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端粒重复扩增生物发光分析法定量检测端粒酶活性
目的:建立端粒酶活性定量检测的TRAP-发光分析法.方法:细胞株、组织样品与引物孵浴后,释放的焦磷酸盐由硫酸化酶作用转变为ATP,用荧光素酶生物发光系统检测发光信号;比较TRAP-发光分析法与TRAP-ELISA的结果.结果:TRAP-发光分析法的线性范围在2～1 000个细胞之间.检测结果与TRAP-SYBR Green染色一致,与TRAP-ELISA法显著相关(r2=0.992,P＜0.001).结论:TRAP-发光分析法是一种稳定、快速、实际可行的端粒酶活性的定量分析方法.
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端粒酶活性及其hTERT基因在增生性组织中的表达
目的:探讨端粒酶在增生性组织中的表达状况.方法:采用 Kim的TRAP法和 RT-PCR技术检测增生性肉芽组织、子宫内膜组织以及部分生长旺盛的癌旁组织的端粒酶活性及其催化亚基 hTERT基因的表达.结果:以 Hela细胞对照作为阳性对照,3类组织可部分检测到低水平的端粒酶活性及hTERT基因的表达.结论:端粒酶在生长旺盛的增生性组织中呈低水平表达,与细胞的生长状态有关.
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端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人胃癌细胞的影响
目的:观察端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人胃癌细胞株的作用.方法:用端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸与人胃癌细胞株共同温育一定时间后,观察细胞形态变化,检测细胞DNA含量的分布,测定端粒酶活性.结果:端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导人胃癌细胞凋亡,抑制端粒酶活性,在形态学上表现为细胞膜起泡、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成;电泳呈凋亡特征性Ladder带;流式细胞仪分析显示,在G1期前出现亚2倍体凋亡峰:端粒酶活性抑制.结论:端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导胃癌细胞凋亡,抑制端粒酶活性,抑制端合成,从而抑制胃癌细胞的增殖.
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三氧化二砷对RAJI细胞的诱导凋亡作用及其作用机制
目的:探讨三氧化二砷对白血病RRJI细胞的诱导凋亡作用及其作用机制.方法:以不同浓度的三氧化二砷作用于体外培养的RAJI细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪及瑞氏染色法观察细胞凋亡,TRAP-PCR-ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性.结果:三氧化二砷可显著地降低RAJI细胞端粒酶活性,抑制细胞的生长,诱导细胞发生凋亡.并呈现出明显的量-效与时-效关系.结论:三氧化二砷能抑制RAJI细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一.
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骨髓间充质干细胞体外分化过程中端粒酶活性表达及意义
目的:探讨体外诱导兔骨髓间充质干细胞分化为内皮细胞及其扩增过程中端粒酶活性的表达及其意义.方法:联合应用密度梯度离心和贴壁培养法分离骨髓间充质干细胞,继而诱导其向内皮细胞方向分化并传代培养.用TRAPezeELISA法和TRAP银染法分别检测骨髓间充质干细胞体外诱导分化前后端粒酶活性.结果:兔骨髓间充质干细胞体外培养时具有快速增殖能力,在特定环境中诱导分化细胞具有内皮细胞特征;增殖前的骨髓间充质干细胞端粒酶活性低水平表达,一旦经过诱导分化其端粒酶活性表达上调,在5代内其端粒酶活性不因细胞传代而下降或消失.结论:骨髓间充质干细胞在体外有限扩增和诱导分化时保持端粒酶活性,维持组织干细胞特性,为内皮祖细胞的临床研究奠定理论基础.
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含何首乌血清对人胚肺二倍体成纤维细胞端粒酶活性的影响
目的 观察含何首乌血清对人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS)超氧化物歧化酶(SOD)活性、c-myc mRNA表达及端粒活性的影响.方法 采用含何首乌血清对2BS细胞株进行处理,用黄嘌呤氧化酶法检测SOD活性,RT-PCR检测c-myc mRNA表达,TRAP-ELISA检测端粒酶活性.结果 与正常对照组相比,用药组2BS细胞SOD活性明显增加(P＜0.05),c-myc mRNA表达无变化,端粒酶活性显著增加(P均＜0.05).结论 含何首鸟血清对2BS细胞具有抗衰老作用,其机理可能与促进自由基的清除和激活端粒酶活性有关.
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端粒、端粒酶的研究及其在喉癌中的应用
端粒酶作为广谱的肿瘤特异性标记物用于肿瘤的诊断,以及其抑制剂用于肿瘤的治疗已成为近年来肿瘤分子生物学领域中热门的研究课题之一.笔者就端粒、端粒酶的研究及在喉癌中的应用作一综述.
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人类端粒酶逆转录酶mRNA选择性剪接的研究进展
端粒酶的激活是细胞永生化和恶性转化的关键事件之一,而端粒酶的激活需要端粒酶逆转录酶(hTERT)的表达.hTERT基因转录后的选择性剪接是调节端粒酶活性的重要机制之一.转变hTERT mRNA的剪接模式为肿瘤治疗提供了一个新的方案.
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端粒酶活性与宫颈癌关系研究
端粒酶活性与人类肿瘤相关,近年来端粒酶与宫颈癌之间关系及致瘤机制和基因治疗进展的研究成为热点.该文从端粒和端粒酶活性、端粒酶活性和宫颈癌、端粒酶相关成分在宫颈癌中的研究、宫颈癌端粒酶和肿瘤基因表达及基因疗法的研究几个方面,对近年来端粒酶在宫颈癌组织方面的研究及相关基因疗法的研究作一综述.
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促甲基化反应的研究进展
近年来,表遗传学异军突起,已成为许多学科的研究前沿.DNA甲基化是目前肿瘤研究的一大热点.促甲基化即人为地促使DNA发生重新甲基化反应,从而控制某些基因的表达与失表达.该文仅就目前已知的促甲基化的研究进展作一综述.
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端粒酶hTERT基因转录调节的研究进展
端粒酶是维持端粒长度的一种逆转录酶,对细胞增殖和癌变起重要作用.端粒的磨耗限制大多数体细胞的复制,肿瘤细胞主要通过转录上调端粒酶限制成分--催化亚基端粒酶逆转录酶(hTERT)维持端粒长度.进一步认识端粒酶hTERT基因表达的调节机制,对肿瘤的诊断、防治有着重要意义.现就近几年来E-box结合蛋白、核激素、肿瘤相关病毒蛋白和RNAi抑制hTERT mRNA表达及其他因素调节端粒酶hTERT基因表达作一综述.
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端粒酶相关的抗肿瘤疗法
端粒、端粒酶与肿瘤发生的关系是近年来肿瘤研究领域的热点之一.端粒酶在85%以上的恶性肿瘤组织中阳性表达,在癌旁正常组织或良性肿瘤中仅为4.2%,而在正常体细胞则一般为阴性.因此,有两种端粒酶相关的方式治疗端粒酶阳性的肿瘤细胞,一种是直接抑制端粒酶活性,另一种是靶向端粒酶表达的肿瘤细胞.把端粒酶作为肿瘤治疗的靶点为恶性肿瘤的早期诊断、预后估计及基因治疗开辟了一条新的途径.
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端粒结构及其相关蛋白对端粒长度调控的研究进展
哺乳类动物染色体末端由一段特殊的TTAGGG重复序列及其相关蛋白组成,并形成T环和D环结构,称作端粒.端粒3′伸出端由于富含碱基G,可形成稳定的G-四联体结构.端粒自身的这些结构及其相关蛋白TRF1、TRF2、TIN2、端锚聚合酶等对端粒长度起着重要的调控作用.
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应用RNA干扰抑制端粒酶逆转录酶表达诱导HepG2细胞凋亡
人端粒酶由RNA亚单位(hTR)和蛋白组分构成.蛋白组分包括端粒酶逆转录酶催化亚基(hTERT)和端粒酶相关蛋白1(hTEP1).hTERT表达与端粒酶活性密切相关,是细胞永生化过程中端粒酶活化的限速步骤[1].抑制hTERT的表达可快速诱导细胞凋亡,其机制不是通过端粒缩短所致[2].表明hTERT除了其蛋白催化活性外,尚可与其他分子相互作用诱导细胞凋亡.研究表明采用针对hTERT的反义核酸抑制hTERT的表达可通过活化Caspase诱导细胞凋亡[3].现采用特异性RNA干扰技术抑制hTERT的表达,观察细胞凋亡的产生并检测线粒体凋亡通路中与凋亡相关的蛋白的表达.
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人端粒酶逆转录酶干扰对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导肝癌细胞凋亡的影响
目的研究人端粒酶逆转录酶(hTERT)干扰对肝癌HepG2、SMMC-7221细胞生物学形为的影响和对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)诱导凋亡的影响.方法将HepG2细胞和SMMC-7721细胞分为转染组(转染重组质粒真核表达载体)、对照组(转染空载体质粒)和未转染组.采用聚合酶链反应方法检测hTERT干扰序列,逆转录聚合酶链反应方法检测hTERT表达,HE染色、生长曲线和流式细胞术方法分别检测细胞形态、增殖情况和细胞周期,β-半乳糖苷酶染色方法检测细胞状态,Annexin V/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡.结果转染组细胞内均存在hTERT干扰序列,HepG2和SMMC-7221细胞hTERT干扰率分别为100%和43.3%;与未转染组细胞相比,转染细胞核质比明显缩小,增殖率下降差异有统计学意义(P＜0.05),老化细胞和G2-M期细胞明显增加(P＜0.05).细胞老化率分别由未转染组的0增加到转染组的20.4%,由3.6%增加到10.0%;G2-M期分别由未转染组的7.1%、6.9%增加到转染组的10.6%、7.9%.hTERT干扰显著增加肝癌细胞凋亡和TRAIL诱导凋亡敏感性(P＜0.05).两株肝癌细胞凋亡率分别由未转染组的3.5%、4.8%增至转染组的5.2%、7.9%; 100ng/ml TRAIL作用24 h后两株肝癌细胞凋亡率分别由未转染组的5.3%、13.9%增加到转染组的10.4%、77.2%,而对照组细胞各指标均无显著变化.结论hTERT干扰明显影响肝癌细胞的生物学行为,显著增加细胞凋亡和TRAIL诱导凋亡的敏感性.
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荧光原位杂交技术检测人类宫颈端粒酶RNA组分基因的表达及其临床意义
目的 探讨荧光原位杂交(FISH)技术检测人类宫颈端粒酶RNA组分(hTERC)基因在不同程度宫颈病变中的表达及其临床意义.方法 收集133例妇科疾病患者的宫颈脱落细胞及组织,以及20位健康体检妇女的正常宫颈脱落细胞,应用FISH技术检测宫颈脱落细胞以及病变组织中的hTERC基因扩增情况.结果 单纯炎症病变、未明确诊断的不典型鳞状细胞(ASCUS)、低度鳞状上皮内病变(LSIL)、高度鳞状上皮内病变(HSIL)及鳞状细胞癌患者宫颈脱落细胞hTERC基因扩增的阳性率分别为0.00%、15.79%、81.82%、95.45%及100.00%;单纯炎症或宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ级、CINⅡ级、CINⅢ级及宫颈浸润癌患者病变组织hTERC基因扩增的阳性率分别为3.45%、52.38%、71.43%及100.00%.宫颈癌患者宫颈脱落细胞及病变组织hTERC基因的表达与CIN的差异有统计学意义(P＜0.05).结论 hTERC基因扩增可预测宫颈病变的发展趋势.
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hTERT启动子调控的PUMA腺病毒转染卵巢癌COC1细胞的研究
目的：探讨卵巢癌COC1细胞中大量表达p53正向凋亡调控因子（PUMA）在抑制COC1细胞中的作用。方法采用人端粒酶逆转录酶（hTERT）启动子调控的PUMA基因腺病毒载体（Ad-hTERT-PUMA）转染卵巢癌COC1细胞，通过细胞活性检测试剂盒和凋亡试剂盒研究COC1细胞的生长情况，同时分析表达PUMA的水平。结果转染Ad-hTERT-PUMA后，PU-MA大量表达，抑制COC1细胞生长，促进细胞凋亡。结论Ad-hTERT-PUMA成功转染卵巢癌COC1细胞并大量表达，起到了抑制卵巢癌细胞增长的作用。
关键词： 端粒 末端转移酶 p53正向凋亡调控因子 卵巢肿瘤 腺病毒科 -
hTERT启动子调控的PUMA重组腺病毒的构建与鉴定
目的：构建人端粒酶逆转录酶（hTERT）启动子调控的PUMA基因腺病毒载体（Ad-hTERT-PUMA）及带有增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因的腺病毒载体（Ad-hTERT-PUMA-EGFP）。方法采用一系列的分子生物学技术将 p53正向凋亡调控因子PUMA基因插入hTERT的启动子下游，再将EGFP为分子标记插入到PUMA基因下游，终将构建好的载体装入腺病毒。双酶切实验证明重组腺病毒载体 Ad-hTERT-PUMA和Ad-hTERT-PUMA-EGFP构建是否成功。结果载体均成功转配腺病毒。转染12 h后，部分HEK293细胞出现了绿色荧光，可维持到72 h。结论成功构建重组腺病毒载体Ad-hTERT-PUMA和Ad-hTERT-PUMA-EGFP。
关键词： 端粒 末端转移酶 p53正向凋亡调控因子 遗传学 腺病科 -
TCT HPV 及hTERC基因检测在宫颈癌筛查中的临床价值
目的：探讨液基薄层细胞学（TCT）、高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV ）及人类染色体端粒酶（hTERC）基因检测在宫颈癌筛查中的临床应用价值。方法选取2011年1月至2011年12月在该院接受宫颈癌筛查的妇女900例，分别进行 TCT 、HR-HPV 、hTERC 基因检测，阳性者均行阴道镜下多点活检，以病理诊断为金标准，分析结果。结果 TCT 诊断宫颈癌前病变及宫颈癌的灵敏度为80．00％，特异度为52．13％；HR-HPV 检测的灵敏度为73．33％，特异度为43．09％；hTERC 基因检测的灵敏度为76．67％，特异度为73．40％；TCT ＋ HPV 检测的灵敏度为90．00％，特异度为71．81％，TCT ＋ hTERC 基因检测的灵敏度为86．67％，特异度为80．85％；HPV ＋ hTERC 检测的灵敏度为83．33％，特异度为87．85％。结论联合筛查方案优于单一筛查方案；TCT ＋ HPV 检测是一种相对高效的宫颈癌联合筛查方案；HPV ＋ hTERC 基因检测联合筛查效果理想，为诊断宫颈癌的优筛查方案。
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幽门螺杆菌感染、端粒酶活性与胃癌、癌前病变关系的研究
目的 探讨幽门螺杆菌(Hp)、端粒酶在胃癌及癌前病变中的作用及相互关系.方法 应用Warthin-Starry银染法、免疫组织化学SP法及核酸原位杂交技术分别检测66例胃黏膜肠化生、36例异型增生、50例胃癌及10例正常胃黏膜Hp感染情况、hTERT蛋白及hTERT mRNA的表达情况.结果 胃黏膜肠化生、异型增生及胃癌中Hp感染率、hTERT蛋白及hTERT mRNA阳性表达率均显著高于正常胃黏膜.93例Hp感染阳性组hTERT蛋白表达阳性率为88.17%,59例Hp感染阴性组hTERT蛋白表达阳性率为47.46%,两组比较差异有统计学意义(P<0.01).hTERT蛋白表达阳性组hTERT mRNA表达阳性率显著高于hTERT蛋白表达阴性组(P<0.01).结论 Hp、hTERT蛋白及hTERT mRNA与癌前病变及胃癌发生有关,Hp感染可引起胃癌中hTERT蛋白表达水平的上升,从而激活端粒酶,这可能是Hp感染致胃癌的另一分子机制.
