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更年春方对骨代谢相关基因表达的影响
况.结果:更年春高剂量组可上调OVX大鼠骨组织中OPG的mRNA的表达,下调M-CSF的mRNA的表达,使RANKL/OPG值下降.结论:更年春方抗绝经后骨质疏松骨丢失的分子机制可能与其调控OPG和M-CSF的表达,影响RANKL/OPG值有关.
关键词： 更年春 骨保护素 破骨细胞分化因子 巨噬细胞集落刺激因子 -
淫羊藿苷对Ⅱ型胶原诱导型关节炎大鼠骨破坏及血清RANKL/OPG的干预作用
目的 观察淫羊藿苷对Ⅱ型胶原诱导型关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠血清破骨细胞分化因子(receptor activator of NFκB-ligand,RANKL)和护骨素(osteoprotegerin,OPG)的影响及对骨破坏的保护作用.方法 除正常组(8只)外,其余大鼠用牛Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂注射诱导建立CIA大鼠模型.选取关节炎指数(arthritis index,AI)≥6分的CIA大鼠24只,根据其AI评分分为模型组、甲氨喋呤组和淫羊藿苷组,每组8只.正常组和模型组给予生理盐水灌胃,甲氨喋呤组给予甲氨喋呤每周 5 mg/kg灌胃,淫羊藿苷组给予淫羊藿苷20 mg/(kg·d)灌胃,均连续给药4周.每周记录大鼠AI评分.给药结束后,HE染色观察踝关节组织形态学变化;X射线检查足趾骨质破坏与骨质疏松情况;ELISA法测定血清RANKL、OPG水平.结果 给药4周后,与模型组比较,淫羊藿苷组AI评分、Larsen评分、血清RANKL水平及RANKL/OPG比值明显降低,OPG水平明显升高,差异均有统计学意义(P <0.05,P <0.01);甲氨喋呤组上述指标均降低,差异无统计学意义(P >0.05).HE染色示淫羊藿苷组关节滑膜增生、炎症细胞浸润与软骨面破坏程度明显减轻.结论 淫羊藿苷能缓解或减轻CIA大鼠骨破坏程度,其作用机制可能与降低CIA大鼠血清RANKL水平,提高OPG浓度进而降低RANKL/OPG比例有关.
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破骨细胞分化因子与乳腺发育
破骨细胞分化因子(RANKL)可以促进乳腺在妊娠中后期形成正常的小叶-腺泡结构,其作用机制为RANKL与其特异性受体RANK结合,通过IKKα促进乳腺上皮细胞Cyclin D1蛋白的表达,从而促进乳腺上皮细胞的增生.RANKL在乳腺上皮细胞的表达受催乳素、孕激素等性激素和PTHrP的调节.而且RANKL在妊娠期骨质疏松和乳腺癌骨转移中也有重要作用,于是在骨代谢调节中起重要作用的RANKL就成为乳腺与骨之间的新的桥梁.
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巴戟天多糖对大鼠正畸牙移动过程中牙周组织和ODF表达的影响研究
目的 探讨巴戟天多糖在大鼠牙齿移动过程中对牙根吸收的影响.方法 选择36只健康雄性Wistar大鼠,随机分成实验组和对照组,实验组于大鼠加力第1d开始注射巴戟天多糖溶液,对照组给予生理盐水,每3天1次.加力第3d、7d、14 d,两组大鼠随机选取6只处死,通过大鼠牙齿移动距离、HE染色及免疫组织化学染色探究巴戟天多糖的作用.结果 大鼠第一磨牙压力侧牙周膜出现不同程度的缩窄,牙周膜纤维排列紊乱,牙根及牙槽骨表面出现吸收陷窝.实验组牙齿移动距离及破骨细胞分化因子(ODF)的表达情况均低于对照组,且实验第7d、14 d时两组差异有统计学意义.结论 巴戟天多糖可抑制ODF的表达和牙移动距离,对正畸牙移动过程中所引起的牙根吸收有抑制作用.
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治疗骨质疏松促进骨形成药物
一、OPG-OPGL-RANK系统与骨质疏松新药物的开发护骨素(osteoprotegrin,OPG)也称破骨细胞抑制因子(OCIF)是由成骨细胞与骨髓基质细胞产生的一种与肝素结合的分泌糖蛋白,属于TNF受体(TN-FR)家族的可溶性受体.护骨素配体(OPGL)又称RANKL或破骨细胞分化因子(ODF),是成骨细胞上的跨膜蛋白.
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破骨细胞分化因子及生成抑制因子
破骨细胞来源于骨髓中的单核-巨噬细胞克隆形成单位(GM-CFU)[1,2].破骨细胞的分化和/或其功能的改变所导致骨改建平衡状态的失控,是多种代谢性骨病如骨质疏松症、骨硬化症、Paget's骨病等形成的病理基础.
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中药骨碎补对去睾丸骨质疏松症动物模型的影响
目的 研究去睾丸骨质疏松症动物模型骨质疏松症的发生、病理及病理生理学改变,以及药物干预的影响及其分子机制.方法 6月龄的雄性SD大鼠随机分为阴性对照组、去睾丸组、雌激素治疗组、雄激素治疗组和中药治疗组等5组.12周后检测各组骨密度、骨形态计量学参数的变化并比较各组间差异.采用大鼠骨髓基质细胞体外培养,各动物实验组处理后进行血清干预,RT-PCR方法检测干预后各组细胞的ODF及OPGmRNA水平表达差异.结果 各药物治疗组对SD大鼠骨密度、骨形态计量学参数的维持具有明显的效果,而且在体外可明显地抑制ODF的表达和促进OPG的表达.结论 各药物治疗组对去势雄性大鼠的骨质疏松症有一定疗效,可能是通过调节ODF和OPG的表达和分泌而发挥作用的.
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RANKL和IL-17A在中耳胆脂瘤中的表达及相关性研究
目的 观察破骨细胞分化因子(RANKL)和白介素-17A(IL-17A)在中耳胆脂瘤组织中的表达,探讨二者在中耳胆脂瘤骨质破坏机制中的作用.方法 采用免疫组织化学两步法和计算机图像定量分析法,检测RAN-KL、IL-17A在25例中耳胆脂瘤上皮、16例胆脂瘤周围肉芽组织及15例正常外耳道皮肤中的表达,同时观察二者的表达与临床听小骨骨质破坏程度的相互关系.结果 (1)RANKL、IL-17A在胆脂瘤上皮及胆脂瘤周围肉芽组织中表达增高,分别与正常对照组比较,差异均有统计学意义(t_(RANKL)=9.864、5.630,均P<0.05;t_(IL-17A)=13.905、9.011.均P<0.05),且二者的表达与骨质破坏程度相关.(2)在胆脂瘤上皮及胆脂瘤周围肉芽组织中,RANKL与IL-17A的表达呈正相关(r_(上皮)=0.692,r_(肉芽)=0.538,P<0.05).结论 RANKL及IL-17A在中耳胆脂瘤组织中呈高表达,与骨质破坏程度成正比,表明其与胆脂瘤骨质破坏机制密切相关;RANKL与IL-17A表达有相关性,提示二者之间可能存在相互作用.
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应用螺旋扩弓器牵引兔下颌中缝后新骨的OPG及RANKL的表达
目的:利用螺旋扩弓器进行下颌正中联合横向牵张成骨,扩展下颌间隙,并探讨在机械张力作用下新骨组织中骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)、破骨细胞分化因子(Receptor or Activator of NF-KB Ligand,RANKL)表达规律.方法:建立兔下颌骨正中联合牵张成骨模型,用免疫组化方法检测牵张后1d、牵张后4d、固定后1w,固定后4w、固定后12w的牵张区新生骨组织中骨保护素(OPG)、破骨细胞分化因子(RANKL)不同时期的分布和表达.结果:下颌正中联合牵张成骨除一只外,其余实验动物均成功,牵张平均量为4mm,牵张成骨1d和牵张成骨4dOPG的阳性细胞数百分比逐渐增加,固定1w到12w组织中阳性细胞数百分比逐渐减少,RANKL阳性细胞数的百分比仅在牙缝关闭后与对照组有差异,其余各时间点均无明显差异.结论:下颌正中联合横向牵张成骨是扩展下颌间隙的一种行之有效的方法.机械牵张力能够促进OPG表达,OPG可能在牵张成骨的早期起一定的抑制破骨并促进调节新骨形成作用,RANKL则与骨改建有关,发挥一定的作用.
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流体剪切力对MLO-Y4骨细胞骨性标志物表达的影响
目的 通过研究MLO-Y4骨细胞受流体剪切力作用前后骨性标志物在mRNA水平的表达变化,探讨机械力影响骨组织代谢中骨细胞的作用.方法 以小鼠成骨细胞(MOB)为参照,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测MLO-Y4细胞在体外培养条件下,以及受流体剪切力作用0.5 h,1 h,2 h,4 h,6 h,12 h,24 h后骨性标志物在mRNA水平的表达特征和变化.结果 以MOB为参照,在mRNA水平,体外培养条件下MLO-Y4细胞骨钙素(OCN)、碱性磷酸酶(ALP)和骨桥蛋白(OPN)高表达;破骨细胞分化因子(RANKL)、骨保护因子(OPG)低表达,但RANKL/OPG比值明显高于MOB.受流体剪切力作用后,MLO-Y4细胞ALP、OCN表达降低;RANKL和OPN表达增加;OPG随加力时间也有一定变化.结论 MLO-Y4细胞具有分化终末骨细胞的特点;流体剪切力作用后,RANKL/OPG比值以及ALP、OCN和OPN等骨性标志物的表达发生变化,为其参与机械力信号到生物信号的传导过程提供了间接证据.
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周期性牵张力对破骨细胞分化因子mRNA表达的影响
通过观察周期性牵张力对破骨细胞核因子кB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-kappa B ligand, RANKL,又称破骨细胞分化因子)mRNA表达的影响,探讨周期性牵张力早期抑制破骨细胞形成的机制.
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破骨细胞分化因子和破骨细胞发生抑制因子的研究进展
牙周组织改建是机械力作用下正畸牙齿移动的生物学基础,主要表现为牙槽骨的有序吸收和增生;而涉及这一过程重要的细胞是成骨细胞和破骨细胞,同时破骨细胞性骨吸收是牙齿移动的第一步.近发现破骨细胞分化因子、破骨细胞发生抑制因子是调节骨组织代谢的核心因子,相关研究是目前骨改建机制研究的热点.本文从其结构、功能及作用机制方面加以论述.
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透明质酸盐对骨性关节炎关节液中OPG/ODF的影响
目的：探讨透明质酸盐对骨关节炎患者膝关节滑液中骨保护素（OPG）、破骨细胞分化因子（ODF）及比率的影响。方法选取2010年9月至2013年我院风湿免疫科关节患者63例，随机分为注射玻璃酸钠组及对照组，另选取30例为正常对照组，骨关节炎关节滑液内OPG、ODF水平。结果透明质酸关节腔注射的骨性关节炎患者关节滑液OPG高于未注射患者， ODF明显低于未服药患者。结论透明质酸盐通过调节OPG、ODF的比率影响软骨和骨代谢平衡来治疗骨性关节炎。
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RANKL/RANK/OPG/NF-κB系统的药物调节对假体周围骨溶解的抑制作用
人工关节置换术后假体周围骨溶解是关节寿命的主要限制因素,终导致假体失败.其核心问题是无菌炎症性骨溶解.近年来,许多学者对参与该过程的细胞因子进行深入研究,主要包括炎症因子、趋化因子、促破骨细胞分化因子、血管形成因子、集落刺激因子,它们相互作用,终通过破骨细胞的分化和成熟造成骨质吸收和溶解.其中RANKL/RANK/OPG/NF-κB系统在炎症性骨溶解和破骨细胞分化成熟过程中扮演关键的角色.
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破骨细胞分化因子哺乳类荧光蛋白融合表达载体的构建与序列鉴定
目的:为了用基因工程表达重组人破骨细胞分化因子(ODF)可溶性功能片段,构建哺乳动物细胞表达载体.方法:PCR扩增人ODF基因cDNA功能活性片段,利用拓扑酶连接入哺乳动物细胞表达载体pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO,转化E.coli TOP10感受态细胞,氨苄青霉素筛选阳性克隆,提取质粒进行酶切分析和测序分析.结果:成功克隆了人ODF基因cDNA功能片段.结论:载体构建成功,为基因工程制备ODF并进一步研究奠定了基础.
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定量观察力值对牙周膜细胞破骨相关因子OPG、RANKL表达的影响研究
目的 探索不同牵张力值对牙周膜细胞破骨相关因子骨保护素(OPG)、破骨细胞分化因子(RANKL)表达的影响分析.方法 随机选取口腔正畸门诊上10~14岁青少年需要拔除的正畸牙或埋伏牙.通过X线检查,所取牙齿标本根尖均没有发生病变,没有发生骨质吸收,牙周组织无发生炎症性病变.共设定为1个对照组与3个实验组,同时依据加载的时间长短还设定了0 h、6 h、12 h以及24 h 4个时间段.利用SPSS 20.0统计学软件进行分析.结果 随着培养和加压时间的延长,牙周膜细胞破骨相关因子骨保护素,破骨细胞分化因子的2-△△ct值也呈现逐渐升高趋势,差异有统计学意义(P<0.05);在4组研究对象中,各个时间点动态牵张力(A组和B组)骨保护素,破骨细胞分化因子的2-△△ct值高于零张力组,差异有统计学意义(P<0.05);静牵张力组与零张力组不同时间点骨保护素,破骨细胞分化因子的2-△△ct值差异无统计学意义(P>0.05).结论 牵张力值和作用时间与牙周膜细胞破骨相关因子骨保护素,破骨细胞分化因子的2-△△ct值存在有明显的相关性.
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人破骨细胞分化因子基因启动子报告载体的构建
目的:构建能够报告人破骨细胞分化因子(ODF)基因启动子活性的表达载体.方法:以人基因组DNA为模板,PCR扩增含有ODF基因启动子的2段序列(-2433～-1 243 bp和-1 262～+100 bp),通过T-A克隆将这2个序列片段分别连接到pGEM(R)-T Easy克隆载体上.利用特定的限制性内切酶位点,将这2个序列片段酶切后进行正确拼接并定向克隆到不含启动子的pEGFP-1报告基因载体上.将该重组质粒pEGFP-1-ODF瞬时转染成骨细胞系UMR106,检测其能否在ODF基因启动子(-2 358～+100 bp)的调控下表达报告基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP).结果:pEGFP-1-ODF经酶切鉴定和序列分析证实与设计完全一致.细胞瞬时转染结果表明,pEGFP-1-ODF转染的UMR106能表达EGFP.结论:人ODF基因启动子报告载体的成功构建,为进一步研究ODF基因表达转录水平的调控机制奠定了基础.
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人破骨细胞分化因子基因的克隆及在COS-7细胞中的表达
目的克隆人破骨细胞分化因子(ODF)基因并在真核细胞中表达.方法以人骨肉瘤细胞系MG63的总RNA为模板,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法得到ODF的编码区cDNA,构建真核表达载体pcDNA 3.1(+)-ODF,在脂质体介导下转染非洲绿猴肾细胞系(COS)-7,经G418压力筛选建立稳定转染人ODF的细胞系,Western印迹检测其在COS-7细胞中的表达.结果获得的人ODF cDNA序列与文献报道的核苷酸序列一致,Western 印迹证实稳定转染人ODF的COS-7细胞系中有ODF的表达.结论构建了人破骨细胞分化因子(ODF)的真核表达载体,并在COS-7细胞中获得稳定表达.
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人可溶型破骨细胞分化因子的克隆原核表达及活性分析
目的 克隆人可溶型破骨细胞分化因子(sODF)基因,构建融合表达载体,在大肠杆菌中表达,并制备抗体.方法 采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法得到人可溶型破骨细胞分化因子(ODF)编码区cDNA,克隆入原核表达载体pGEX-4T-3,转化大肠杆菌感受态细胞JM109,0.1 mmo/L β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后收集菌体蛋白,行十二烷基硫酸钠-多丙烯酰胺冻胶电泳(SDS-PAGE).纯化蛋白,体外诱导破骨细胞分化.结果 获得人sODF基因cDNA,构建原核表达载体pGEX-ODF,转化菌株可表达人GST-ODF蛋白,蛋白相对分子质量约为43 000,Western分析证实为GST-sODF融合蛋白.纯化后的表达产物体外培养人外周血淋巴细胞有破骨细胞形成,象牙片上有骨吸收陷窝形成.结论 成功获得人sODF基因cDNA,并在大肠杆菌中表达了人GST-ODF融合蛋白.成功表达的人sODF蛋白有诱导破骨细胞分化的活性,为该蛋白的进一步应用研究提供了依据.
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OPG/RANKL/RANK系统在风湿性疾病中的研究进展
OPG/RANKL/RANK系统是近年来发现的在破骨细胞(osteoclast,OC)分化过程中的一个重要信号传导通路,包括:RANKL(ligand of receptor-activator of NF-KB),或称为破骨细胞分化因子(osteoclast differentiatioc factor, ODF);其受体是位于破骨细胞细胞膜上的RANK(receptor activator of NF-KB);骨保护素(osteoprotegerin,OPG)是RANKL的假性受体.
