长春新碱和恩度联合用药对横纹肌肉瘤皮下移植瘤的抑制作用
目的 研究小剂量长春新碱(Vincristine,VCR)和恩度(Endostar,Endo)联合用药对横纹肌肉瘤(Rhabdomyosarcoma,RMS)BALB/c裸鼠皮下移植瘤的生长抑制作用,并探讨其机制.方法 经BALB/c裸鼠右侧腋部皮下注射RMS细胞PLA-802悬液,建立RMS的皮下移植瘤动物模型;接种RMS后第8天,将选模成功的裸鼠随机分为对照组(注射生理盐水)、VCR组、Endo组和联合组,注射部位均为腹腔,注射体积均为0.2ml/(只·日),每3d称重1次,并测量肿瘤的长短径,计算肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,2周后处死裸鼠,称量瘤重,并计算抑瘤率;RT-PCR和Western blot法检测移植瘤细胞中血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平;免疫组化法检测VEGF和CD31的分布和表达.结果 裸鼠接种PLA-802细胞第8天,RMS裸鼠模型复制成功,裸鼠成瘤率为84％(42/50);联合组裸鼠体重和移植瘤的体积、重量均明显小于对照组、VCR组和Endo组(P＜0.01);VCR组、Endo组和联合组抑瘤率分别为31.41％、20.75％和48.41％;与对照组相比,VCR组、Endo组和联合组裸鼠移植瘤细胞中VEGF基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平均显著下降,且以联合组下降明显(P＜0.05);免疫组化结果显示,联合组VEGF和CD31的表达水平明显低于其他3组.结论 小剂量VCR和Endo对RMS的皮下移植瘤的生长具有明显的抑制作用,而联合用药能起到增效作用,其机制可能是通过抑制肿瘤的血管生成而发挥其抑制作用.
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重组人白介素-12对辐射损伤脐带血造血干细胞凋亡及其胞内STATS、STAT4和丝裂原活化蛋白激酶表达的影响
目的 探讨重组人白介素-12(Recombinant human interleukin-12,rhIL-12)对辐射损伤新生儿脐带血造血干细胞凋亡及其胞内STAT5、STAT4和丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen activated protein kinase,MAPK)表达的影响.方法 收集16份新生儿脐带血,分离单个核细胞,经终浓度分别为0.01、0.1和1 ng/ml的rhIL-12处理24 h后,用直线加速器以4GyX射线单次照射24 h,用流式细胞仪分析CD34+造血于细胞的凋亡率;并观察CD34+造血干细胞经1 ng/ml rhIL-12体外活化15和30 min后,细胞内STAT5、STAT4和MAPK蛋白的表达水平.结果 rhIL-12对辐射损伤引起的新生儿脐带血CD34+造血干细胞凋亡具有明显的下调作用(P＜0.01),且呈剂量依赖性(P＜0.01);rhIL-12与新生儿脐带血CD34+造血干细胞共同孵育15和30 min,均可显著上调造血干细胞内STAT5和MAPK蛋白的表达水平(P＜0.01或＜0.001),下调STAT4蛋白的表达水平(P＜ 0.05或＜0.01),且均呈时间依赖性(P＜0.001或＜0.05).结论 rhIL-12对辐射损伤的新生儿脐带血造血干细胞具有抗凋亡作用,并能上调造血干细胞内STAT5和MAPK蛋白的表达水平.
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川芎嗪对雪旺细胞神经生长因子合成与分泌的影响
目的 观察川芎嗪(Tetramethylpyrazine,TMP)对雪旺细胞(Schwann cells,SCs)合成与分泌神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)的影响,探讨其促进周围神经损伤修复的可能机制.方法 采用DMSO溶解TMP,将SCs分为正常对照、溶媒对照组和不同浓度TMP组(终浓度分为25、50、100和200 μg/ml),作用24 h后,通过MTT法和流式细胞术分析TMP对SCs增殖和凋亡的影响,Real-Time PCR与ELISA法分别检测TMP在mRNA和蛋白质水平对SCs合成与分泌NGF的影响.结果 TMP对SCs的增殖活力及凋亡均无影响.溶媒对照组、25、50 μg/ml TMP组NGF基因mRNA水平和细胞培养上清中NGF含量与正常对照组相比,差异均无统计学意义(P＞0.05);100、200 μg/ml TMP组与正常对照组相比明显增高(P＜0.05),两组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 TMP可促进SCs合成与分泌NGF,且该作用具有浓度依赖性,这可能是其促进神经损伤修复的机制之一.
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β3肾上腺素能受体激动剂BRL37344对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响
目的 观察β3肾上腺素能受体激动剂BRL37344对3T3-L1前脂肪细胞分化及相关基因mRNA转录的影响,并探讨其抗肥胖的作用机制.方法 将3T3-L1前脂肪细胞分为4组:空白对照组、常规分化组、BRL37344处理组、常规分化+BRL37344组.采用油红O染色法初步判断各组脂肪细胞的分化情况,RT-PCR法检测各组脂肪细胞分化过程中过氧化物酶体增殖物激活受体γ2(Peroxisome proliferators activated receptor γ2,PPARγ2)、脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(Adipocyte fatty acid binding protein,aP2)、脂蛋白脂肪酶(Lipoprotein lipase,LPL)基因mRNA的转录水平.结果 经不同浓度的BRL37344处理8d后,3T3-L1前脂肪细胞中PPARγ2、aP2、LPL基因mRNA的转录水平均下调,且呈剂量依赖性,其中10-7 mol/L BRL37344作用明显;在不同的分化时间点,经10-7 mol/L BRL37344处理后,细胞分化相关基因与相应对照组相比,均呈下调趋势(P＜0.05).结论 β3肾上腺素能受体激动剂BRL37344可能通过下调脂肪细胞分化相关基因的转录,抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化.
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灵芝精粉与灵芝孢子粉对Lewis肺癌模型小鼠免疫功能的影响
目的 研究灵芝精粉与灵芝孢子粉对Lewis肺癌模型小鼠免疫功能的影响,并比较二者在肿瘤治疗中的免疫调节作用.方法 经C57BL/6小鼠右腋皮下接种1×106个Lewis肺癌细胞,建立小鼠Lewis肺癌模型.于接种肿瘤细胞次日至第20天,分别隔日灌胃灵芝孢子粉(D1)、灵芝精粉001(D2)及灵芝精粉002(D3),剂量均为0.5g/kg,同时设立对照组和肿瘤组(灌胃等体积生理盐水).监测各组小鼠体重及瘤体积,第21日处死小鼠,称量瘤重,并无菌制备脾细胞悬液,检测小鼠NK细胞杀伤活性,流式细胞术检测小鼠脾细胞中CD4+、CD8+T细胞和B细胞数量,淋巴细胞转化试验检测脾细胞中T、B细胞增殖功能.结果 与对照组比较,肿瘤组小鼠脾细胞中T、B细胞增殖功能、细胞数量及NK细胞杀伤活性均有不同程度的下降.与肿瘤组相比,3种灵芝制剂均可提高Lewis肺癌模型小鼠NK细胞的杀伤活性和T、B细胞增殖功能,其中,以D2作用为明显(P＜0.05);3种灵芝制剂均可不同程度地提高Lewis肺癌模型小鼠CD4+、CD8+T细胞数量,其中,以D3作用为显著(P＜0.05).3种灵芝制剂对Lewis肺癌模型小鼠的体重、瘤重、瘤体积及B细胞数量均无明显影响.结论 灵芝制剂对Lewis肺癌小鼠的免疫功能具有正向调节作用,其中灵芝精粉的作用优于灵芝孢子粉.
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脊髓灰质炎灭活疫苗在中国婴儿中的免疫持久性
目的 评价脊髓灰质炎(简称脊灰)病毒灭活疫苗(Inactivated poliovirus vaccine,IPV)在中国婴儿中的免疫持久性.方法 选择广西壮族自治区平乐县11个乡(镇)的372名健康婴儿,随机分为2组:176名婴儿分别于2、3、4月龄接种1剂IPV疫苗,196名婴儿分别于2、3、4月龄口服1粒脊髓灰质炎减毒活疫苗糖丸(Oral poliovirus vaccine,OPV).两组均于基础免疫后1个月及18月龄时采集静脉血,采用微量中和试验检测血清中抗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊灰病毒中和抗体(Neutralizing antibody,NA)滴度.结果 两组婴儿接种疫苗后18月龄时血清抗脊灰病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型NA几何平均滴度(Geometric mean titer,GMT)均明显低于基础免疫后1个月.18月龄时IPV组血清抗脊灰病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型NA阳性率明显低于基础免疫后1个月,且差异均有统计学意义(P均＜0.001);OPV组差异无统计学意义(P=0.111).IPV组部分婴儿在18月龄时血清抗脊灰病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型NA滴度小于1:8,比例分别为11.4％、17.1％和18.2％.结论 IPV基础免疫后至18月龄时,婴儿抗脊灰病毒抗体保护水平下降,需进行加强免疫.
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A、C群脑膜炎球菌-b型流感嗜血杆菌多糖结合疫苗免疫学效果观察
目的 观察A、C群脑膜炎球菌-b型流感嗜血杆菌(Meningococcal group A&C/Haemophilus influenzae type b,ACHib)多糖结合疫苗的免疫原性.方法 采用开放、完全随机、盲态观察的方法,将l 800名观察对象分为临床试验组和对照组,每组各900名,两组又按3个年龄段分为3～5、6～11和12～71月龄组.试验组仅经上臂三角肌肌内注射试验疫苗(ACHib多糖结合疫苗),对照组分别经左右上臂同时注射两种对照疫苗(A、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗和Hib结合疫苗).3～5月龄组免疫3针,每针间隔1个月;6～ 11月龄组免疫2针,每针间隔1个月;12 ～ 71月龄组免疫1针.分别于免疫前、全程免疫后30～ 35 d采集静脉血,分离血清,采用功能性抗体杀菌力法检测A、C群脑膜炎球菌血清杀菌抗体滴度,间接ELISA法检测Hib抗体水平,并计算抗体阳转率及抗体增长倍数.结果 免疫后,3个年龄段的试验组与对照组血清A、C群脑膜炎球抗体和Hib抗体阳转率差异均无统计学意义(P＞0.05).3个年龄段试验组与对照组易感和非易感人群A、C群脑膜炎球菌抗体滴度差异均无统计学意义(P均＞0.05),而试验组Hib抗体水平低于对照组,且差异有统计学意义(P＜0.001).结论 ACHib多糖结合疫苗具有良好的免疫原性,可作为上述3种病原菌的预防制剂推广使用.
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血管紧张素转换酶基因rs4340和rs4343多态性与心房颤动的相关性
目的 探讨血管紧张素转换酶(Angiotensin converting enzyme,ACE)基因rs4340和rs4343多态性与心房颤动(简称房颤)的相关性.方法 选择重庆地区4家三甲医院就诊的102例房颤患者及同期住院的无房颤病史患者100例,抽取患者静脉血,分别提取基因组DNA,采用单核苷酸多态性-限制性片段长度多态性(Single nucleotide polymorphism,restriction fragment length polymorphism,SNP-RFLP)法及基因测序检测ACE基因rs4340和rs4343的基因型.结果 房颤组ACE基因rs4340多态性的基因型及等位基因分布与对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05),房颤组rs4343的基因型和等位基因分布与对照组间差异有统计学意义(P＜0.001或P=0.001).与对照组相比,房颤组GG+ AG基因型频率明显高于AA基因型频率(P＜0.001).Ⅱ/AA基因型在房颤组中出现的频率明显少于对照组(P=0.001),而Ⅱ/AG基因型在房颤组中出现的频率明显高于对照组(P=0.002).房颤组中rs4340和rs4343各基因型左房前后径与右房横径差异均无统计学意义(P＞0.05);而将两位点联合分析发现,携带Ⅱ/AA基因型房颤患者的左房前后径和右房横径均明显小于其他基因型(P＜0.001),同时,携带Ⅱ/AG基因型房颤患者的左房前后径和右房横径均明显大于其他基因型(P＜0.001).结论 ACE基因rs4343多态性与房颤显著相关,Ⅱ/AA基因型是房颤发生发展的保护因子,而Ⅱ/AG基因型是预测房颤发生发展的危险因子.
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血小板源性生长因子-D和表皮生长因子受体Ⅲ型突变体在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义
目的 探讨血小板源性生长因子-D(Platelet-derived growth factor D,PDGF-D)和表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(Epidermal growth factor receptor type Ⅲ mutant,EGFRv Ⅲ)在膀胱移行细胞癌(Bladder transitional cell carcinoma,BTCC)中的表达及其临床意义.方法 分别采用RT-PCR法和免疫组织化学SP法检测PDGF-D和EGFRv Ⅲ在80例BTCC组织和10份癌旁正常组织中的转录及表达情况,并分析二者与患者临床病理特征之间的相关性.结果 BTCC组织中PDGF-D和EGFRv Ⅲ在mRNA和蛋白水平上的表达均显著高于癌旁正常组织(P＜0.05);PDGF-D和EGFRv Ⅲ的表达与BTCC不同病理分级和TNM分期有关(P＜ 0.05),与患者年龄、性别、肿瘤单发和多发、初发和复发无关(P＞0.05);PDGF-D与EGFRv Ⅲ的表达呈正相关(r=0.994,P＜0.01).结论 PDGF-D和EGFRv Ⅲ在BTCC组织中的表达与病理分级及TNM分期明显相关,可作为判断BTCC恶性程度、浸润与进展的重要生物学指标.
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抗猪呼吸与生殖综合征病毒Nsp9蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定
目的 制备抗猪呼吸与生殖综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV) Nsp9蛋白单克隆抗体,并进行初步鉴定.方法 用纯化的重组Nsp9蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗PRRSV Nsp9蛋白单克隆抗体,采用Western blot和间接免疫荧光试验分析单抗的特异性;使用免疫球蛋白标准亚类鉴定试剂盒鉴定单抗的亚类;将杂交瘤细胞分别保存1、2、3、4个月后复苏,采用间接ELISA法检测细胞分泌抗体的能力.结果 共获得3株可稳定分泌特异性单抗的杂交瘤细胞株,分别命名为2D6、3C11和4E6,其细胞培养上清的ELISA效价分别为1:6 400、1:3 200和1:1600,腹水的ELISA效价分别为1:640 000、1:512 000和1:256 000.3株单抗均可与Nsp9蛋白和PRRSV特异性结合;2D6和3C11株单抗的Ig亚型为IgG1,4E6株单抗为IgM亚类抗体;3株杂交瘤细胞保存4个月均能稳定分泌单抗.结论 已制备抗PRRSV Nsp9蛋白单克隆抗体,其特异性高,稳定性良好,为建立鉴别自然感染与注射疫苗感染PRRSV的诊断方法提供了材料.
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小反刍兽疫病毒F蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备
目的 原核表达小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)F蛋白,并制备多克隆抗体.方法 根据GenBank中登录的PPRV Nigeria 75/1株F基因全长序列,采用DNAStar软件设计去除F基因信号肽和跨膜区的引物,进行RT-PCR扩增,并克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达.表达的重组蛋白纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot分析,免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,并初步应用于PPRV的检测.结果 重组原核表达质粒pET-32a(+)-PPRV-F经双酶切和测序证实构建正确;表达的重组F蛋白相对分子质量约59 000,诱导6h表达量高,且主要以包涵体形式表达;纯化的重组蛋白纯度可达95％以上;免疫小鼠制备的多抗能与纯化的重组蛋白发生特异性反应,抗体效价高于1:64000;间接免疫荧光试验显示,制备的多抗能够识别PPRV Nigeria 75/1株全病毒抗原.结论 原核表达了PPRVF蛋白,并制备了高效价的多克隆抗体,为其进一步研究及小反刍兽疫临床快速检测方法的建立奠定了基础.
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2011年流感疫苗批签发情况总结与质量分析
流行性感冒(简称流感)是由流感病毒引起的急性呼吸道感染疾病.据统计,全球每年约有5％～15％的人口感染流感病毒,并导致300万～500万的严重病例和约50万的死亡病例[1].接种流感疫苗是预防流感发生与传播的有效手段[2].
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 |
| 2000 | 01 02 03 04 |
