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外周血单核细胞中肺炎衣原体特异性抗原的检测
目的:肺炎衣原体(Cpn)特异性抗原检测方法的建立及其应用.方法:分离人外周血单核细胞(PBMC),用直接免疫荧光(DIF)检测PBMC中的Cpn特异性抗原,同时用间接微量免疫荧光(MIF)检测Cpn抗体.结果:颈动脉粥样硬化病人和正常人PBMC中Cpn特异性抗原检出阳性率分别为62%和30%(P<0.01);血浆中Cpn IgG的检出阳性率分别为72%和28%,P值<0.001;血浆中Cpn IgM的检出阳性率分别为16%和12%(P值>0.05).结论:PBMC中的Cpn特异性抗原和血浆中Cpn-IgG的高检出率均见于颈动脉粥样硬化病人,但抗原的检测具有更大的临床意义.
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自制与进口肺炎衣原体单克隆抗体的特性比较
目的:自制肺炎农原体单克隆抗体(Cpn-McAb)与进口Cpn-McAb的特性比较及临床应用.方法:双向琼脂扩散法鉴定自制Cpn-McAb的效价和IgG亚型,用显色法检测单抗与Cpn-MOMP的免疫反应,然后用异硫氰酸荧光素(FITC)标记纯化的IgG.为了评估Cpn-McAb,用自制和进口Cpn-McAb同时检测外周血标本454例.另外,分别从Cpn特异性抗原(Cpn-Ag)阳性的外周血单核细胞(PBMC)标本(A组)中和Cpn-Ag阴性的对照组(B组)中随机各挑选40例,用PCR检测PBMC中的Cpn-DNA.结果:免疫琼脂扩散结果表明,Cpn单抗为IgG2b亚型,扩散效价为1:128.在1:30工作浓度下,微量免疫荧光检测的结果表明,自制Cpn-McAb与鹦鹉热衣原体有较弱的交叉反应;与沙眼衣原体无交叉反应,特性与进口Cpn-McAb一致.自制Cpn-McAb检测PBMC的Cpn-Ag阳性率为53.3%(242/454),进口Cpn-McAb检测PBMC的阳性率为52.6%(239/454),两种单抗检测同时阳性的标本207例,Kappa值是0.704,根据其判断标准提示两者有较高的一致性.A、B两组Cpn-DNA阳性标本分别为38例和2例.结论:自制Cpn-McAb几乎和进口Cpn-McAb一样有较高的特异性和敏感性,有可能替代进口单抗用于临床Cpn感染的检测,有助于相关疾病的诊治.
关键词: 肺炎衣原体单克隆抗体 微量免疫荧光 外周血单核细胞 -
应用巢式-实时定量PCR方法检测慢性乙型肝炎患者PBMC中HBV cccDNA
乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA( HBV cccDNA)是HBV复制的原始模板,是HBV持续感染的关键因素.外周血单核细胞(PBMC)中HBV cccDNA的存在状态及动态变化成为研究HBV肝外分布及复制问题的热点.诸多研究证实,PBMC中存在HBV DNA,但是否存在HBV复制模板HBVcccDNA及复制过程,却有不同意见.国内外学者进行大量探索,建立了许多方法用于检测乙型肝炎患者PBMC等标本中HBV cccDNA,但因方法的特异性和敏感性不够高,重复性欠佳,迄今尚无可靠的检测方法和商品化试剂[1-3].本实验建立巢式-实时荧光定量PCR方法,用于检测慢性乙型肝炎患者PBMC中HBV cccDNA,并初步分析PBMC中HBV cccDNA的存在状态及临床意义,探索研究HBV复制状态、指导临床诊断和治疗的新方法.
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慢加急性重型乙型肝炎患者外周血单核细胞PD-L1表达及临床意义
重型乙型肝炎病情进展迅速,死亡率高达70%~80%以上,是目前我国重型肝炎死亡的主要原因,但其发生机制未完全清楚.单核细胞是体内重要的抗原提呈细胞,在炎症情况下可发育成巨噬细胞或树突状细胞,在诱导抗感染免疫和启动炎症反应过程中发挥重要作用.
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FAS抗原与慢性丙型肝炎关系的研究
目的通过观察慢性丙型肝炎(CHC)患者肝组织及外周血单核细胞(PBMC)FAS抗原表达对CHC病情的影响,进而探讨FAS系统及HCV RNA水平与CHC的关系及临床意义.方法采用肝活检组织病理、免疫组织化学、PCR及血液生化等方法检测41例CHC患者的肝组织和PBMC中FAS抗原、血清HCV RNA及肝功能,观察肝组织和PBMC中FAS抗原表达情况与血清HCV RNA水平及肝损伤的关系.结果(1)CHC患者PBMC的FAS阳性率为41.5%(17/41),肝组织FAS阳性率为65.6%(21/32).(2)CHC患者PBMC FAS阳性组血清HCV RNA和ALT水平均显著高于FAS阴性组(P<0.05).结论(1)CHC患者肝组织和PBMC中FAS表达与肝组织炎症及血清病毒载量有关;(2)FAS系统可作为观察CHC病情的新指标,协助诊断与治疗.
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Faecalibacterium prausnitzii对人外周血单核细胞IL-10、IL-12分泌以及CD25+Foxp3+Treg细胞分化的影响
背景:Faecalibacterium prausnitzi( FP)是人体肠道中常见的共生厌氧菌,与炎症性肠病的关系密切.目的:研究FP对人外周血单核细胞(PBMCs)白细胞介素(IL)-10、IL-12分泌以及CD25+ Foxp3+ Treg细胞分化的影响.方法:将FP、长双歧杆菌、大肠杆菌、不同浓度的FP上清或不同细菌培养基分别与人PBMCs体外共培养后,采用ELISA法检测细胞培养上清液中IL-10和IL-12浓度;流式细胞术检测CD25+ Foxp3+ Treg细胞比例.结果:与培养基相比,FP、长双歧杆菌均可刺激PBMCs分泌大量IL-10和IL-12,IL-10/IL-12比值明显增高,CD25+ Foxp3+Treg细胞分化明显增加,且FP的效果优于长双歧杆菌.FP上清对IL-10/IL-12比值的作用呈浓度依赖性,稀释10倍的FP上清组IL-10/IL-12比值升高为明显,且CD25+ Foxp3+ Treg细胞分化能力亦为显著.结论:FP及其上清均具有抗炎作用和促进外周血CD25+ Foxp3+Treg细胞分化的能力,提示FP是一种潜在的益生菌.
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HBV感染的慢性肝病患者外周血单核细胞中干扰素-α/β受体的表达
干扰素(IFN)是目前治疗慢性乙型肝炎(CHB)公认的有效药物,其HBeAg和HBV DNA的近期阴转率为40%~50%.影响IFN疗效的因素很多,如血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,肝脏病变活动性,HBV前C区基因变异及IFN中和抗体等.本实验对HBV感染的慢性肝病患者外周血单个核细胞(PBMCs)中IFN受体表达水平进行检测,并观察其与IFN疗效间的关系,现报告如下.
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严重急性呼吸综合征患者不同临床标本中冠状病毒基因结果分析
为了解严重急性呼吸综合征(SARS)患者不同标本中SARS冠状病毒RNA的阳性检出率,对我院收治的27例SARS患者的咽拭、漱喉液、血清(浆)、外周血单核细胞(PBMC)及粪标本SARS冠状病毒进行检测,现将结果报告如下.
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CARD15基因突变与中国人克罗恩病易感性的关系
克罗恩病(CD)是一种多基因决定的疾病.近年来,位于染色体16q21的胱冬蛋白酶激活与募集区(caspase activation and recruitment domain 15, CARD15)基因作为第一个与CD相关的基因被多个实验小组所证实[1].CARD15基因是核苷酸结合寡聚化结构域/凋亡蛋白酶活化因子1(nucleotide-binding oligomerisation domain-1/apoptotic protease activating factor 1, Nod1/Apaf-1)家族的一员,主要在外周血单核细胞中表达,并可编码1个有2个CARD结构域和6个富含亮氨酸重复区(leucine-rich repeats, LRR)的蛋白质.CARD15蛋白在对细菌脂多糖类(LPS)发生的免疫反应中起作用,可识别外来细菌的胞壁酰二肽(MDP),然后激活核因子(NF)-κB[2].
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嗜酒合并乙型肝炎病毒感染与转化生长因子β1表达水平的关系
有关转化生长因子β1(TGF-β1)促进肝纤维化发生发展作用的研究受到高度重视,本研究旨在通过研究嗜酒与乙型肝炎病毒(HBV)感染患者外周血单核细胞(PBMC)中TGF-β1mRNA表达水平的关系,为两者协同作用加重肝脏损害提供科学依据.
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不明原因持续肝功能异常患者肝组织和外周血单核细胞中乙型肝炎病毒DNA检测分析
近年来随着原位分子杂交方法的建立,使我们能够直观地检测到细胞和组织中的乙型肝炎病毒(HBV)DNA颗粒及其定位分布情况.
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酒精性肝病与白介素-1受体拮抗剂基因内含子2多态性的关系
白介素1受体拮抗剂(IL-1 RN)是IL-1强有力的内生拮抗剂,通过抑制IL-1的作用而产生一系列生物活性.为了探讨IL-1 RN多态性与酒精性肝病的关系,我们采用PCR技术对酒精性肝病患者外周血单核细胞(PBMC)基因组DNA的IL-1 RN内含子2的基因型多态性进行了检测,现报告如下.
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胱天蛋白酶募集域蛋白9在急性胰腺炎发病早期的作用机制
目的研究胱天蛋白酶募集域蛋白9(CARD9)在急性胰腺炎(AP)发病早期阶段的作用及其机制。方法收集49例 AP 患者[其中33例为轻症急性胰腺炎(MAP)患者,16例为重症急性胰腺炎(SAP)患者]入院后第1,第3和第5天的外周血单核细胞(PBMC);对照组为20名健康志愿者。采用 Western 印迹检测 AP 患者 PBMC 中 CARD9、B‐cell lymphoma(Bcl)‐10表达水平及 p65 NF‐κB 和p38 MAPK 的磷酸化水平。免疫共沉淀方法和免疫荧光细胞化学分析检测对照组、SAP 和 MAP 入院第1天 PBMC 中 CARD9与 Bcl‐10共定位、表达及结合情况。采用单因素方差分析、Mann‐Whitney 检验比较组间数据。 Pearson 方法进行相关性分析。结果 Western 印迹结果显示,入院第1、第3、第5天时,SAP 组患者 PBMC 中 CARD9、Bcl‐10的表达(1.12±0.05、1.03±0.03、1.01±0.01和1.74±0.08、1.72±0.10、1.69±0.11)均明显高于对照组(0.33±0.10和1.02±0.11)和 MAP 组(分别为0.71±0.02、0.55±0.06、0.25±0.07 和1.15±0.03、1.09±0.07、1.01±0.04),差异均有统计学意义(F =35.76,18.20,P均<0.01)。入院第1、第3天 SAP 组患者 PBMC 中 p38 MAPK 磷酸化水平(1.88±0.08、1.68±0.11)显著高于对照组(0.58±0.24)和第1、第3、第5天的 MAP 患者(0.86±0.08、0.77±0.10、0.73±0.20,F=7.24,P均<0.01)。入院第1、第3天 SAP 组患者 PBMC 中 p65 NF‐κB 磷酸化水平(1.64±0.02、1.55±0.03)显著高于对照组(1.17±0.13)和第3、5天的 MAP 组患者(1.06±0.14、0.87±0.20,F=4.51,P均<0.05)。免疫荧光结果显示 CARD9与 Bcl‐10共定位于细胞核,免疫共沉淀 SAP 组 CARD9与Bcl‐10结合程度明显高于对照组和 MAP 组。 Pearson 相关分析表明,AP 患者 PBMC 内 p65 NF‐κB 、p38 MAPK 蛋白磷酸化水平与 CARD9表达水平呈正相关(r=0.692、0.834,P均<0.01)。结论 CARD9与NF‐κB 、MAPK 呈正相关,提示 CARD9在 AP 疾病中激活 NF‐κB 和 MAPK 信号通路诱导炎性因子产生。
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A23187诱导恶性黑色素瘤患者的外周血单核细胞向树突状细胞分化
A23187为一种钙离子载体(calcium ionophore,CI),可提高胞浆内游离钙水平,模拟某些细胞内信号转导事件,导致多基因活化[1-2].我们先前曾探讨了A23187对正常人外周血单核细胞(peripheral monotytes,PBMC)来源的DC的影响[3],近,我们进行了有关A23187诱导MMe患者的PBMC向DC分化的实验研究.
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小胶质细胞和外周血单核细胞在心境障碍中的作用
炎症在心境障碍发病中的作用引起了学术界的关注.小胶质细胞和外周血单核细胞作为中枢和外周免疫的代表性细胞在心境障碍患者中均表现为异常活化,并释放相应的细胞因子.2种免疫细胞分别在遗传表达和功能等方面存在共性,探索两者在免疫通路中如何对情绪、行为等产生影响,对于理解心境障碍的发病机制和研发潜在的药物均具有重要作用.
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非小细胞肺癌患者化疗前后免疫功能的改变
目的 比较非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者外周血CD3~+T细胞、CD4~+CD25~(high)调节性T细胞(regulatory T cell,Treg cell)、γ-干扰素(interferon γ,IFN-γ)和白介素-12(interleukin-12,IL-12)与健康人的差异,并分析化疗前后CD4~+CD25~(high)Treg细胞、IFN-γ和IL-12的改变,探讨肺癌患者化疗前后免疫功能的改变.方法 选取NSCLC患者20例,健康志愿者20例为对照.分别抽取患者化疗前、化疗后3 d及7 d外周血3 mL,分离其外周血单个核细胞 (peripheral blood mononuclear cell,PBMC),以流式细胞仪检测CD3~+T细胞比例、CD4~+CD25~(high)Treg细胞比例(%),并取上清液检测IFN-γ和IL-12.结果 健康组CD3~+T细胞比例为(61.52±13.46)%,肺癌组化疗前CD3~+T细胞比例为(55.15±20.11)%,化疗后3 d、7 d分别为(57.73±14.08)%和(62.79±7.80)%.肺癌组化疗前与化疗后3 d、7 d比较,差异无统计学意义(P>0.05).健康组CD4~+CD25~(high)Treg细胞的比例为(2.14±0.85)%;肺癌组CD4~+CD25~(high)Treg细胞的比例在化疗前为(2.76±0.53)%,较健康人明显升高(P<0.05);肺癌组CD4~+CD25~(high)Treg细胞的比例在化疗后3 d、7 d分别为(2.54±0.57)%、(2.72±0.29)%,较化疗前减少,而在3 d减少较7 d明显,各组比较,P<0.05.健康组 IFN-γ和IL-12分别为(34.36±4.38)和(33.24±4.36)pg/mL;肺癌组IFN-γ和IL-12在化疗前分别为(38.47±5.04)和(34.82±5.30)pg/mL,与健康组比较,差异无统计学意义(P>0.05).肺癌组IFN-γ在化疗后3 d、7 d分别为(40.42±5.66)和(39.27±6.07)pg/mL,较化疗前有所增加,化疗后3 d和化疗前比较,P<0.05,但化疗后7 d和化疗前比较,P>0.05.肺癌组IL-12在化疗后3 d、7 d分别为(35.51±5.03)和(38.62±6.44)pg/mL,较化疗前有所增加,化疗后3 d和化疗前比较,P>0.05,化疗后7 d和化疗前比较,P<0.05.结论 化疗对肺癌患者机体的免疫环境可能具有优化作用,从而增强机体的抗肿瘤免疫应答.
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不同含糖的乳酸盐腹膜透析液对外周血单核细胞线粒体跨膜潜能的影响
细胞凋亡主要是细胞核和染色质的改变,研究发现抗凋亡基因Bcl-2位于线粒体内膜意味着凋亡细胞线粒体出现异常.已有一些实验观察到淋巴细胞、胸腺细胞、U937细胞及肝细胞凋亡早期常伴线粒体异常,进一步观察发现,线粒体跨膜潜能(ΔΨm)下降常伴有线粒体渗透转移(PT)肿胀,即线粒体PT孔的开放.单核细胞是机体的重要防御细胞,已有文献报道不同含糖的乳酸盐腹膜透析液(L-PDS)对腹膜巨噬细胞、腹膜间皮细胞及外周血白细胞有损害[1].体外实验观察到当细胞与L-PDS孵育后,出现胞内酸中毒导致细胞功能异常而死亡.本研究通过调查L-PDS对外周血单核细胞线粒体ΔΨm的影响,观察线粒体PT肿胀情况,结果报道如下.
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类风湿关节炎患者外周血白细胞介素-32的表达及临床意义
目的 分析类风湿关节炎(RA)患者外周血白细胞介素-32(IL-32)的表达及临床意义.方法 选取122例RA患者,根据活动度积分(DAS28)将其分为高活动组45例(DAS28> 5.1)、中低活动组42例(DAS28≥2.6~≤5.1)和缓解期组35例(DAS28 <2.6).选取同期50例非RA结缔组织病患者作为非RA组,选取同期50名健康志愿者作为对照组.对5组研究对象血清IL-32、TNF-α水平及外周血单核细胞(PBMC)中的IL-32、TNF-α基因相对表达量进行检测和比较.结果 高活动组患者PBMC中IL-32、TNF-α mRNA相对表达量和血清IL-32、TNF-α水平高,其次为中低活动组患者,非RA组患者的血清TNF-α水平显著高于缓解期组和对照组(P<0.05).缓解期、非RA组和对照组PBMC中IL-32、TNF-α mRNA相对表达量和血清IL-32水平的差异均无统计学意义(P>0.05),缓解期组和对照组研究对象的血清TNF-α水平的差异无统计学意义(P>0.05).RA患者血清和PBMC中的IL-32、TNF-α水平与RA患者的病情指标均具有相关性(P<0.05).结论 RA患者表现为外周血IL-32水平的显著升高,其水平与其疾病严重程度和活动性程度指标具有相关性,提示了IL-32可能在RA的活动性增强过程中具有重要的作用,可作为评价RA病情的辅助指标.
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生殖器疱疹患者外周血单核细胞Toll样受体的表达
Toll样受体(TLR)能识别病原微生物进化中的保守分子-病原相关的分子模式(PAMP),是机体通过感知病原微生物直接作出防御反应的天然免疫识别受体.生殖器疱疹(GH)主要由单纯疱疹病毒(HSV)-2型感染引起,HSV-2易在宿主的骶神经节中长期潜伏,当宿主在焦虑、疲劳等情况下,病毒可以复苏和再激活出现感染复发.人体感染HSV后产生的抗体对消除病毒血症及限制病程起一定的作用,但不能预防感染复发.目前研究表明,机体免疫因素特别是细胞免疫在复发性生殖器疱疹发病中起着重要的作用.
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寻常性银屑病患者外周血单核细胞自然状态下合成和分泌的TNF-α生物学活性研究
TNF-α分为分泌型TNF-α(sTNF-α)和膜相关型TNF-α(MA-TNF-α).sTNF-α可通过其相应受体结合在单一核细胞膜上,形成膜结合型TNF-α,简称膜TNF-α.TNF-α是银屑病免疫炎症反应的重要介质,在银屑病的病理过程中发挥重要作用[1].