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纺锤体观测参数与卵胞质内单精子显微注射结局关系的研究进展
在细胞分裂过程中,纺锤体对卵母细胞染色体的运动、平衡、分配和极体的排出十分重要.随着偏振光显微镜的发展,在活细胞中观察纺锤体已经十分方便,这也为研究纺锤体不同观测参数对卵胞质内单精子显微注射(ICSI)后卵母细胞受精和胚胎发育的影响创造了有利条件.本文对卵母细胞纺锤体不同观测参数包括有无纺锤体、纺锤体的形态、光阻滞值、纺锤体与第一极体的夹角、纺锤体与ICSI注射针的相对位置等对ICSI结局的影响进行综述.
关键词： 纺锤体 第一极体 卵胞质内单精子显微注射(ICSI) 受精 胚胎发育 -
精子功能评估:未来的选择
辅助生殖技术的发展,已能帮助那些因严重男性因素导致不育的夫妇获得健康子代.然而迄今为止,对精子功能进行全面、有效评估的体系尚未建立.生殖生物学和生殖遗传学的发展为评估精子结构和功能提供了许多值得借鉴的评估方法,如精子膜功能检测、顶体功能检测、线粒体功能检测、中心体功能检测及遗传物质完整性检测,但这些检测对生育能力预测的准确性非常有限,难以作为独立的临床指标,故建立一套综合体系来评价精子整体功能可能更有助于临床实际.
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核质蛋白在精核染色体重建过程中的作用研究
核质蛋白(nucleoplasmin,NP)是一种酸性的、具有热稳定性的蛋白质,能与组蛋白结合从而介导核小体组装和染色质重建,是一种重要的核分子伴侣.受精后,NP在精核去浓缩过程中发挥重要作用,将特异性精子碱性蛋白去除,并用卵母细胞中的组蛋白H2A、H2B替代,从而调控精核染色体重组.
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精卵融合机制研究进展
精卵融合是发生在有性生殖过程中重要的事件之一,其分子机制至今还未完全阐明.基因打靶已经被证明是一个能够揭示细胞间相互作用候选分子功能的权威工具,以前通过抗体抑制试验认为介导了精卵融合的关键性分子因为基因功能的深入研究而被一一否定,如整合素、ADAM1、ADAM2、ADAM3.近年来作为参与精卵融合的候选分子,如CD9、Izumo、甘露糖受体等,已经引起广大研究者的关注.
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Src家族激酶在卵母细胞减数分裂成熟和受精中的作用
Src家族激酶是一类非受体酪氨酸激酶.在卵母细胞成熟过程中,Src家族激酶能够促进卵母细胞恢复减数分裂.对海洋无脊椎动物和低等脊椎动物卵子受精过程的研究证明,Src家族激酶与卵子活化过程中的Ca2+释放有关;而在哺乳动物卵子中,对Src家族激酶的作用尚未形成一致结论.本文结合作者自己的工作,对目前Src家族激酶在减数分裂成熟和受精中的作用进行了总结和展望.
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乙醇对哺乳动物受精及胚胎发育的影响
乙醇对哺乳动物的健康特别是生殖功能的危害很大.主要表现在:(1)对配子的影响:通过影响性激素的合成或直接作用于性腺干扰体内配子发生.乙醇能够体外诱导卵母细胞活化,活化后卵母细胞质膜稳定性发生改变,而影响卵母细胞受精;乙醇还能够破坏精子的结构完整性,降低精子的运动能力.(2)对受精的影响:明显抑制精子体外获能.(3)对胚胎发育的影响:高浓度的乙醇对不同发育时期的胚胎均有不同程度的抑制作用,特别是在器官发生过程中乙醇能够造成胚胎发育障碍并导致畸形.
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溶脲脲原体蛋白UreG抗体对小鼠体外受精的影响
目的:探索与人精子膜存在交叉反应的溶脲脲原体蛋白UreG抗体对小鼠体外受精的影响.方法:提取溶脲脲原体总DNA,用自行设计的引物扩增UreG全序列,PCR产物经TA克隆后,用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切,克隆到表达载体pET-28a(+)中.在E.coliBL 21中,异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下表达His融合蛋白.用亲和层析纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,获取多克隆抗体.观察该抗体对小鼠体外受精的影响.结果:对表达重组蛋白的质粒进行DNA测序以及十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,证实获取了目的蛋白.ELISA检测证实,免疫小鼠产生了高效价的抗体.该抗体能够抑制小鼠精卵的融合.结论:与人精子膜存在交叉反应的溶脲脲原体蛋白UreG抗体,可导致小鼠精卵结合率降低.
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表达精子抗原受精素β的重组沙门氏菌疫苗株的免疫性避孕效应研究
目的:探讨表达精子抗原受精素β胞外区的重组沙门氏菌疫苗株用作避孕疫苗的可行性.方法:应用表达精子抗原受精素β胞外区的两种重组沙门氏菌疫苗株X4632(pFEC)和X455()(pFEC)口服接种雌鼠,通过ELISA方法检测其激发雌鼠产生抗重组受精素β蛋白的血清IgG抗体和阴道分泌物IgA抗体滴度变化,并观察其诱导的雌鼠免疫性避孕效应情况.结果:重组X4632(pFEC)和X4550(pFEC)疫苗株不但可激发雌鼠产生高水平血清抗重组受精素β蛋白和抗菌体LPS IgG抗体,而且在阴道分泌物中可出现一定程度抗重组受精素β蛋白和抗菌体LPS IgA抗体.同时,口服免疫后的雌鼠生育能力明显降低,两实验组雌鼠妊娠率降低30～35%,一胎产仔数量平均降低64.76～65.64%.结论:表达精子抗原受精素β的重组沙门氏菌疫苗株可在小鼠中诱导免疫避孕效应.
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整合素亚基α5、β1在人精子的表达及其与受精的关系
目的:研究精子表面整合素亚基α5、β1的表达及其与精子功能状态和受精力的关系;整合素亚基α5、β1的表达与不明原因不育症的关系.方法:13例生育力正常男性的精液标本,9例临床诊断为不明原因不育症患者的精液标本.以精子穿透去透明带的金黄地鼠卵行体外受精试验(SPA)检测精子受精力;对新鲜、获能和孕酮诱导顶体反应后精子行间接免疫荧光染色,流式细胞仪检测精子表面整合素亚基α5、β1表达阳性的精子百分率.以三色法染色,观察精子顶体反应的发生率.结果:流式细胞仪检测显示正常组新鲜精子表面α5亚基的表达(13.3±5.4%)与对照组(10.7±6.4%)无显著差异(P＞0.05).获能组精子表面α5亚基的表达率(65.7±17.6%)比新鲜组和对照组显著增高(P＜0.05).孕酮诱导顶体反应后,α5亚基的表达率(65.3±18.9%)比新鲜组和对照组显著增高(P＜0.05),但与获能精子组相比无显著差异(P＞0.05).β1亚基的表达率分别为新鲜组12.9±7.4%,获能组15.9±7.9%,诱导顶体反应组16.9±6.2%,与对照组(分别为:9.3±3.4%,17.3±7.8%,12.2±8.7%)比较均无显著差异(P＞0.05).获能精子表面α5亚基的阳性表达率与受精率有一定的线性相关(r=0.6823).正常男性与不明原因不育症患者获能精子表面α5亚基的阳性表达率(65.7±17.6%vs 21.9±7.9%)有显著差异(P＜0.05).整合素亚基α5、β1的表达与精子顶体反应的发生率均无相关性.结论:(1)精子表面整合素α5亚基主要在获能后精子赤道部以下的细胞膜表达;(2)α5亚基可能参与受精过程;(3)α5表达异常可能与一些不明原因不育有关.
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整合素配体玻连蛋白在人精子的表达及其与受精的关系
目的:进一步研究整合素配体玻连蛋白(Vn)在人精子的表达及其与受精的关系.方法:选用14例生育力正常的成年男性及8例精液常规分析正常的不明原因不育男性患者的精液标本,液化后提取上游精子.精子体外获能后用兔抗人Vn多克隆抗体及羊抗兔IgGFITC行免疫染色.然后用流式细胞仪计数Vn表达阳性精子百分数.部分获能精子同时与去透明带金黄地鼠卵行异种体外受精(SPA)以检测其受精力,比较两组获能精子表面Vn表达阳性精子百分率及受精率差异并分析受精率与Vn表达阳性的获能精子百分数之间的相关性.结果:生育组与不育组获能精子Vn表达水平分别为21.24士11.70%与3.64士3.27%,不育组明显低于生育组(P＜0.05).生育组受精率大于10%,不育组受精率小于10%,符合划分生育力正常与异常的标准.所有标本Vn表达阳性的获能精子百分率与精子受精率间具有相关性(r=0.476).结论:人获能精子表面存在一定水平的整合素配体玻连蛋白表达;Vn参与受精过程;Vn表达异常可能与一些不明原因的不育有关.
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哺乳动物精卵质膜结合与融合相关分子研究进展
哺乳动物受精是一多步骤的复杂过程,包括精子获能、精子识别卵子透明带及发生顶体反应、精卵质膜相互黏附与融合、卵母细胞第二极体的排除、两性原核的形成与融合等.精卵质膜黏附与融合是关键的步骤之一,有证据表明这一过程与多个精卵表面分子有关.经过多年的研究,研究者已经识别和鉴定出若干候选分子,一些分子的具体功能也得到了较好的阐述.
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ICSI在常规体外受精失败后卵子再受精中的应用
目的 探讨卵细胞浆内单精子注射(ICSI)技术在常规体外受精失败后卵子再受精中的有效性.方法 在12个体外受精失败周期中应用ICSI对未受精的MⅡ期卵子进行再受精,将获得的优质胚胎冷冻保存,选择适当时机复温后移植,移植前均行胚胎辅助孵化.结果 106个未受精的成熟卵子接受ICSI,注射后92个卵子存活.其中75个卵子正常受精,受精率为70.8%(75/106);12个卵子出现三原核或单原核.69个正常受精卵发生分裂,卵裂率为92.0%(69/75).后获得优质胚胎58个,冻融后共移植胚胎38个,其中1个周期的7个冻融胚胎均破碎而未移植,其余11个周期均有可供移植的胚胎.1例孕3月时流产,1例单胎临床妊娠分娩出正常婴儿,临床妊娠率为18.2%.结论 ICSI使常规体外受精失败的卵子再受精,配合胚胎冻融及辅助孵化技术实现临床妊娠,具有一定的应用价值.
关键词： 卵细胞浆内单精子注射 受精 体外 妊娠 -
体外受精-胚胎移植中胚胎碎片对临床妊娠率影响
目的 探讨体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中胚胎碎片对临床妊娠率及种植率的影响.方法 观察246例行IVF-ET或卵母细胞浆内单精子注射病人胚胎碎片与临床妊娠率的关系.结果 与正常和轻度碎片的胚胎相比,严重碎片(＞50%)胚胎的临床妊娠率和种植率均明显降低(χ2=10.112、9.510,P＜0.05),多胎妊娠率差异无显著性.结论 提高胚胎质量,减少移植胚胎数量,有助于提高IVF-ET的成功率.
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卵泡液中LIF对体外受精-胚胎移植的影响
①目的探讨体外受精妇女卵泡液中白血病抑制因子(LIF)水平对其体外受精-胚胎移植的影响.②方法应用双抗体酶联免疫吸附法(ELISA),检测45例体外受精妇女排卵时卵泡液中LIF的水平,分析其与取卵数、卵子受精率、早期胚胎的质量以及移植结局的关系.③结果卵泡液中LIF的浓度与卵子的受精率以及胚胎的质量呈正相关(r=0.613、0.591,P<0.05);妊娠组卵泡液中LIF的浓度与未妊娠组比较,差异无显著意义(t=0.630,P>0.05).④结论卵泡液中LIF水平影响卵子成熟、早期胚胎的质量.
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影响助生殖技术的因素分析
①目的了解影响助生殖因素.②方法用助生殖技术对106例不孕妇女进行助孕,观察助生殖过程中激素水平对卵泡发育及排卵影响,不同获能方法对精子受精率影响,同时分析控制性超排卵(COH)异常反应-卵巢过度刺激综合征(OHSS)发生、发展相关因素.③结果 COH中,高雌二醇、低孕激素水平可促进卵泡发育(t＝1.99～625.75,P＜0.001,0.05);体外分离法获能精子活率明显高于上游法(t＝11.40～32.41,P＜0.001);中、重度OHSS组胚胎移植日血清及卵泡液血管内皮生长因子(VEGF)水平显著高于正常组(t＝4.26,11.51,P＜0.01).④结论激素水平、精子获能方法及VEGF水平对助生殖可能有影响作用.
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中药治疗黄体功能不足型不孕症临床观察
黄体功能不足是造成女性不孕的重要原因之一,黄体的主要功能是分泌孕酮、雌激素和松弛素.在黄体功能不足的妇女中,大多是孕酮分泌不足,而孕酮分泌不足,即使受精卵着床也会流产.
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黄体功能不全性不孕症中医及中西医结合治疗进展
黄体功能不全(LPD)是引起不孕的主要因素之一,由于黄体分泌孕酮不足,或黄体过早萎缩,卵泡发育不良,子宫内膜分泌欠佳,而影响受精卵着床,其重要因素是黄体生成激素(LH)分泌受到干扰而影响黄体合成和分泌孕酮(P)作用.
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睾穿精畸形部位对ICSI受精及胚胎发育的影响
ICSI技术(Intracytoplasmic Sperm Injection)即卵泡浆内单精子注射,1992年Palerml首次对人卵子进行ICSI操作,成功得到了首例ICSI婴儿[1],1996广州中山医科大学第一附属医院生殖中心为一对少精症不育夫妇助孕成功生下一女婴,成为我国第一例ICSI婴儿,为我国ICSI行业做出突破性的贡献.然而影响ICSI技术的因素很多:精子因素、卵子因素、技术操作、体外环境等.
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右侧残角子宫妊娠致足月活产一例
目的:右侧残角子宫妊娠致足月活产一例,方法:残角子宫受精处置方法.结果:得出残角子宫妊娠受精情况及采取措施.结论:残角子宫受精应及早手术,切除残角子宫.
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妊娠生理与保健
每一个生命的诞生都要经历母体孕育的阶段,这个过程涉及到生命的产生与早期的发育,人类生命早期较为脆弱,因此无论是正常的受孕还是母体妊娠期间的常规检查都十分重要,本篇文章即就受精过程以及妊娠期间注意事件进行阐述.
