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云南汉族系统性红斑狼疮患者外周血C3mRNA的表达
目的 通过研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血C3基因中是否存在外显子39(ex39)发生点突变,探讨SLE的发病机制是否与C3基因突变相关.方法 应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测了92例SLE患者和45名正常人外周血中补体C3mRNA序列,并进行DNA测序.结果 SLE皮损组与非皮损组、肾损组与非肾损组C3阳性表达率相比无统计学差异;但SLE患者中有血液损害组C3阳性率明显低于无血液损害组,有神经系统损伤组C3阳性率也明显低于无神经系统损伤组,两者均有统计学差异.65名SLE患者和45名正常对照未发现补体C3exon39点突变.结论 SLE患者在血液系统和神经系统损伤时C3mRNA的表达减少;大部份SLE患者补体C3不存在ex39的点突变.不能证实补体C3ex39的点突变为SLE患者的易感基因;本研究资料中未明确发现云南汉族SLE患者携带遗传性C3缺乏.
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实时荧光定量RT-PCR法检测TNF-αmRNA基因表达
目的 建立实时荧光定量反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测TNF-α基因mRNA表达.方法 用T-A克隆技术构建含TNF基因的载体作为标准模板,采用荧光Taqman方法及探针标记技术,建立实时荧光定量RT-PCR方法,制备标准曲线,检测肿瘤患者与正常人外周血单个核细胞的TNF-α mRNA表达水平变化,并与半定量RT-PCR检测结果进行比较.结果 实时荧光定量RT-PCR检测肿瘤患者外周血单个核细胞TNF-αmRNA表达明显高于正常人,且半定量RT-PCR结果显示TNF-α出现类似的变化趋势.结论 所建立的实时荧光定量RT-PCR用于检测TNF-α mRNA表达,结果用拷贝数表示,比半定量RT-PCR更灵敏、准确.
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RT-PCR法测定牵拉性撕脱伤血管上E-选择素量的变化
目的:探讨牵拉性撕脱伤血管上的E-选择素的变化.方法:分级的牵拉力造成不同的血管损伤,用RT-PCR法测定损伤血管上E-选择素的量.结果:撕脱伤血管上E-选择素mRNA表达随牵拉力增加而升高.结论:内皮细胞损伤越重E-选择素的表达越明显,提示E-选择素可能与血栓形成有关.
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白癜风皮损VDR表达水平的研究
目的检测维生素D受体(VDR)在白癜风皮损中的表达.方法利用RT-PCR方法首次检测了14例寻常型进展期白癜风患者皮损VDRmRNA表达水平,并与正常人皮肤做对照.结果与正常人皮肤VDRmRNA水平相比较,进展期白癜风患者皮损VDR mRNA水平明显降低(P＜0.05).结论进展期白癜风皮损VDR mRNA水平下降,可能对白癜风的发病起一定的作用.
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机械力作用下人牙周膜细胞ODF及OCIF的表达及意义
目的:观察周期性机械牵张力对人牙周膜细胞破骨细胞分化因子(ODF)及破骨细胞生成抑制因子(OCIF) mRNA表达的影响,探讨正畸牙周组织改建的分子机制.方法:通过体外细胞培养加载系统施于人牙周膜细胞周期性牵张力,利用RT-PCR检测技术,观察人牙周膜细胞 ODF及OCIF mRNA表达的相对强度.结果:体外培养的人牙周膜细胞在正常情况下表达ODF及OCIF,当间歇性牵张力作用6、12、24 h后,随着作用时间的延长,人牙周膜成纤维细胞ODF mRNA的表达有减弱趋势;而OCIF mRNA的表达有增强趋势.结论:机械牵张力可以调节人牙周膜细胞ODF、OCIF的表达,从而可以调节骨吸收作用.
关键词： 牙周膜细胞 机械张力 反转录聚合酶链反应 破骨细胞分化因子 破骨细胞生成抑制因子 -
人牙囊细胞的分离培养和生物学特性
目的:应用酶消化法体外培养人牙囊细胞并研究其生物学特性.方法:分离合法引产人胚胎乳牙胚的牙囊组织,消化法获得人牙囊细胞,HE染色观察细胞形态、免疫组织化学染色技术检测波形丝蛋白、Ⅰ型胶原表达,RT-PCR检测细胞的骨钙素、骨涎蛋白、碱性磷酸酶的表达.结果:原代培养的人牙囊细胞呈成纤维细胞形态,有部分上皮成分混杂,经纯化后可排除;在牙囊细胞中Ⅰ型胶原和波形丝蛋白的表达呈阳性,定位于细胞的胞质中;RT-PCR结果显示骨涎蛋白、骨钙素、碱性磷酸酶表达.结论:体外培养的人牙囊细胞具有成纤维细胞的特性,具有合成Ⅰ型胶原的能力;不同程度表达Ⅰ型胶原、骨钙素、骨涎蛋白、碱性磷酸酶等矿化相关蛋白.
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人内皮抑素基因的克隆与测序
目的获得人内皮抑素(endostatin)功能区段基因片段.方法从人肝组织提取mRNA, 用反转录聚合酶链反应技术克隆endostatin基因,20 g.L-1脂糖凝胶电泳后将其重组入pUC19载体,双脱氧末端终止法测定其核苷酸序列.结果经Genbank分析证实,所获得的552 bp基因片段属于endostatin功能区段基因,序列正确.结论本研究为应用endostatin基因进行实体瘤抗血管生成治疗奠定了基础.
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Survivin在2株人脑胶质瘤细胞系中的表达
目的:探讨凋亡蛋白抑制因子(IAP)Survivin mRNA及蛋白在人脑胶质瘤细胞系BT325和SHG-44中的表达水平及意义. 方法:采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化方法分别检测Survivin mRNA及蛋白在BT325和SHG-44细胞系中的表达水平. 结果:BT325细胞高表达Survivin mRNA及蛋白,并表达少量的Survivin剪接变异体Survivin-2B,Survivin蛋白定位于瘤细胞的胞质. Survivin mRNA及蛋白在SHG-44细胞中均无表达. 结论:Survivin对于维持BT325细胞株的生物学特性具有重要作用;BT325和SHG-44细胞株可分别作为Survivin基因抑制和基因转移研究的良好细胞模型.
关键词： Survivin蛋白 凋亡蛋白抑制因子 胶质瘤 反转录聚合酶链反应 免疫组化 -
胃癌细胞株SGC-7901及MGC-803中SURVIVIN基因转录与表达的鉴定
目的探讨胃腺癌细胞株SGC-7901及MGC-803中survivin基因转录与表达情况,为胃癌与survivin基因的相关研究提供帮助.方法①利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及DNA序列测定技术检测两种细胞株中survivin基因mRNA转录情况.②采用免疫组织化学染色鉴定两种细胞株survivin基因有无蛋白表达及其表达程度.结果从提取的胃癌细胞总RNA中扩增出612bp的DNA片段,与预期的扩增片段大小相符;序列测定显示两细胞株的DNA扩增片段序列与基因库survivin基因mRNA序列完全一致;免疫组织化学染色显示两细胞株中均有survivin蛋白表达产物.结论中国人胃腺癌细胞株SGC-7901及MGC-803中均存在survivin基因的mRNA转录及蛋白的高表达.
关键词： 胃癌 Survivin基因 反转录聚合酶链反应 序列测定 细胞株 -
淮南市2009年甲型H1N1流行性感冒病毒检测分析
淮南市疾病预防控制中心2009年6月18日发现安徽省首例输入性甲型H1N1病例,自8月26日开始对流感样病例进行甲型H1N1流感病毒核酸检测和季节性流感病毒核酸检测.现将本实验室检测结果分析如下.
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急性白血病患者骨髓间隙连接蛋白43的表达及其与耐药的相关性研究
[目的] 探讨急性白血病(AL)患者骨髓细胞中间隙连接蛋白43( Cx43)、P-糖蛋白(P-gp)及环氧合酶2(COX-2)基因表达水平及其与AL病程、预后和耐药的关系.[方法] 77例不同病期AL患者,其中初治36例,完全缓解20例,复发20例,同时以20例异体造血干细胞移植供体及非血液系统恶性病患者为对照.采用SYBR Green实时定量反转录聚合酶链反应(SYBR-RT-PCR)技术,检测骨髓单个核细胞中Cx43、P-gp、COX-2mRNA的表达,并对37例初治患者进行动态随访.[结果] AL初治组Cx43、P-gp、COX-2mRNA的表达分别为0.52±0.57、1.42±1.06、1.14±0.95,复发组分别为0.20±0.40、2.29±1.11、1.69±0.81,完全缓解组分别为0.95±0.37、0.93±0.73、0.79±0.58,对照组分别为1.16±0.67、0.86±0.63、0.61 +0.57.初治、复发AL患者Cx43 mRNA表达水平较对照组及完全缓解组低,差异均有统计学意义(初治组分别P=0.001、0.005；复发组均P＜0.001)；完全缓解组Cx43 mRNA表水平与对照组相比,差异无统计学意义( P=0.185).AL患者骨髓细胞液中Cx43 mRNA与P-gp和COX-2mRNA表达呈负相关,且初治组、完全缓解组及复发组表达均呈负相关(与P-gpr值分别为-0.471、-0.362、-0.526;与COX-2 r值分别为-0.479、-0.344、-0.471).36例AL初治患者随访4个月,死亡8例,生存28例,死亡患者Cx43 mRNA表达低于生存患者,差异有统计学意义(t=2.16,P=0.042).[结论] 初治、复发难治AL患者骨髓中Cx43mRNA的表达下调,同时多药耐药基因P-gp、COX-2 mRNA的表达上调；Cx43过度表达是预后良好因素,Cx43与AL的疗效、预后及化疗耐药密切相关.
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MTAP、CDKN2A和CDKN2B在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及其临床意义
目的 研究弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)MTAP、CDKN2A和CDKN2B基因的表达及其临床意义.方法 以实时定量聚合酶链反应(PCR)方法检测40例DLBCL及19例淋巴结反应性增生组织中MTAP、CDKN2A和CDKN2B基因的表达情况,结合临床特征进行分析,并进行随访.结果 DLBCL组MTAP、CDKN2A和CDKN2B基因表达水平较淋巴结反应性增生组降低,差异有统计学意义(P值分别为0.024、0.044和0.047);三者表达均与Ann Arbor临床分期相关(P值分别为0.004、0.001和0.027);与患者的性别、年龄、淋巴结外病变累及、ECOG体力评分、骨髓累及、血清乳酸脱氢酶水平均无明显相关(均P＞0.05).其中MTAP与CDKN2A基因表达情况还与B症状(P值分别为0.003和0.028)和国际预后指数(IPI)相关(P值分别为0.001和0.011).此外,生存分析结果显示,MTAP、CDKN2A和CDKN2B基因表达水平与患者总生存期相关(P值分别为0.022、0.019和0.042).结论 MTAP、CDKN2A和CDKN2B基因在DLBCL中呈低水平表达,与疾病进展和患者预后有关,可作为反映其生物学行为和评估患者临床疗效的分子标志物.
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抗凋亡基因Aven在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达及其临床意义
目的 探讨抗凋亡基因Aven在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达及其与临床分型的关系.方法 应用RT-PCR检测55例儿童ALL患者Aven基因mRNA的表达水平,11例非恶性血液病患儿为对照组.结果 年龄≥10岁的ALL患者,Aven的表达明显高于年龄＜10岁者,复发患者Aven的表达亦明显高于未复发者.单变量和多变量分析结果均显示Aven的高表达为儿童ALL不利的预后因素.结论 Aven在儿童ALL中异常表达,且为不良的独立预后因素.
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急性白血病患者黑色素瘤特异性抗原基因的表达及其与FLT3基因比较的临床意义
目的 探讨黑色素瘤优先表达抗原(PRAME)基因在急性白血病(AL)患者中的表达及其临床意义.方法 应用基于TaqMan探针的RT-PCR技术榆测119例AL患者骨髓中PRAME mRNA的表达,包括急性髓细胞性白血病(AML)97例,急性淋巴细胞性白血病(ALL)22例,并与FLT3 mRNA的表达相比较.结果 AML患者PRAME阳性表达为50例(51.5%),ALL患者PRAME阳性表达为8例(36.4%).11例健康对照及17例非血液病患者骨髓细胞中有5例PRAME mRNA呈微量表达.AL患者中AML 33例和ALL 5例患者PRAME和FLT3均阳性,AML 17例和ALL 3例患者PRAME阳性而FLT3阴性.短期观察,9例PRAME、FLT3均阳性的患者经化疗达完全缓解后,PRAME表达均有不同程度地下降.结论 PRAME基因在AL中阳性表达,其有望成为AL微小残留监测的标志性基因.
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慢性粒细胞性白血病骨髓中垂体瘤转化基因的表达
目的研究垂体瘤转化基因(PTTG)在慢性粒性细胞白血病(CML)患者中不同临床阶段的基因表达,为阐明CML演变的可能机制提供依据.方法采用半定量RT-PCR方法检测34例CML患者(慢性期16例,加速期11例,急变期7例)及10例正常骨髓单个核细胞(BMMNC)中PTTG基因的表达.结果 10例正常对照中未检测到PTTG基因的表达,34例CML患者中,慢性期组、加速期组、急变期组的PTTG基因的表达分别为0.2400±0.140 7,0.650 9±0.230 7,0.594 3±0.121 4,明显高于正常对照组的0.059 0±0.023 3(P＜0.05).pTTG基因在加速期及急变期的表达高于慢性期(P＜0.05),pTTG基因在加速期和急变期的表达升高但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PTTG基因的过度表达和CML的发生、发展有关.
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SCL基因在急性白血病患者中的表达及其意义
目的：探讨SCL基因在急性白血病患者中的表达及其临床意义。方法：应用RTPCR方法对110例急性白血病患者不同时期127份外周血标本中SCL基因的表达进行检测。结果：在初治／复发期、完全缓解期(缓解时间＜6月)及完全缓解后期(缓解时间＞2年)急性白血病中SCL基因表达阳性率分别为65.9％、56.3％及20.0％，在初治／复发期与完全缓解后期间差异有显著性P＜0.05)。正常人外周血未检测到SCL基因表达。结论：大多数急性白血病表达SCL基因，SCL基因在急性白血病的发生中可能起一定的调节作用，它的表达有应用于临床作为检测微小残留病的价值。
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急性淋巴细胞白血病骨髓细胞血管生成素2mRNA表达及其临床意义
目的 研究血管生成素2(Ang-2)基因在急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达及其临床意义.方法 建市检测Ang-2基因的SYBR Green Ⅰ荧光实时定量聚合酶链反应(RQ-PCR)方法 ,对59例初发ALL患者骨髓细胞进行Ang-2表达水平的检测.同时选择20例非恶性血液病患者的骨髓细胞作为对照.结果 ALL及对照组骨髓细胞中均有Ang-2基因的表达,但在ALL患者的表达显著高于对照组(中位数分别为348.11、63.25,P<0.05).Ang-2表达水平与患者初诊时年龄、血红蛋白、白细胞、血小板、乳酸脱氢酶水平和外周血白血病细胞比例及骨髓白血病细胞比例等指标无明显相关(r=-0.066,r=-0.063,r=0.233,r=-0.145,r=0.105,r=-0.021,r=-0.190).Ang-2高表达组与低表达组的1年复发率、生存率比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 Ang-2基因表达水平在ALL组高于非恶性血液病组,可能与ALL患者临床表现、治疗反应及预后无关.
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WT1基因在骨髓增生异常综合征患者中的表达
目的 探讨WT1基因在骨髓增生异常综合征(MDS)诊断和预后判断中的意义.方法 采用骨髓涂片提取RNA,通过荧光定量RT-PCR方法,检测45例MDS患者及10例健康人骨髓涂片中WT1表达水平.结果 MDS各亚型WT1基因表达与健康对照组差异有统计学意义,与MDS患者的疾病进展呈正相关;半年内发展为难治性贫血伴原始细胞过多(RAEB)/转化中的难治性贫血伴原始细胞过多(RAEBt)的难治性贫血(RA)患者,其WT1表达明显高于半年内病情稳定的RA患者;在RA期间,WT1表达水平的波动小于1个对数级,从RA发展到RAEB时,WT1表达水平增长1个对数级以上.结论 WT1基因可作为MDS疾病进程的标志物;若WT1表达水平比健康对照平均值高2个对数级,提示可能诊断为RA;若RA患者的WT1表达水平上升大于1个对数级,提示MDS近期内可能发生疾病进展.
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实时定量荧光反转录-聚合酶链反应检测急性白血病AML1/ETO融合基因
目的 建立实时定量荧光反转录-聚合酶链反应(RQ RT-PCR)的方法并用来检测急性髓系白血病(AML)-M_2:患者中 AML1/ETO融合基因的拷贝数,观察患者体内融合基因阳性率、该融合基因转录水平的变化情况及AML1/ETO 融合基因阳性患者对治疗的反应.方法 利用含 AML1/ETO融合基因的 Kasumi-1 细胞株构建质粒标准品并制作标准曲线,检测 25例 AML-M_2患者的骨髓及 外周血标本45份,个别患者连续监测融合基因转录表达水平.25例患者均同时行流式细胞术免疫分型检测及骨髓细胞染色体检查,确诊后给予MA方案进行诱导缓解.结果 7例(28%)AML-M_2初发确诊 患者检测到AML1/ETO阳性(AML1/ETO:ABL为0.01-192),其中5例(20%)有t(8;21)(q22;q22).连续监测患者融合基因转录表达水平与临床缓解和复发的变化情况相吻合.7例AML1/ETO融合基因阳性患者均在MA治疗1个疗程后达完全缓解,AML1/ETO融合基因下降3个数量级.其余18例 完全缓解11例.连续监测7例AML1/ETO融合基因阳性患者6个月均处于完全缓解状态.结论 RQ RT-PCR技术成熟、操作简便,检测白血病融合基因结果准确稳定,对于临床明确诊断、具体分型、动态观测肿瘤负荷、选择治疗方案、评估治疗效果和预后都有较大价值.
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急性白血病Survivin和B7-1基因的表达及其临床意义
目的 研究Survivin和B7-1基因在急性白血病(AL)患者中的表达及临床意义.方法 应用RT-PCR检测64例AL患者Survivin和B7-1 mRNA的表达水平,14名健康人为对照,K562、HL-60细胞株为阳性对照.结果 Survivin的阳性表达率高于健康对照,且在初治AL中的表达水平较健康对照组明显升高,治疗缓解后Survivin表达下降,复发时表达水平升高;同时患者B7-1基因的表达率于对照组没有差异,但半定量后的表达水平明显较正常低,且初发和缓解患者表达量差异无统计学意义;在初治AL患者中Survivin阳性患者缓解率低于表达阴性的患者.结论 Survivin和B7-1基因表达的紊乱可能在AL的发病中起着重要作用,并与AL复发和预后相关.
