首页 > 文献资料
-
整形美容外科领域治疗寻常痤疮的新疗法进展
寻常痤疮(以下简称痤疮)是全球常见的皮肤疾病之一.采用A型肉毒毒素、脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)和浓缩生长因子(concentrated growth factor,CGF)治疗痤疮,其方法较新,疗效较好.A型肉毒毒素通过抑制胆碱能神经末梢的乙酰胆碱释放,从而抑制皮脂腺皮脂的分泌.ADSCs可以促进巨噬细胞向M2型分化,同时抑制辅助性T细胞17亚群(Thelper 17 cells,Th17 cells)的功能,控制炎症反应.CGF富含多种生长因子、CD34+细胞和纤维蛋白骨架,可以促进组织修复再生.每一种治疗方法对痤疮形成的不同病理生理机制均具有良好的临床效果,为痤疮的治疗提供了较新的方法.
-
富血小板血浆对人原代脂肪来源干细胞增殖的影响
目的 观察富血小板血浆对人原代脂肪来源干细胞增殖的影响.方法 脂肪组织及静脉血来源于6例吸脂的女性患者,在无菌条件下,从脂肪组织中分离获取含原代脂肪来源干细胞的血管基质成分;在吸取脂肪的同时,抽取等单位体积的静脉血,离心制备获得富血小板血浆.采用Cellometer细胞计数仪及辅助,吖啶橙-碘化丙啶染色法对血管基质成分活细胞进行细胞计数;血液分析仪对富血小板血浆进行细胞计数.将细胞分为实验组与对照组,两组分别用含5%、10%、15%的富血小板血浆及含10%胎牛血清培养液干预.细胞计数仪检测在24,48,72,96h时,原代脂肪来源干细胞的数量值.结果 ①本实验血管基质成分成骨、成脂转化实验为阳性;Mark检测,第3代脂肪来源干细胞CD73、CD90为阳性,CD45为阴性,逆推验证,可从血管基质成分中,可获取原代脂肪来源干细胞;②通过血清离心法可获得约平均全血4倍的血小板;③实验组较对照组在24,48,72,96h时,ADSCs数量增多,密度增大,其中72,96h时段中,不同浓度的富血小板血浆对脂肪来源干细胞增殖有明显的促进作用,差异具有统计学意义(P ＜0.05).结论富血小板血浆对体外培养的人原代脂肪来源干细胞的增殖有促进作用.
-
脂肪来源干细胞对兔扩张后皮肤质量的影响
目的 探讨皮下局部注射脂肪来源干细胞(ADSCs)对扩张皮肤胶原纤维含量、微血管含量及皮肤厚度等的影响.方法 取新西兰大白兔的腹股沟脂肪,体外分离,培养获取,鉴定ADSCs;随机将20只新西兰大白兔分为实验组(n=10)与对照组(n=10),每只兔背部皮下埋置1枚扩张器(30ml).实验组于局部皮下注射ADSCs悬液1ml;对照组注射无血清DMEM培养基1ml;完成扩张后,切取扩张皮肤组织,并对其进行HE染色,观察皮肤厚度及微血管密度;Masson三色染色,观察胶原纤维情况;采用Elisa检测皮肤组织中碱性成纤维生长因子(bFGF)的表达量.结果 实验组扩张后,皮肤厚度与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);实验组微血管密度明显高于对照组(P＜0.05);Elisa检测结果示:实验组bFGF较对照组表达量增多(P＜0.05);实验组胶原纤维较对照组数量多,且粗大.结论 ADSCs能够促进碱性成纤维细胞生长因子表达,提高扩张皮肤中胶原纤维含量及微血管密度,增加扩张后皮肤厚度,提高扩张皮肤质量.
关键词： 脂肪来源干细胞 扩张皮肤 碱性成纤维细胞生长因子 胶原纤维 微血管密度 -
人脂肪来源干细胞部分生物学性状的实验研究
目的 对体外分离培养人脂肪来源干细胞的部分生物学性状进行分析.方法 将肿胀吸脂术获得的脂肪组织通过酶消化法分离培养脂肪来源干细胞,采用流式细胞仪检测细胞的表面标记;取第2代细胞进行成脂、成内皮细胞诱导.结果 体外培养的原代脂肪来源干细胞成分较复杂,形态各异,细胞生长缓慢;细胞传至第2代形态渐趋一致,以梭形为主,多次传代后细胞仍保持较强增殖能力.原代细胞CD29、CD31、CD34、CD49d、CD105、CD166表达为阳性;第2代细胞CD31、CD49d转为阴性,而CD29、CD105、CD166、Stro-1、Flk-1表达比例显著多于原代细胞.成脂诱导后细胞内可见大量脂滴形成,油红O染色阳性;成内皮细胞诱导后,细胞表达CD31、vWF等成熟内皮细胞标志.结论 通过吸脂术获得的大量原代脂肪干细胞是由极其复杂的各种细胞集合而成,在体外易于分离培养和传代扩增,传代后的细胞在特定条件下可诱导分化为脂肪细胞和血管内皮细胞,并表达间充质干细胞相关的表型,是组织工程理想的种子细胞.
-
鼠脂肪来源干细胞自体皮下移植的研究
目的 观察大鼠自体脂肪来源干细胞皮下移植成活的情况.方法 将60只Vistar大鼠随机分为3组,每组20只.实验组,取自体腹股沟区皮下脂肪组织,用Ⅰ型胶原酶消化法提取脂肪来源干细胞并进行传代培养;用脂质体法对细胞进行eGFP(增强型绿色荧光蛋白)转染标记.实验对照组,细胞转染标记后,利用G418使其细胞灭活.空白对照组,注射生理盐水.分别将其注射移植至大鼠自体耳郭皮下层,在注射后第2、4、6周时进行冰冻切片观察,并定量分析所形成组织量的转归情况.结果 实验组切片可见明显的绿色荧光组织层存留,其体积在各个时间点无统计学意义(P>0.05).结论 将单纯自体脂肪来源千细胞移植于耳郭皮下组织,可以存活,并形成均一稳定的组织结构.
-
体外扩增培养对兔脂肪来源干细胞的衰老及成骨分化能力的影响
目的 探讨体外扩增培养对兔脂肪来源干细胞的衰老及成骨分化能力的影响.方法 分离提取兔脂肪来源干细胞,取第5、10、15代细胞进行成骨诱导,并采用茜素红染色法比较不同代数细胞的成骨能力,β-半乳糖苷酶染色法比较不同代数细胞的衰老程度.结果 早期代数的细胞经成骨诱导后,出现矿化结节的时间较早,且在同一诱导时间下,与晚期代数的细胞相比,形成的结节数量多、体积大.随传代次数的增加,细胞外基质钙盐沉积量呈下降趋势,衰老细胞所占的比例呈上升趋势,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 随体外扩增培养,兔脂肪来源干细胞成骨分化能力减弱,细胞发生衰老程度增强.
-
人脂肪组织来源干细胞体外培养条件的优化
目的 探索人脂肪组织来源干细胞体外培养的佳条件.方法 人腹部皮下脂肪抽吸取材,采用胶原酶消化法获取细胞,采用含血清的DMEM培养液体外培养细胞.比较了不同胶原酶浓度、胶原酶消化时间和血清浓度对于人脂肪来源干细胞体外培养的不同效果.结果 采用0.5、1.0、1.5、2.0 mg/ml四种不同胶原酶浓度进行消化,发现在消化时间为1 h时,2.0 mg/ml组消化细胞总数多,活细胞比值与其他组比较,差异有显著意义.在消化时间为2 h时,消化细胞总数较1 h各组均增加,同时,1.0、1.5和2.0 mg/ml组消化细胞总数无统计学差异,活细胞比值1.0 mg/ml组和1.5 mg/ml组高.采用0、5%、10%、15%、20%五种不同血清浓度培养后发现,15%和20%组生长特性佳,明显优于另外三组.结论 对于人脂肪组织来源干细胞,胶原酶浓度1.0 mg/ml、消化时间2h、血清浓度15%是佳的培养条件.
-
腺病毒介导GFP基因标记人脂肪来源干细胞可行性研究
目的 研究腺病毒介导绿色荧光蛋白(GFP)基因标记人脂肪来源干细胞(ADSCs)的可行性.方法 通过酶消化法获取人ADSCs,采用流式细胞术检测表面标记物以及成脂分化诱导进行鉴定.将Ad-GFP通过不同感染复数(MOI分别为25、50、100)转染ADSCs,观察各组转染效率,找出适合的转染条件.观察GFP标记ADSCs后随时间衰减速率,确定标记效果的维持时间.结果 获取的细胞高表达CD49d、CD90、CD105,不表达CD34、CD45、CD106,经成脂诱导2周现脂滴,油红O染色成红色,符合ADSCs的多种特性.MOI分别以25、50、100转染后,转染效率分别为(77.3±4.2)％、(94.7±3.2)％、(96.3±3.0)％,MOI=50为转染的适宜条件.GFP标记ADSCs后,在2周内的标记率仍可高达55.0％,至4周后则衰减至17.0％.结论 本研究提示通过腺病毒能够高效地介导GFP基因导入ADSCs,快速表达出蛋白产物,维持2～4周的标记示踪效果.
-
低氧预处理对人脂肪来源干细胞增殖和分化潜能影响的研究
目的 探讨低氧(1％氧浓度)对脂肪来源干细胞增殖及分化潜能的影响.方法 用酶消化法培养脂肪来源干细胞;低氧预处理人脂肪来源干细胞于1％氧浓度下,48 h后检测脂肪来源干细胞的增殖情况及MTT法检测处理后各时间点的细胞活性,流式细胞仪检测细胞表面标志物,三系诱导后检测成脂、成软骨、成骨分化潜能.结果 低氧预处理促进脂肪来源干细胞增殖、并不改变其间充质干细胞表面标志CD90(99.92％ ±0.30％)和CD105(99.91％ ±0.04％),低表达血管内皮细胞的表面标志CD31 (0.48％±0.32％),低氧预处理能促进成脂、成软骨,但对成骨无影响.结论 缺氧预处理能提高脂肪来源干细胞的增殖及活性,间充质干细胞特性,为细胞疗法临床运用及组织工程运用提供了新的思路.
-
吸脂组织中脂肪干细胞分离和定向分化的研究
目的 探讨吸脂组织中的干细胞分离和体外诱导分化为表皮样细胞、成骨细胞及脂肪细胞的可能性.方法 通过电动负压吸引获取1例行吸脂手术的30岁女性腹部脂肪组织,酶消化法获取脂肪来源干细胞,体外培养扩增,通过流式细胞仪检测表面抗原的表达.取生长良好的第3代人脂肪来源干细胞,分别应用成表皮诱导培养液(70％培养液A+30％成纤维细胞培养基上清液+10 ng/L表皮生长因子),成骨诱导培养基(DMEM/10％ FBS,0.1μmol/L地塞米松,50 μmol/L维生素C,10 mmol/Lβ-甘油磷酸钠,100 U/ml青霉素,100 U/ml链霉素)和成脂肪细胞诱导培养基(DMEM+ 10％ FBS+ 500 μmol/L 1-甲基-3-异丁基黄嘌呤+1 μmol/L吲哚美辛)诱导20 d后,分别对成表皮诱导组进行免疫组化检测CK19表达,成骨诱导组进行碱性磷酸酶检测,成脂诱导组进行油红O检测.结果 流式细胞仪鉴定结果示,人脂肪来源干细胞CD44和CD49d为阳性,CD34为阴性.诱导20 d后,成表皮诱导组示免疫组织化学鉴定结构显示有CK19的表达;成骨诱导组示细胞碱性磷酸酶染色阳性;成脂肪细胞诱导组示油红O染色,胞质内脂滴均被染成红色,证实为脂性液体.结论 从吸出的脂肪组织中分离出脂肪来源干细胞,在体外进行了脂肪干细胞的扩增和传代,所分离的脂肪来源干细胞具备多向分化能力.
-
氯化钴预处理对大鼠脂肪干细胞成脂及增殖的影响
目的 观察脂肪来源间充质干细胞(ADSCs)在经氯化钴(CoCl2)预处理的条件下,其增殖、细胞状态变化以及成脂肪化倾向.方法 通过有限稀释法分离、培养SD大鼠ADSCs,取第3代ADSCs,分别向骨细胞、脂肪细胞定向诱导分化鉴定,利用流式细胞仪检测大鼠ADSCs细胞表面标志物CD29,CD34,CD44,CD45的表达.将ADSCs经不同浓度CoCl2干预,利用Western blot检测缺氧诱导因子1α(HIF-1 α)的表达情况.同时,利用MTT实验来检测大鼠ADSCs在不同浓度的CoC12下细胞增殖的改变;并且通过油红O定量检测大鼠ADSCs在经历缺氧后的成脂情况.结果 第3代ADSCs在倒置显微镜下观察,大多呈梭形,经流式鉴定,大鼠ADSCs细胞表面标志物CD29、CD44表达率高,而CD34、CD45表达率低,体外诱导培养的大鼠ADSCs能够向成骨细胞和成脂细胞分化,具有较高的自我更新能力.在MTT实验中,400、200 μmol/L CoC12组,ADSCs增值减弱;而100、50 μmol/L CoC12的实验组,缺氧造成的对细胞增殖和细胞毒性与空白对照组相比,没有变化(P＞0.05).HIF-1α的表达随着培养基中的CoC12的浓度而增加.在光镜下观察发现,随着CoCl2浓度的升高以及时间的延长,大鼠ADSCs的成脂倾向越发明显(P＜0.001).结论 ADSCs在处于体外适量的CoC12干预情况时,其增殖并不会受到影响,并且呈显著的增强其成脂倾向.
-
低氧预处理对人脂肪来源干细胞的活性及表面标志的影响
目的 探讨低氧(1%氧浓度)对脂肪来源干细胞增殖活性及表面标志的影响.方法 用酶消化法培养脂肪来源干细胞;低氧预处理脂肪来源干细胞于1%氧浓度下48h后检测脂肪来源干细胞的增殖情况及MTT法检测处理后(24、48、72h)的细胞活性,流式细胞仪检测细胞表面标志物.结果 低氧预处理期间不仅细胞增殖能力增强,而且低氧预处理后的脂肪来源干细胞具有较常氧组培养更强的活性,表面标志较常氧组无明显差异.结论 缺氧预处理能提高脂肪来源干细胞的增殖能力及活性,维持脂肪来源干细胞的间充质干细胞特性,为细胞疗法的临床应用提供了新的思路.
-
脂肪来源干细胞对兔皮肤组织扩张后回缩率的影响
目的 探讨在皮肤组织扩张过程中注射脂肪来源干细胞对扩张皮瓣回缩率的影响.方法 取健康新西兰大白兔的脂肪,体外分离、培养并传代脂肪来源干细胞,行免疫细胞化学表面标志物及表皮细胞诱导分化鉴定,并利用EdU染色对脂肪来源干细胞进行标记;20只新西兰大白兔随机分为实验组和对照组,每组各10只;在兔背部埋置一30 ml扩张器;实验组在扩张皮下注射1ml脂肪来源干细胞悬液,细胞密度为5×106/ml;对照组仅注射1ml无血清DMEM培养基;常规组织扩张至预期容量;切取扩张组织,观察切片厚度及组织学变化;计算两组回缩率并作统计学分析;采用免疫组化染色对组织中血管内皮生长因子和内皮细胞特异性标记物(CD31)进行检测.结果 与对照组相比,实验组扩张皮瓣回缩率明显降低(P＜0.05);组织学显示,实验组扩张皮肤厚度大于对照组(P＜0.05);免疫组化显示,实验组CD31、VEGF表达量增多,毛细血管增生明显.结论 脂肪来源干细胞能够促进新生血管生成及皮肤组织再生,很大程度地减少了扩张皮肤组织的回缩率,从而提高了皮肤扩张效率.
-
脂肪来源干细胞对光老化皮肤细胞外基质的影响
细胞外基质(extracellular matrix,ECM)作为人体组织的主要成分之一,在维持细胞形态结构和功能完整性方面发挥着重要作用[1].它是分布于细胞外的蛋白质和多糖等大分子构成的网状结构,包括纤维网架(胶原蛋白和弹性蛋白)、黏着成分(非胶原糖蛋白)、凝胶样基质(氨基葡聚糖和蛋白多糖)3大类.作为组织的非细胞成分,ECM参与细胞的增殖、迁移和分化等生物学过程.
-
脂肪来源干细胞在创面愈合和衰老皮肤中的应用
2001年,Zuk等[1]首次从吸脂术中废弃的脂肪组织中分离出一种具有成纤维样细胞形态的细胞亚群,命名为脂肪组织提取细胞(processed lipoaspirate, PLA),证实为间叶细胞来源,具有多向分化潜能;次年又从PLA中分离并证实了干细胞的存在,命名为脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells, ADSCs)[2].2003年,Gimble等[3]发现,ADSCs可分化为脂肪细胞、软骨细胞、肌细胞、神经元及成骨细胞.ADSCs被证实与BMSCs在生长动力学、细胞衰老、多向分化潜能和基因转导能力无显著差异[4],可将ADSCs作为替代物应用于组织工程,由此拉开了ADSCs应用研究的帷幕.笔者现就ADSCs在创面愈合和衰老皮肤中的应用作一述评.
-
"循证"脂肪来源干细胞
2001年Zuk经过系列研究后发现,脂肪组织中存在多能干细胞,并将其称为脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells, ADSCs)[1].随着研究的深入,大量研究证实,该细胞分布广泛,易于获取,分离和培养条件简单,具有多向分化能力.而且,脂肪组织中此类干细胞的含量高于骨髓中的干细胞,因此,成为近年来受关注的成体干细胞之一.随着关注度的增加,有人认为它是"万能细胞",百分百有效,并冠之以"青春细胞"的美名.加之近年来脂肪移植的盛行,"青春细胞移植""青春细胞脂肪移植"成为业内流行语.在这种大趋势下,出现了假借干细胞盲目夸大疗效,甚至虚假的宣传,这些无疑将对ADSCs在国内健康有序的发展造成不良影响.为长远计,对待ADSCs,有必要进行"循证"分析,冷静观察、深入研究、客观评价,用理性观点还ADSCs一个真实面目.
-
可用于临床的脂肪组织基础知识概述
脂肪组织中含有干细胞,这一认识驱使我们进一步探索在更广泛的临床状况下利用脂肪和脂肪来源干细胞的可能性.关于脂肪来源干细胞的获取、分离、和分离的脂肪来源干细胞的分化特性的新知识已带来新的研究,这些新研究的研究方向是新的组织工程构建,以及脂肪来源干细胞转化为诱发的多能干细胞.临床上,脂肪移植物和脂肪来源干细胞在美国及全世界范围内的使用急剧增加,同时,以脂肪来源干细胞为基础的治疗方法的安全性和有效性带来的问题也随之增多.当前,FDA还未批准分离的脂肪来源干细胞用于任何临床领域.
-
脂肪来源干细胞:整形外科科研与临床的新视野
有关应用自体脂肪移植技术所进行的美容外科应用研究较多,如脂肪移植隆乳和脂肪移植面部填充.尽管这些美容手术显示了良好的效果,大有前途,但要建立正规的修复重建规程,仍须做出更多改进.人脂肪来源(间质)干细胞(adipose-derived stem/stromal cells, ADSCs)可作为再生医学手段,用于修复如骨、脂肪、软骨及血管等由间叶细胞构成组织的缺损.ADSCs在整形外科领域有大量、广泛的潜在应用前景.本期PRS专栏,我们将集中探讨ADSCs在整形、再造外科领域的基础研究与临床应用.
-
年龄因素对人类脂肪来源干细胞的影响
背景与目的 脂肪来源间质干细胞(ADMSCs)是一种健康的具有多向分化潜能的来源细胞.其可简单获取,并可应用于多种再生领域.本研究的目的是评估衰老对ADMSCs的影响,探讨与其相关的形态学、衰老特性、生长因子表达和成骨.方法 按不同的年龄组(婴幼儿、成年、老年)获取细胞并培养.利用显微镜检测其形态学特征,利用流式细胞术探查细胞表面标记物.利用实时(real-time)聚合酶链反应测量端粒长度.对比各组间相关成血管和成骨生长因子的表达.通过评估诱导反应及RUNX-2和骨钙蛋白mRNA表达的定量分析,来进一步探索成骨能力.结果 每个供区获取到相同分离比例的间质干细胞,不考虑年龄因素.婴幼儿的脂肪来源于细胞(ADSCs)形态学上表现出瘦长轴状,与老年组相比其端粒长度更长.血管生成因子在婴幼儿组细胞中有更高的表达,而成骨表达在各组间均相似.碱性磷酸酶染色和茜素红染色证实,婴幼儿组干细胞对成骨诱导的反应比老年组更明显,视为与骨相关的基因表达.结论 各年龄组的ADMSCs均是有活性的.与老年组相比,婴幼儿组的来源细胞形态学上表现为梭形,端粒较长,成血管及成骨能力较强.相反,所有年龄组的来源细胞均表现相似的成骨旁分泌能力,因此,我们推断其在成年至老年阶段仍可保持临床适用性.
-
人类脂肪来源干细胞经长期深低温保藏后保留的增殖能力和多能性
背景 人类脂肪来源干(间质)细胞作为间叶细胞谱系(包括脂肪,骨骼肌和心肌,骨,软骨,血管)组织缺损的再生疗法的工具,是很有应用前景的.同其他领域所发生的一样(包括造血干细胞和脐带血细胞在基于细胞的治疗方法中的应用),在未来可能的临床应用中,脂肪来源干细胞深低温保藏也许是一项必不可少的基本技术.方法 作者从18位患者的抽吸获得脂肪中分离出脂肪来源干细胞,并在干细胞深低温保藏6个月前后分别检测它们的增殖能力和多功能性,深低温保藏过程遵循他们已确定的方案.通过检测培养细胞的倍增时间对细胞增殖能力进行量化分析,通过分析脂肪来源干细胞向成软骨、成骨、和成脂谱系细胞的分化确定细胞的多功能性.另外,通过流式细胞术确定细胞表面标记物的表达谱,并对新鲜的和经深低温保藏的脂肪来源干细胞表面标记物的表达谱进行对比.结果 经深低温保藏的脂肪来源干细胞完全保存分化成脂肪细胞、成骨细胞、成软骨细胞的能力及增殖能力.流式细胞术分析结果显示深低温保藏前后细胞表面标记物表达谱保持不变.结论 在现有的方案下,脂肪来源干细胞至少可深低温保藏6个月,且不损失任何增殖能力和分化潜能.这些结果保证了自体库存的脂肪来源干细胞在未来的临床应用中的可用性.
