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年龄因素对人类脂肪来源干细胞的影响
背景与目的 脂肪来源间质干细胞(ADMSCs)是一种健康的具有多向分化潜能的来源细胞.其可简单获取,并可应用于多种再生领域.本研究的目的是评估衰老对ADMSCs的影响,探讨与其相关的形态学、衰老特性、生长因子表达和成骨.方法 按不同的年龄组(婴幼儿、成年、老年)获取细胞并培养.利用显微镜检测其形态学特征,利用流式细胞术探查细胞表面标记物.利用实时(real-time)聚合酶链反应测量端粒长度.对比各组间相关成血管和成骨生长因子的表达.通过评估诱导反应及RUNX-2和骨钙蛋白mRNA表达的定量分析,来进一步探索成骨能力.结果 每个供区获取到相同分离比例的间质干细胞,不考虑年龄因素.婴幼儿的脂肪来源于细胞(ADSCs)形态学上表现出瘦长轴状,与老年组相比其端粒长度更长.血管生成因子在婴幼儿组细胞中有更高的表达,而成骨表达在各组间均相似.碱性磷酸酶染色和茜素红染色证实,婴幼儿组干细胞对成骨诱导的反应比老年组更明显,视为与骨相关的基因表达.结论 各年龄组的ADMSCs均是有活性的.与老年组相比,婴幼儿组的来源细胞形态学上表现为梭形,端粒较长,成血管及成骨能力较强.相反,所有年龄组的来源细胞均表现相似的成骨旁分泌能力,因此,我们推断其在成年至老年阶段仍可保持临床适用性.
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血红素加氧酶：一种血红素代谢酶及其近况
血红素加氧酶(HO)是胆红素形成过程中的第一种酶，也是一种限速酶，这种酶可使血红蛋白或其它含有血红素的蛋白质中的血红素降解形成胆绿素。这是一种需能过程，因为在降解过程中卟啉环中的铁离子的游离、一氧化碳(CO)的释放和胆绿素的生成，均需要烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)通过细胞色素C P450系统提供电子，并需要消耗分子氧(图1)。在微粒体酶－胆绿素还原酶的作用下，胆绿素还原形成胆红素。肝细胞微粒体分析证实，在反应底物－氯化血红素的存在时，HO的活性增加［1］，其它化合物，如氯化钴和各种重金属，均能使HO的活性上调［1，2］。Maines［3］在研究中发现了血红素代谢酶的一种发展形式，由此可以解释新生儿黄疸中胆红素过多生成的原因。另外，已经发现纯化和特性更好的32 kd的HO-1蛋白。随着金属卟啉的合成，HO的活性被抑制，从而可以更进一步了解HO活性的细胞结果，并可改进防止新生儿高胆红素血症的措施。20世纪80年代，发现了血红素加氧酶HO-2的组成形式［4］。20世纪80年代末期，发现了调控HO-1的基因调节。Shibahara等［5］在转录水平证实了进行HO-1的诱导。随着在这项领域的研究进展，人们已经注意到HO-1的基因诱导是氧应激的一种普遍标记［6］。目前，HO-1诱导反应的普遍性已经更清楚。随着分子生物学和分子遗传学技术的不断进步，HO的生化特性、作用和调节机制将越来越清楚。
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TNFα对血管内皮细胞PDGF-B链基因转录的影响
TNFα主要由巨噬细胞、T细胞和NK细胞产生,是一种在急、慢性炎症过程中均有重要作用的炎症介质.动脉粥样硬化(AS)是以动脉壁内皮结构、功能损害和平滑肌细胞增殖变化为主的慢性炎症过程.AS时TNFα合成增多,且与AS的严重程度成正比.PDGF是以二聚体(AA,BB和AB)形式存在的促分裂剂.其中,PDGF-B链由PDGF-B链基因编码,该基因mRNA在AS血管内皮细胞中表达明显增高.因此,研究在TNFα作用下,血管内皮细胞PDGF-B链基因表达调控的分子机制对于阐明动脉粥样硬化的发病机制具有重要意义.目的:本实验旨在确定人PDGF-B链基因上TNFα诱导反应元件的位置.方法:用限制性内切酶和PCR等方法对PDGF-B链基因5'上游序列进行定向删切,构建了一系列含人PDGF-B链基因不同上游序列的荧光素酶报告基因质粒.以培养的HUVEC和EVC304内皮细胞株为材料,用LipofectaminTM法转染细胞.将构建的质粒pSIS-1758/+43 Luc、pSIS-189/+43 Luc和pSIS-84/+43 Luc分别与内对照质粒pSV-β-Gal共转染培养的内皮细胞,用200 U/mL TNFα分别处理转染内皮细胞18 h,收集细胞裂解物,检测荧光素酶和β-半乳糖苷酶活性,计算荧光素酶的比活性.结果:在PDGF-B链基因上游序列-1758/+43 bp和-189/+43 bp存在下,TNFα可使转染HUVEC荧光素酶表达量较对照组明显增加,前者对照组为3.43±0.01,TNFα组5.41±0.24,P>0.05 vs control;后者对照组为4.30±0.01,TNFα组7.15±0.88,P>0.01, vs control.而在PDGF-B链基因上游序列-84/+43 bp存在时,转染HUVEC荧光素酶表达量显著降低,对照组1.72±0.55,TNFα组1.90±0.69.两组无明显差异.同种方法转染EVC304内皮细胞株,结果一致.结论:TNFα促进内皮细胞PDGF-B链基因表达依赖该基因上游序列-189/+43 bp的存在,即在-189/+43 bp范围内可能存在TNFα诱导反应的顺式调控元件.
