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正常乳腺与乳腺癌核基质蛋白的双相电泳-飞行时间质谱研究
目的:应用比较蛋白质组学方法分析正常乳腺与乳腺癌组织的差异表达核基质蛋白,为人乳腺癌发病机制及其早期诊断的研究提供理论依据.方法:应用双相电泳(2-DE)每组分离4例乳腺组织核基质蛋白;应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)获得差异蛋白点的肽质量指纹图谱(PMF);通过Mascot软件查询NCBI数据库鉴定蛋白质.结果:每张图谱约检测到900个蛋白质点,共发现27个差异表达蛋白,选择背景清晰、重复性及分辨率较好、蛋白表达差异明显的点进行质谱分析,结合表观分子质量及等电点,初步鉴定了12种蛋白质.结论:这些差异蛋白质部分有望成为乳腺癌诊断及治疗的分子标志物.
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子痫前期蜕膜组织差异蛋白的筛选与鉴定
目的:应用蛋白质组学方法筛选子痫前期差异蛋白,探讨差异蛋白与子痫前期发生的可能关系.方法:收集5例正常足月妊娠妇女和5例足月子痫前期重度患者胎盘母面及宫壁上的蜕膜组织,提取总蛋白.双向凝胶电泳技术对总蛋白进行分离,考马斯亮兰染色,获得蛋白质图谱.用PDQuest软件进行图像分析,寻找差异蛋白,随机选取8个差异蛋白质点进行胶内酶解,用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术获得肽质量指纹谱,搜寻蛋白质数据库鉴定蛋白质并进行初步分析.结果:获得了正常妊娠及子痫前期重度患者蜕膜组织双向电泳凝胶图谱,蛋白质点子痫前期组为(436±13)个点,正常妊娠组为(425±16)个点,图像分析结果显示表达丰度相差2倍以上的差异蛋白质点有14个,它们在子痫前期中均表现下调.随机选取的8个蛋白质点均成功得到鉴定,它们分别是膜联蛋白-V,血红蛋白β链,Rho-GDP解离抑制剂1,氯离子细胞内通道蛋白1,原肌球蛋白4,平滑肌蛋白2202,α1-抗胰蛋白酶和纤维蛋白原β链.结论:子痫前期重度患者蜕膜组织中存在差异蛋白,这些蛋白质在子痫前期的发病过程可能起重要作用.
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荷瘤大鼠60Co局部照射后骨髓蛋白质的差异表达
目的:观察荷瘤大鼠受60Co局部照射后骨髓中蛋白质的差异表达.方法:制备荷瘤大鼠动物模型,60Co局部照射后分别提取荷瘤组和照射组大鼠骨髓蛋白质,运用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分析2组荷瘤大鼠骨髓蛋白质的差异表达.结果:荷瘤大鼠经60Co局部照射骨髓有24个蛋白点表达发生变化,其中出现2个新蛋白点,4个蛋白点表达量下降,1个蛋白点表达量升高,17个蛋白点在照射后消失.结论:60Co局部照射可诱导荷瘤大鼠骨髓蛋白质差异表达.
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进一步完善社区医疗机构与医院双向转诊机制的探讨
目前,我国深化城镇医疗卫生体制改革、大力发展城市社区卫生服务和构建新型城市卫生服务体系正在深入发展,本文就如何发挥医院-社区两级医疗卫生服务机构的作用,为实现医疗区域优化整合,合理利用城市医疗资源,进一步完善社区卫生服务机构与医院"两级双向"转诊机制试探讨如下.
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大鼠烫伤后肠黏膜上调蛋白质组的分离鉴定及其功能分析
目的观察严重烧伤后早期肠黏膜上调蛋白的整体变化特性,并对明确的蛋白质进行功能分析,为探讨严重烧伤后肠黏膜损害的发病机制提供理论依据. 方法采用大鼠Ⅲ度烫伤模型,利用高分辨双向电泳(2-DE)对肠黏膜组织进行蛋白质分离,ImageMaster 2D Elite 图像分析软件进行分析,应用生物质谱、蛋白质库及文献分析等技术对差异蛋白质中的上调蛋白质组进行鉴定、功能和临床意义分析. 结果 (1)烧伤后6和12 h两组明确下调的蛋白质点数为34,进行检测及功能分析的蛋白质22个;(2)糖调控蛋白前体78、蛋白质二硫化物异构酶A3(PDIA3)前体、基质金属蛋白酶11、α-烯醇酶和鸟氨酸转化酶等参与了对应激反应的调控.有其他蛋白质,如白蛋白、乳酸脱氢酶A、T细胞活化连接蛋白、辅酶Q和eps8捆绑蛋白呈现上调表达. 结论这些上调的蛋白质的表达改变主要参与了肠黏膜的应激反应及其他病理反应的调控.
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脑损伤后大鼠海马差异蛋白质组学分析
目的 研究脑损伤后大鼠海马组织蛋白质组差异表达变化情况.方法 采用侧方液压冲击装置,建立大鼠中度脑损伤模型,分别取外伤组(3只)与假手术组(3只)大鼠海马组织总蛋白,通过差异荧光双向凝胶电泳(DIGE)分离蛋白,获得蛋白质分离图谱,经胶内酶切、抽提酶解肽段、MALDI-TOF/TOF质谱分析研究差异的蛋白质点,鉴定出变化的蛋白质.结果 经De-Cyder 5.0及BVA图像分析软件比较,发现17个蛋白点表达水平具有显著差异变化.鉴定出的蛋白质考染点含有14个蛋白质,2个为同一种蛋白,实际差异蛋白数为13个.依其功能属于细胞骨架蛋白、介导能量代谢的酶类、参与核酸合成及氧化应激反应的蛋白质、神经突触功能蛋白、细胞内信号传递蛋白及未知蛋白. 结论脑损伤后大鼠海马组织蛋白质表达谱存在差异,并初步鉴定出脑损伤后差异表达蛋白,为深入研究脑损伤的病理机制奠定基础.
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急性脑外伤后的比较蛋白质组学研究
目的 研究脑损伤前后人脑皮层蛋白质组分差异表达的情况.方法 对10例重型脑外伤患者和4例对照的皮层组织进行比较蛋白质组学研究,即利用固相pH梯度(immobilized pH gradient,IPG)双向凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)分离人脑外伤后皮层组织及对照的皮层组织的总蛋白质,蓝银显色后经图像分析识别差异表达的蛋白质,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-Ms)和电喷雾-四极杆-飞行时间串联质谱(electrospray ionization-quadrupole time-of-flight,ESI-Q-TOF)鉴定差异表达的蛋白质点. 结果 得到了分辨率较高、重复性较好的人脑外伤后皮层组织及对照的皮层组织的2-DE图潜;图像分析识别差异蛋白质点21个;通过质谱分析鉴定出一些与代谢反应、氧化应激反应、信号转导等有关的差异蛋白17个. 结论 成功鉴定17个与脑外伤相关的蛋白,为进一步阐明脑外伤后的病理生理作用机制及其诊断和治疗、预后监测提供了新的思路.
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高氧液对大鼠烫伤后肠黏膜下调蛋白质的影响
目的观察高氧液对烫伤大鼠肠黏膜下调蛋白质的影响,为伤后早期应用高氧液治疗提供理论依据. 方法制作大鼠35%TBSAⅢ度烫伤模型,设烫伤后普通补液组(烫伤组)、伤后输入高氧液为干扰因素组(高氧液组)和正常对照组,每组6只.利用高分辨双向电泳(2-DE)对肠黏膜组织进行蛋白质分离,采用Image master 2D Elite图像分析软件进行分析,应用生物质谱、蛋白质库及文献分析等方法研究高氧液对大鼠烫伤后肠黏膜下调蛋白质的影响. 结果烫伤组大鼠明确下调的34个蛋白质点中,高氧液组出现明确上调的蛋白质点数为9.它们是线粒体乌头酸酶、丙酰辅酶A羧化酶、短链羟酰基辅酶A脱氢酶、雌二醇安息香酸盐转录因子、磷酸丙糖异构酶1、T淋巴细胞受体-V-δ6和类动力蛋白-5. 结论高氧液可以上调大鼠严重烧伤后早期肠黏膜中的下调蛋白质,进而部分恢复肠黏膜的屏障功能.
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烫伤大鼠肠粘膜下调蛋白质组的分离及鉴定
目的对烫伤后大鼠肠粘膜下调蛋白质组进行分离鉴定,探讨其在严重烫伤后肠粘膜损害发生中的作用. 方法采用大鼠Ⅲ度烫伤模型,利用高分辨双向电泳(2-DE)对肠粘膜组织进行蛋白质分离,用Image Master 2D Elite图像分析软件对差异蛋白质中的下调蛋白质组进行鉴定. 结果烧伤后6、12 h两组明确下调的蛋白质点数为34,进行鉴定及分析的蛋白质22个;与线粒体有关的下调蛋白质有线粒体乌头酸酶、丙酰辅酶A羧化酶、肝脏F1ATP酶重链A、肌钙蛋白-1、短链羟酰基辅酶A脱氢酶、P-电子转移[传递]黄素蛋白α亚基等6种;参与代谢的下调蛋白质有磷酸丙糖异构酶1和细胞溶质环氧化物水解酶;与细胞骨架蛋白及基质蛋白有关的下调蛋白质有纤维单元素、类动力蛋白-5、肌钙蛋白-2和碱性肌浆球蛋白轻链3共4种;参与调控的下调蛋白质有糖皮质激素诱导蛋白、核因子1-B2、BRCA1、雌二醇安息香酸盐转录因子、G-蛋白β-2亚基、N-甲基-D-天门冬氨酸受体1等6种;与免疫调控有关的下调蛋白质有T细胞受体-V-δ6和Ig重链V区蛋白1. 结论在大鼠烫伤后肠粘膜表达下调蛋白质中,以与线粒体有关及参与激素和细胞因子调控的蛋白质数量居多,说明大鼠烫伤后早期损伤发生机制与线粒体功能改变以及激素、细胞因子表达调控紊乱关系密切.
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结肠癌组织蛋白质组成分的双向凝胶电泳分析
目的 分析结肠癌病人癌组织、癌旁组织及正常结肠黏膜组织双向凝胶电泳的蛋白质表达图谱,寻找差异表达的蛋白质.方法 采用固相pH梯度双向凝胶电泳分离结肠癌病人配对癌组织、癌旁组织及正常结肠黏膜组织的总蛋白,银染显色,PDQuest 2DE软件分析差异表达的蛋白质点.结果 获得了重复性较好的双向凝胶电泳银染图谱.图像分析显示,3组胶的平均匹配率分别为:癌组织87.3%、癌旁组织80.3%、正常结肠黏膜组织84.0%.等电聚焦方向上的平均偏差为(1.16±0.29)mm,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方向上的平均偏差为(1.00±0.38)mm.差异分析共获得164个差异表达的蛋白质点.结论 双向凝胶电泳分离结肠癌组织的总蛋白可获得重复性较好的结果.获得的差异蛋白质点为寻找结肠癌早期诊断的分子标记物提供了理论依据.
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K562及其耐药细胞系多药耐药机制的蛋白质组学研究
目的 探讨K562及其耐药细胞系K562/ADM(由多柔比星诱导的耐药K562细胞系)蛋白差异表达情况.方法 应用二维荧光差异电泳结合质谱技术,经过相应软件处理找出K562和K562耐药细胞之间蛋白质表达质和量的变化.结果 二维电泳发现11个差异蛋白点,质谱鉴定出9个表达差异的蛋白质,其中4种蛋白质与能量代谢有关;3种蛋白质与细胞信号转导有关;2种蛋白质与细胞增生相关.9种差异表达蛋白质中,6种在K562/ADM中表达增加,3种表达降低.结论 应用二维凝胶电泳结合质谱技术对白血病多药耐药机制研究是一种新的可靠手段,可对揭示耐药细胞与敏感细胞蛋白组学变化和蛋白质之间的相互作用提供新的思路.
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双向签名避免护患纠纷
随着社会的进步和各项法律、法规的不断完善、颁布和实施,患者维护健康权、就医权的意识越来越强[1],对医护人员的要求越来越高.医护人员所处的环境也越来越具风险,就护理工作而言,如稍有不慎,就可引发各种护理纠纷.笔者通过多年的临床观察及经验总结认识到,纠纷的产生是双方面的,避免和预防纠纷的发生也应该是护患双方的互动行为.因此,我们实行了双向签名制,收到了良好的效果.
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双向情感障碍患者与健康人认知功能的对比分析
目的:探讨患有双向的情感障碍的病人和健康人之间的认知功能的差异情况.方法选取在2012年4月-2015年4月于医院治疗的100例双向情感障碍病人和100例参与体检的健康人作为研究对象,在治疗前和治疗后随访1年过程中,分别用数字符号、广度、TMT-A、TMT-B检测法与WCST的分类检测法比较两者的认知功能的情况,统计在完成顺背、分类、连线情况、错误的应答、持续的错误与持续的应答等各个项目的数量.结果研究组的完成分类数与对照组相比,差异明显,且人数较低;研究组的应答错误数、持续的错误与持续的应答数,与对照组相比,差异明显,且人数较高(P<0.05).数字符号和广度,TMT-A和TMT-B的分值与对照组相比,差异明显,且前者的分值较低(P<0.01);治疗后随访的1年中,上述的认知功能障碍仍存在并没有恶化现象,维持情况的稳定(P>0.05).研究组的数字符号、顺背和TMT-A的评定都与病人的学历情况成一定的相关性(P<0.05).结论双向情感障碍的病人和健康人之间的认知功能的差异大,该病病人认知的困难主要在于执行力、注意力和记忆力三方面,且随访的1年中认知障碍仍存在,但没有恶化现象.临床需要引起相关人员的高度重视,采用合理的诊断和治疗措施,注重出院后病人的后续护理,逐渐恢复病人的认知功能.
