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永生化猪肝细胞的建立及其鉴定
目的 建立永生化的猪肝细胞系,为生物人工肝、肝细胞移植、体外药物代谢模型提供合适的细胞源.方法 应用胶原酶等四步灌流法分离获得原代猪肝细胞,以SV40大T抗原(SV40LT)和含人端粒酶反转酶(hTERT)的重组反转录病毒感染,对其进行永生化;然后,对建立的猪肝细胞系进行生物学特性鉴定.结果 原代猪肝细胞经转染含人端粒酶反转录酶和SV40大T抗原的重组反转录病毒后4～6周获得三个肝细胞样细胞克隆,其中,一个猪肝细胞克隆(HepLP)传代60代以上;永生化猪肝细胞在相差显微镜、扫描电镜和透射电镜下具有典型的肝细胞的形态;Western印迹法检测该细胞系表达人端粒酶反转录酶和SV40大T抗原.RT-PCR检测到永生化猪肝细胞表达白蛋白mRNA、ELISA双抗体夹心法检测到永生化猪肝细胞培养上清液中白蛋白的分泌,以5.0×106细胞数接种裸鼠,观察6个月无肿瘤形成.结论 新建立的无致瘤性的永生化猪肝细胞系具有正常猪肝细胞的生物学基本功能.
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外周血和门静脉血人端粒酶反转录酶mRNA的定量检测与结直肠癌肝转移及预后的关系
目的 探讨结直肠癌患者外周血和门静脉血的人端粒酶反转录酶(hTERT) mRNA的表达与其肝转移及预后的关系.方法 纳入2009年1月至2011年4月确诊并行根治性手术治疗的原发性结直肠癌患者181例.应用荧光定量PCR法检测所有患者术前外周血和术中门静脉血的hTERT mRNA相对表达量.所有患者术后随访3年.分别比较同时性肝转移(18例)和无同时性肝转移(163例)患者,以及异时性肝转移(29例)和无异时性肝转移(152例)患者的术前外周血和术中门静脉血hTERT mRNA的相对表达量;分析术中门静脉血hTERT mRNA相对表达量与结直肠癌患者临床病理特征的关系;均采用t检验.对结直肠癌患者异时性肝转移风险进行单因素和多因素分析.采用Log-rank法比较术中门静脉血hTERT mRNA高表达组与低表达组的术后生存率.结果 同时性肝转移患者术前外周血和术中门静脉血hTERT mRNA的相对表达量分别为8.04±3.79和11.88±4.19,无同时性肝转移患者术前外周血和术中门静脉血hTERT mRNA的相对表达量分别为4.30±2.81和4.94±3.37,前者均高于后者(t=5.159,8.084;P均＜0.01);异时性肝转移患者术前外周血和术中门静脉血hTERT mRNA相对表达量分别为7.16±3.08和9.83±2.96,无异时性肝转移患者术前外周血和术中门静脉血hTERT mRNA相对表达量分别为4.11±2.58和4.56±3.09,前者均高于后者(t=5.648,8.467;P均＜0.01).结直肠癌患者术中门静脉血hTERT mRNA的表达在不同肿瘤分化程度、不同肿瘤大小、不同肿瘤浸润深度、有否淋巴结转移、有否术后复发、不同术后生存期患者中差异均有统计学意义(t=2.987,2.281,2.135,5.070,5.431,6.803;P均＜0.05).单因素分析显示,术前外周血和术中门静脉血hTERT mRNA表达均与异时性肝转移相关(x2=9.522,16.393;P均＜0.01);Cox多因素回归分析显示,以上两者均是其独立危险因素(相对危险度分别为4.286,9.783).术中门静脉血hTERT mRNA高表达组患者的术后2和3年的生存率分别为64.6％和52.3％,低表达组分别为91.4％和85.3％;两组术后2和3年的生存率分别比较,差异均有统计学意义(x2=5.313,P＜0.05;x2 =8.925,P＜0.01).结论 术中门静脉血hTERT mRNA的表达与结直肠癌患者的重要病理特征及其肝转移、预后密切相关,其对异时性肝转移的预测价值比外周血hTERT mRNA高.术中门静脉血hTERT mRNA可成为结直肠癌患者术后预后的评价指标.
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进展期胃癌胸苷酸合成酶和三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2的表达及意义
目的 检测胸苷酸合成酶(TS)和三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)在进展期胃癌中的表达,探讨其与临床病理特征的关系.方法 收集80例进展期胃癌患者的手术标本,采用免疫组织化学方法,在胃癌组织和相应癌旁正常组织中检测TS和ABCG2的表达,在胃癌组织中检测P-糖蛋白的表达.分析TS、ABCG2表达与临床病理特征、P-糖蛋白表达的相关性.两组间比较行x2检验,多组间比较行Kruskal-Wallis H检验.结果 胃癌组织中TS和ABCG2的总阳性率[85.0％(68/80)和90.0％ (72/80)]均高于癌旁正常组织[62.5％(50/80)和78.7％ (63/80)],差异均有统计学意义(x2=11.466和16.463,P=0.009和0.001).TS和ABCG2在胃癌组织中的表达水平均与肿瘤TNM分期、分化程度、浸润深度密切相关(TS的x2=30.686、49.823、40.545,ABCG2的x2=48.192、64.722、47.512;P均＜0.01),肿瘤分期越晚、分化程度越差、浸润越深,二者的表达水平越高.胃癌组织中TS和ABCG2的表达水平均与P-糖蛋白表达水平相关(x2=43.977和29.509,P均＜0.01).结论 TS和ABCG2有可能成为判断胃癌恶性程度、进展、耐药及预后的指标.
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黏蛋白4 mRNA与人端粒酶反转录酶mRNA联合转染树突状细胞诱导抗胰腺癌免疫反应的体外研究
目的 研究人胰腺癌黏蛋白4 mRNA与人端粒酶反转录酶(hTERT) mRNA联合转染树突状细胞(DC)诱导的抗肿瘤免疫反应,为构建负载多抗原表位DC疫苗治疗胰腺癌提供实验依据.方法 自6例HLA-A2+的胰腺癌患者外周血单个核细胞中分离、培养DC.体外转录和扩增黏蛋白4和hTERT mRNA,电穿孔法将两者分别及联合转染DC,培养48 h.采用实时定量PCR和Western印迹技术检测DC中黏蛋白4和hTERT的表达.用MTT法监测转染前后DC存活率；使用IFN-γ释放试验(ELISA法)检测黏蛋白4 mRNA和(或)hTERT mRNA转染后DC诱导的CTL的活化反应.采用51Cr标准细胞毒实验检测转染黏蛋白4 mRNA和(或)hTERT mRNA后DC诱导的CTL对体外胰腺癌细胞株MiaPaCa-2、Capan-2、AsPC-1和Panc-1细胞的杀伤作用.采用studentt检验进行统计学处理.结果 黏蛋白4 mRNA与hTERT mRNA联合转染后48 h DC中两者的相对表达量分别为30.09±5.24和12.87±3.36,低于其分别转染时的相对表达量(38.54土6.21和36.35+5.03,t=3.469、6.721,P均＜0.05).黏蛋白4 mRNA与hTERT mRNA联合转染后96h DC存活率降至52.17％,低于分别转染时DC的存活率(均为80％左右).黏蛋白4和hTERT mRNA联合转染DC诱导的特异性CTL 24 h IFN-γ释放量达(32.57±2.01) U/mL,高于分别转染时DC诱导的CTL IFN-γ释放水平[(23.06±4.74) U/mL和(16.82±3.67) U/mL,t=5.092和7.1 11,P均＜0.05].DC经黏蛋白4 mRNA与hTERT mRNA联合转染后,可有效诱导HLA-A2-黏蛋白4+/hTERT+特异性CTL免疫反应,而对HLA-A2-的胰腺癌细胞无显著杀伤作用.结论 黏蛋白4 mRNA与hTERT mRNA联合转染的DC较单胰腺癌抗原负载DC诱导出更加显著的CTL抗肿瘤免疫.
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人端粒酶逆转录酶基因转染人髓核细胞的安全性研究
目的 评价人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因转染对人椎间盘髓核细胞“安全性”的影响.方法 将构建好的重组腺相关病毒人端粒酶逆转录酶基因( recombinant adeno-associated virus vector-mediated hTERT gene,rAAV-hTERT)按感染复数(multiplicity of infection,MOI) 105 v.g每细胞转染体外培养二代髓核细胞.设立rAAV-hTERT转染组,AAV空病毒转染组及未转染组;利用RT-PCR及Western-blot检测转染后hTERT基因的表达;对体外培养120 d的细胞进行染色体核型分析;将3组细胞(100 μL,3×107/mL)分别注入裸鼠腋下检测其成瘤性,以人Hela细胞为阳性成瘤实验对照.结果 成功检测出rAAV-hTERT转染髓核细胞后hTERT基因的表达;G-带核型分析未见染色体结构异常克隆;3组细胞均未观察到裸鼠体内肿瘤形成.结论 rAAV-hTERT能成功转染人椎间盘髓核细胞并正确表达,rAAV-hTERT转染髓核细胞在有限的体外培养过程中是安全的,可为进一步的在体研究提供安全性证据.
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小RNA干扰对氟他胺耐受性前列腺癌细胞LNCaP端粒酶活性的影响机制研究
目的 探讨hTERT基因的两端各三个碱基硫代修饰反义寡核苷酸(AS PS-ODN)对氟他胺耐受性前列腺癌细胞LNCaP端粒酶活性的影响机制.方法 采用TRAP-PCR-ELISA法检测氟他胺耐受性前列腺癌细胞的端粒酶活性;采用RT-PCR方法检测hTERT基因mRNA的表达水平;以免疫组化通过流式细胞仪检测hTERT基因蛋白水平的变化.结果 hTERT基因的两端各三个碱基硫代修饰反义寡核苷酸(AS PS-ODN)作用于LNCaP细胞48h,其端粒酶活性下降,作用72h,其端粒酶活性受到抑制.结论 通过hTERT基因的两端各三个碱基硫代修饰反义寡核苷酸(AS PS-ODN)特异性抑制hTERT基因mRNA的表达降低氟他胺耐受性前列腺癌细胞LNCaP端粒酶活性,为氟他胺耐受性前列腺肿瘤的基因治疗提供新思路.
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人精浆中端粒酶活性测定及其临床意义
目的 观察精浆端粒酶活性(TA)在不同类型男性不育症患者中的变化,以及与精浆生殖激素浓度、精液中精子数量和质量之间的相互关系.方法 随机选取110例男性不育症患者与30例生育者,应用酶联免疫吸附(ELISA)方法,对其精浆TA进行检测;应用放射免疫分析(RIA)方法对其精浆T、FSH、LH浓度进行检测;按WHO规定的方法,定量分析精液中的精子密度、精子活率、(a+b)级精子活力百分率、精液中白细胞数量.结果 不育症组精浆TA和T浓度均明显低于生育组(P均<0.01);不育症组精浆FSH和LH浓度均明显高于生育组(P均<0.05).在不育症组中,随着精液中精子数量的递减,TA水平亦呈现明显的逐渐下降趋势;精浆中TA与T浓度之间存在明显的相关性(P<0.01),.与FSH和LH浓度之间无相关性(P>0.05);精子活力、活率正常组精浆TA均高于不良组(P<0.01);WBC精液组精浆TA高于非WBC精液组(P<0.05).结论 精浆TA水平与精子数量和质量存在一定的相关性,同时与精子发育密切相关的睾酮浓度有协同促进作用,端粒酶在人类生殖发育中发挥着重要作用.检测精浆TA水平对于进一步了解、预防和治疗某些病理状态下所致的生殖能力低下有重要意义.
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端粒酶hTERT基因反义核酸对前列腺癌细胞PC3端粒酶活性的抑制作用
目的 探讨hTERT基因的两端部分硫代修饰反义寡核苷酸(AS PS-ODN)对前列腺癌细胞PC3端粒酶活性的抑制作用.方法 采用端粒重复序列扩增法及TRAP-PCR-ELISA法检测前列腺癌细胞的端粒酶活性;采用RT-PCR方法检测hTERT基因mRNA的表达水平;以免疫组化通过流式细胞仪检测hTERT基因蛋白水平的变化.结果 hTERT基因的两端部分硫代修饰AS PS.ODN作用于PC3细胞48h,其端粒酶活性下降,作用72h,其端粒酶活性受到抑制.结论 通过hTERT基因的两端部分硫代修饰AS PS-ODN特异性抑制hTERT基因mRNA的表达,可降低前列腺癌细胞PC3端粒酶活性.
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端粒酶-雄激素非依赖性前列腺癌治疗的新靶点
前列腺癌是男性癌症死亡的主要原因之一.雄激素阻断疗法是治疗晚期前列腺癌的主要方法.这种方法在治疗雄激素依赖性前列腺癌非常有效.然而,这种恶性肿瘤终会成为雄激素非依赖性,抗雄激素药物逐渐失去作用,对于雄激素非依赖性前列腺癌的治疗,目前没有一个行之有效的方法,是临床上棘手的问题之一.如何有效治疗雄激素非依赖性前列腺癌成为目前医学研究的重点之一.
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端粒酶基因hTRT在胃癌中的表达及其临床意义
目的探讨胃癌中端粒酶基因hTRT mRNA表达与临床参数的关系,评价hTRT表达检测在胃癌诊断中的价值.方法用原位杂交的方法检测端粒酶基因hTRT mRNA在胃癌、癌旁组织和胃良性病变中的表达和分布情况.结果57例胃癌中hTRT基因表达阳性率为94.7%(54/57);57例癌旁组织中hTRT基因表达阳性率为0%(0/57);69例胃良性病变中hTRT基因表达阳性率为2.9%(2/69).胃癌组织中hTRT基因的表达与癌旁组织、胃良性病变比较差异有显著性(P均＜0.001).胃癌组织中hTRT的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移相关(P均＜0.05),但与肿瘤分期无相关性(P＞0.05).hTRT表达的阳性分级与淋巴结转移相关(P＜0.01).但与胃癌分化程度和分期无相关性(P均＞0.05).结论端粒酶基因hTRT表达检测在胃癌诊断中可能有一定的价值.
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人成釉细胞瘤中端粒酶与抑癌基因p53的表达
目的探讨端粒酶hTR、hTERT基因在人成釉细胞瘤(Ameloblastoma,AB)中的表达,并与p53蛋白相比较,探讨其临床生物学意义.方法用原位杂交及免疫组化技术,检测54例AB的hTR和hTERT的表达及49例AB的p53蛋白,将二者进行分析,同时以7例口腔黏膜为对照.结果 94.4%(51/54)的AB有hTR、hTERTmRNA的表达,81.2%(13/16)和87.5%(14/16)的牙源性角化囊肿(0dontogenic keratocyst,0KC)及2/7和1/7例的正常口腔黏膜分别有hTR和hTERT mRNA表达,3组相比差异有显著性(P＜0.001).hTR与hTERT在AB中表达具有相关性(rs=1.000,P＜0.001).p53蛋白在85.7%(42/49)AB、44%(11/25)OKC、33.3%(1/3)正常口腔黏膜上皮的细胞核为阳性.hTERT与p53蛋白的rs=0.754,P＜0.001,hTR与p53蛋白的rs=0.536,呈正相关,P＜0.001.结论 hTR和hTERT在AB中的检出率高于p53蛋白,其间具有一定相关性(P＜0.001),并与AB的生物学行为有关.
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姜黄素对NB4细胞的增殖抑制作用及其作用机制
目的:探讨姜黄素对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞的增殖抑制作用及其作用机制.方法:以0,5,10,20,30 μmol·L-1浓度的姜黄素作用于体外培养的NB4细胞,分别于培养后12,24,36,48,72,72 h用四氮唑蓝比色法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪及Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡,采用聚合酶链反应-酶标记免疫吸附法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性.结果:10～30 mol·L-1浓度的姜黄素作用24～72 h可显著降低NB4细胞端粒酶活性,抑制细胞的生长,诱导细胞发生凋亡.姜黄素对细胞的增殖抑制作用呈现出一定的剂量-效应与时间-效应关系,细胞凋亡率在药物作用60h左右达高峰.结论:姜黄素具有显著的体外抗白血病作用,降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一.
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黄精多糖对App转基因小鼠大脑及性腺组织端粒酶活性的影响
目的 探讨黄精多糖对实验性阿尔采末病小鼠脑组织端粒酶活性的影响.方法 24只App转基因小鼠随机分为对照组、黄精多糖治疗组和维生素E治疗组.各组分别予以注射用水、黄精多糖溶液和维生素E溶液1 mL灌胃,连续6 wk.采用端粒重复扩增一微孔板杂交法检测App转基因小鼠大脑组织端粒酶活性.结果 经黄精多糖治疗后,App转基因小鼠大脑组织端粒酶活性显著升高.结论 黄精多糖可升高App转基因小鼠大脑组织端粒酶活性,可能具有延缓神经细胞衰老的作用.
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人端粒酶逆转录酶在喉鳞状细胞癌中表达与c-myc的相关性
目的研究人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA在喉鳞状细胞癌中和病理分级、临床参数的关系以及和c-myc的相关性.方法用原位杂交法检测40例喉鳞状细胞癌中hTERT mRNA的表达,用免疫组织化学法检测c-myc蛋白.结果喉正常组织、不典型增生、鳞癌组织中hTERT mRNA的阳性率分别为0%(0/10)、10%(1/10)、80%(32/40),喉鳞癌中hTERT mRNA的阳性率明显高于正常组织(P＜0.05)和不典型增生(P＜0.05),hTERT mRNA水平与c-myc的表达呈显著相关(r=0.5422,P＜0.01).喉鳞癌中hTERT mRNA表达水平与病理分级不相关(P＞0.05),与年龄、性别、TNM分期和淋巴结转移情况不相关(P＞0.05).结论喉鳞癌中hTERT mRNA的阳性率明显高于正常组织和不典型增生,有助于喉部良恶性病变的鉴别,c-myc的过度表达可能是喉鳞癌端粒酶活性升高的一个重要机制.
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hTERT和β-catenin在胆囊癌中的表达及其临床意义
目的检测hTERT和β-catenin在胆囊癌中的表达情况,分析其与临床病理特征及病人生存期之间的关系.方法收集正常及炎性胆囊、胆囊癌非相关息肉、胆囊癌相关息肉和胆囊癌各20、19、16、82例.用免疫组化方法分别检测hTERT、β-catenin蛋白表达.结果①hTERT在正常及炎性胆囊、胆囊癌非相关息肉、胆囊癌相关息肉和胆囊癌中阳性率分别为0、5.3%、37.5%、84.1%,后两组hTERT表达率显著高于前两组(P＜0.05),胆囊癌组hTERT表达率亦显著高于第3组(P＜0.001).β-catenin在正常及炎性胆囊、胆囊癌非相关息肉、胆囊癌相关息肉和胆囊癌中异位表达率分别为5.0%、10.5%、50.0%、51.2%.后两组β-catenin表达率显著高于前两组(P＜0.05).②hTERT在T1+T2、T3+T4和淋巴结阳性、阴性组中的表达率分别为72.7%、92.8%(P＜0.05)和93.6%、71.4%(P＜0.05),差异有显著性.hTERT表达水平与胆囊癌分化程度、浸润深度、淋巴结有无转移的相关系数分别为0.5、0.4、-0.5(P＜0.01).β-catenin在T1+T2、T3+T4和淋巴结阳性、阴性组中异位表达率分别为33.3%、63.3%(P＜0.01)和57.4%、42.9%(P＜0.05),差异有显著性.③胆囊癌hTERT阴性、阳性表达累积生存率分别为22.8%、5.9%(P＜0.05).胆囊癌异位β-catenin阴性、阳性表达累积生存率分别为17.1%、5.7%(P＜0.05).④胆囊癌hTERT蛋白与β-catenin异位蛋白表达呈正相关(r=0.311,P＜0.05).结论hTERT和β-catenin蛋白异位表达与胆囊的恶性病变密切相关.hTERT表达与胆囊癌相关息肉及其恶性转化有关.hTERT和β-catenin蛋白与肿瘤不良预后有关.β-catenin异位表达增加与胆囊癌hTERT表达增强相关联.
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介入化疗前后宫颈癌组织端粒酶活性的检测
近年来,术前介入化疗在宫颈癌治疗中的应用越来越受到重视,但目前仍无一个公认的疗效监测和评价标准.本实验旨在研究介入化疗前后宫颈癌组织端粒酶活性的变化,探讨其在临床治疗中的意义.
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咪喹莫特对人皮肤鳞状细胞癌SCL-1细胞增殖和端粒酶活性的影响
目的 探讨咪喹莫特对人皮肤鳞状细胞癌SCL-1细胞增殖及端粒酶活性的影响.方法 使用噻唑蓝(MTT)法检测药物处理后细胞生长抑制情况,细胞克隆形成试验检测药物处理后细胞增殖能力变化,倒置显微镜观察药物作用前后细胞形态改变;端粒酶重复序列扩增-酶联免疫吸附法(TRAP-ELISA)检测细胞端粒酶活性变化;细胞免疫组化和实时定量RT-PCR技术检测端粒酶活性相关c-Myc基因表达情况.结果 咪喹莫特能明显抑制SCL-1细胞增殖,并存在浓度依赖性.培养48 h时,0,0.05,0.10,0.15和0.20 g/L咪喹莫特组细胞增殖抑制率分别为0,31.3%±3.19%,44.7%±4.21%,49.2%4±3.71%和71.6%±3.24%.咪喹莫特作用SCL-1细胞48 h,端粒酶活性随药物浓度增高呈显著的递减关系.48 h时,0.05和0.15 g/L咪喹莫特组c-Myc mRNA和蛋白表达均低于空白对照组(P＜0.05).结论 咪喹莫特可明显抑制SCL-1细胞的增殖,降低c-Myc基因表达,下调SCL-1肿瘤细胞端粒酶活性,可能是其抗癌作用的机制之一.
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端粒酶小干扰RNA技术体外抑制Hut78细胞生长及诱导凋亡的研究
目的 探讨针对端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的小干扰RNA(siRNA)技术对皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)细胞株Hut78端粒酶活性和细胞生长的影响.方法 用T7 RNA聚合酶介导的体外转录法合成两对hTERT-siRNA,将合成的siRNA转入Hut78细胞中,用端粒酶重复序列扩增及酶联免疫吸附方法(TRAP-PCR-ELISA)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测Hut78细胞端粒酶活性及hTERTmRNA的表达.用MTF法和流式细胞仪分析细胞增殖及凋亡的变化.结果 将合成的siRNA(250 ng)转染入Hut78细胞48 h后,端粒酶活性被明显抑制,抑制率分别为68%和64%;hTERT mRNA的表达下降.细胞生长抑制作用有明显的剂量依赖性,以1000 ng剂量抑制效果明显.同时观察到细胞凋亡,凋亡率分别为15.86%和11.10%(P＞0.05).结论 体外转录法合成的hTERT-siRNA能明显抑制Hut78细胞端粒酶的活性,降低hTERT基因表达,抑制细胞生长增殖及诱导细胞凋亡.
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尖锐湿疣、鲍恩样丘疹病、Bowen病及外阴鳞状细胞癌皮损中端粒酶的表达
目的探讨端粒酶在正常组织、良性增殖性疾病及恶性肿瘤中的表达情况及其临床意义.方法采用免疫组化方法检测皮损中端粒酶逆转录酶(hTERT)蛋白的表达情况,并对所有鲍恩样丘疹病和Bowen病病例进行组织病理分析.结果正常人对照组、尖锐湿疣组及外阴鳞状细胞癌组中任两组间hTERT表达强度差异均有统计学意义,其阳性率依次增高.鲍恩样丘疹病组较尖锐湿疣组hTERT表达强度高,两组差异有统计学意义;虽与Bowen病组比较差异无统计学意义,但较外阴鳞状细胞癌组表达强度低,差异有统计学意义.组织病理上,Bowen病比鲍恩样丘疹病细胞异形性更明显.结论端粒酶在正常组织、良性增殖性疾病及恶性肿瘤中的表达强度呈梯度升高,提示端粒酶激活在细胞增生及永生化中均发挥重要作用.
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hTERT反义寡核苷酸抑制Hut78细胞端粒酶活性及诱导细胞凋亡的研究
目的探讨人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因反义寡核苷酸对皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)细胞株端粒酶活性及细胞生长的影响,为CTCL基因治疗提供新的基因靶点.方法采用脂质体介导的基因转染方法,将不同浓度(10μmol/L、20 μmol/L、30 μmol/L)的寡核苷酸分别导入CTCL细胞株Hut78中;分别于不同的时间,应用端粒酶重复序列扩增及酶联免疫吸附方法(PCR-ELISA)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、流式细胞仪技术等动态观察转染细胞中端粒酶活性、hTERT mRNA表达以及细胞凋亡的变化.结果经hTERT反义寡核苷酸(AODN)作用72 h后,细胞端粒酶的活性明显下降,hTERT mRNA的表达减弱,并可观察到细胞凋亡,凋亡细胞发生率为13.05%.细胞生长抑制作用有明显的时效性,以30μmol/L、72 h时下降明显.而有义寡核苷酸(SODN)组和对照组以上指标均无明显变化(P＞0.05).结论hTERT反义寡核苷酸可显著抑制CTCL细胞的端粒酶活性,抑制细胞生长增殖,诱导细胞凋亡.
