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ELISA快速测定牛奶中阿维菌素前处理方法的建立
改进ELISA快速测定牛奶中阿维菌素的前处理方法，以改进后处理液作为标准品基质绘制标准曲线，IC50浓度值为1.9μg/L，与PBS缓冲液测定值相同；对牛奶中阿维菌素的检出限为2.0μg/L，对牛奶样品的加标回收率范围为75.8%-104.8%，批内、批间变异系数均未超过15.0%；以两种前处理方法对实际样品进行处理后检测，改进后处理方法检测结果更接近仪器方法检测值且与检测值相差不大，因此该试剂盒可满足相关残留检测国家标准，能满足我国市场和进出口食品检测需要。
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福尔马林固定石蜡包埋组织的PCR-STR分型
分析福尔马林固定石蜡包埋组织的DNA多态性,对某些医疗纠纷或陈年旧案的解决或侦破具有重要作用.本文作者用Promega公司提供的GeneprintSTR system复合扩增试剂盒,检测了1～20年的福尔马林固定石蜡包埋的同一个体不同组织块的DNA,取得满意的效果,现报道如下.
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辽南地区人群9个STR基因座的多态性分析
本文作者用商品化并被广泛应用的AmpFeSTRTM Profiler PluSTM试剂盒,对D3S1358、vWA、D8S1179、FGA、D21S11、D18S51、D5S818、D13S317、D7S820等9个基因座进行复合扩增,并对辽南地区汉族人群进行了基因频率调查,现将结果报道如下.
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6个STR基因座在宁夏山区回族聚居区的多态性
128名无关个体血样,取自宁夏回族聚居之南部山区6县.Chelex法提取DNA,按Promega公司试剂盒操作方法进行D16S539、D7S820、D13S317、CSF1PO、TPOX、TH01等6个基因座的复合扩增,并进行聚丙烯酰胺变性胶电泳分离和银染检测,得到基因分型及各基因座等位基因频率分布(表1).
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广州地区汉族人群Penta D及Penta E STR基因座频率
应用PowerPlexTM16 system(Promega)荧光标记复合扩增试剂盒对广州地区汉族无关个体进行遗传多态性调查,报道如下.
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哈尔滨(地区)汉族人群F13A01、FESFPS、vWA基因座多态性
参照美国Promega公司Geneprint试剂盒提供的方法,采用F13A01、FESFPS、vWA三基因座复合扩增技术,对哈尔滨(地区)汉族人群中163个无关个体的3个基因座进行基因频率分布调查,现报告如下.
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国产CTT复合扩增试剂盒的研制与应用
由于STR所具备的优点和应用前景,DNA检测技术的权威性己为人们所接受.然而,进行鉴定的关键试剂一直依赖于进口.国外商品化的STR复合扩增试剂盒,如ABI公司和PROMEGA公司的荧光复合扩增试剂盒,以及PROMEGA公司的银染复合扩增试剂盒,产品价格较高,难以推广到基层.
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伏马毒素B1时间分辨免疫荧光检测试剂盒的研制
目的:为快速检测食品中的伏马毒素B1 (fumonisin B1,FB1),制备抗FB1的单克隆抗体并利用该抗体研制基于时间分辨免疫荧光分析方法的检测试剂盒.方法:在建立抗伏马毒素B1单克隆杂交瘤细胞株的基础上,采用小鼠腹腔注射法生产大量腹水,经Protein A亲和层析柱分离纯化、透析后得到单克隆抗体,利用所得抗体建立间接竞争性时间分辨免疫荧光分析试剂盒并优化各参数:线性范围、检出限及与黄曲霉毒素(aflatoxins,AFB1)、呕吐毒素(deoxynivalenol,DON)和载体蛋白BSA等的交叉反应性；对试剂盒稳定性采用37℃破坏实验；采用3个浓度的加标回收试验确定回收率；对19份样品及FB1玉米盲样进行检测,并同时用市售ELISA试剂盒进行验证.结果:所研制试剂盒的低检出浓度为2 ng/mL,检测线性范围为2～512 ng/mL,线性方程为Y=-0.644X+12.872 (R2=0.998),50％抑制浓度为10.07 ng/mL,加标提取后,玉米样品3个加标水平的回收率在78.32％～116.76％之间,与AFB1、DON和BSA均无交叉反应性,试剂盒常温下可保存315 d以上.结论:本研究建立了快速、敏感检测FB1的时间分辨免疫荧光检测试剂盒.
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应用AGCU Mini STR试剂盒进行亲子鉴定1例
1 案例某日,在某地发现1具无法辨认的男性尸体.送检该尸体肌肉组织及某失踪者妻子及儿子的血样,经Identifile(R)试剂盒检测,不排除符合亲子关系.然而通过DNA实验室信息管理系统检索,发现当地数据库还有6人(其中3人分型为Profiler Plus扩增结果)与失踪者的妻、子不排除符合亲子关系.
关键词： 法医遗传学 亲子关系 试剂盒 诊断 AGCUMiniSTR荧光检测试剂盒 -
AMEL基因座在STR分型中突变1例
1案例某日,某地发生一起火灾,现场勘查中发现已烧焦的4具"男尸".采用Chelex-100法提取1号尸体肌肉组织DNA,Identifiler试剂盒检测,结果见表1及图1.从表1及图1可看出,该尸体Amel基因座表现为XX.现场勘查时反复检查该尸体,男性解剖特征清楚明显.为进一步证实该尸体的"性别",我们又采用"十五课题"研制的13-Plex Y-STR系统试剂盒对该尸体肌肉组织DNA进行检测,结果见表2及图2.尸体解剖及Y-STR检验结果均证实该尸体为男尸.
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全血中DNA 6种提取方法的比较
目的 比较经典有机法、改良有机法、常规Chelex-100法、IQ法、Qiagen法及SP法6种方法在提取DNA纯度和得率上的差异.方法 收集10名健康志愿者的静脉全血各5mL,分别采用6种方法提取基因组DNA,通过紫外分光光度仪和荧光定量分析技术检测产物的纯度和浓度,计算得率,并使用统计软件对结果进行分析.结果 常规Chelex-100法所得DNA的纯度明显低于其他方法,而另外5种方法所得DNA纯度的差异不具有统计学意义.改良有机法得率低,IQ法得率高.统计结果表明试剂盒方法抽提全血DNA的得率明显高于经典有机法、常规Chelex-100法和改良有机法,其差异具有统计学意义.结论 与有机法和常规Chelex-100法相比,高质量试剂盒类方法更有利于法医学检材的DNA抽提.
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多套试剂盒在亲权鉴定特殊案例中的应用
目的 分析山东汉族人群21个常染色体STR基因座的遗传多态性,同时对用Goldeneye(R) DNA身份鉴定系统25A和20A检测存在基因突变或等位基因丢失的案例进行分析. 方法 用Goldeneye(R) DNA身份鉴定系统25A和22NC对山东汉族人群273个无关个体的40个常染色体STR基因座进行分型,对其中21个STR基因座的遗传多态性进行分析.同时对6个存在基因突变的案例增加检测Goldeneye(R)@DNA身份鉴定系统22NC、20Y、17X.另外3个存在等位基因丢失的案例,用AmpF(e)STR(R) Identifiler(R) Plus PCR扩增试剂盒验证并测序分析.结果 获得山东汉族人群21个常染色体STR基因座的遗传学参数.增加到40个常染色体STR基因座:5个存在基因突变的案例可达到鉴定要求,X-STR或Y-STR分型结果一致;另外1个可能基因突变的二联体案例,共有6个基因座的基因分型在被检父找不到生物学来源,两人的Y-STR基因分型相同,说明来自同一父系,但通过常染色体分型排除父子关系.2个在D18S51基因座存在等位基因丢失的案例,经基因测序分析,在相应的引物结合区被检母和孩子存在碱基的突变或丢失;另1个被检母和孩子在D13S317基因座存在等位基因丢失的案例,通过AmpF(e)STR(R) Identifiler(R) Plus PCR扩增试剂盒检测得到确认. 结论 山东汉族人群21个常染色体STR基因座有较高的遗传多态性,可用于日常的亲权鉴定案例.对部分存在基因突变的二联体案例,Goldeneye(R) DNA身份鉴定系统25A无法满足鉴定要求,应适当增加常染色体STR基因座的检测个数.对于存在等位基因丢失的案例,改用不同公司的试剂盒或进行基因测序可以解决.
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15个常染色体和10个Y-STR基因座复合扩增试剂盒的研发
目的：建立法医物证学常染色体和Y染色体综合检测的方法。方法选择常用的常染色体STR基因座和Y染色体STR基因座，设计复合扩增引物，形成五色荧光标记复合扩增试剂盒。结果开发出一个五色荧光标记复合扩增试剂盒，可同时对15个常染色体STR基因座、1个性别基因座和10个Y染色体STR基因座进行分型检测。结论15个常染色体STR加10个Y染色体STR检测试剂盒结合毛细管电泳凝胶进行STR分型，结果准确可靠，在法医学案件检验及数据库建设等方面有良好的应用前景。
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差异提取试剂盒在混合斑DNA提取中的应用
目的 评估差异提取试剂盒对混合斑样本中的精子和上皮细胞DNA分离提取的有效性.方法 采用差异提取试剂盒,选择性裂解精细胞和上皮细胞,结合磁珠法分别对人为控制条件下制备的模拟混合样本和案件中的混合斑检材进行精细胞DNA和上皮细胞DNA的分离提取.对所提取的DNA进行定量分析和STR分型.结果 该试剂盒能从精子和上皮细胞不同比例的混合斑中提取出高纯度的精细胞和上皮细胞DNA.结论 该差异提取试剂盒适用于性侵害案件中混合斑检材的DNA提取.
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碎尸案中腐败肌肉、牙齿的STR分型
碎尸和腐败尸体案件的检材以腐败肌肉组织、骨骼和牙齿为主，成功获得这类腐败、降解检材的STR分型对案件的侦办至关重要。本研究通过联合应用QIAcube全自动核酸纯化仪和REPLI-g?Single Cell试剂盒的方法提取、纯化高度腐败降解组织DNA，以提高严重降解等疑难检材的STR分型成功率。
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STR基因座复合扩增试剂国产化初探
商品化STR位点复合扩增试剂盒已被广泛用于我国个体识别、亲权鉴定和DNA数据库的建立[1-2],但由于进口的复合扩增检测试剂和仪器昂贵,使此技术难于在基层司法机关开展.
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AmpF STR SGM试剂盒应用评价
短串联重复序列（ STR）是一类广泛分布于人类基因组中的多态性 DNA，由于检测方便，检材适应性广，多态性较高， STR近年来正逐渐取代血清学和 DNA指纹图，越来越多地应用于亲权鉴定中 [1]。但是对 STR在亲权鉴定中的应用价值的评价，多数是通过调查群体的等位基因频率资料，计算非父排除率作为参考，这种评估的方法反映的是平均值，为了了解 STR在亲子鉴定中实际应用的情况，本文从实际案例出发，分析 10个 STR位点在亲权鉴定中的应用效果。
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HIV1+2型抗体化学发光免疫分析试剂盒的研制
[目的]建立检测HIV1+2型抗体化学发光免疫分析方法并研制其试剂盒.[方法]应用HIV-1的gp41和gp120,HIV-2的gp36蛋白混合包被化学发光微孔板作为固相抗原;用辣根过氧化物酶(HRP)标记以上抗原,应用含Luminol及其增强剂的化学发光底物作示踪剂,通过条件优化建立检测血清中HIV-1+2型抗体的双抗原夹心化学发光免疫分析法.应用该方法制备HIV1+2抗体化学发光免疫分析试剂盒三批,分别检测中国药品生物制品检定所(中检所)HIV抗体国家参考品,并与国内市场主要产品进行对比.[结果]建立了HIV1+2型抗体化学发光免疫分析试剂盒(双抗原夹心法).用中检所HIV抗体国家参考品检测,该方法研制的三批试剂盒均符合质量标准.与国内知名厂家的HIV-ELISA试剂盒比较,该方法所研制的试剂盒在灵敏度和精密性上较好.检测196份HIV1/2感染血清,226份其他疾病患者血清和正常人血清,阳性和阴性符合率均100%,与HIV-ELISA试剂相关性达0.994.三批变异系数均小于10%.试剂盒于37℃放置6 d后,检测结果的阴阳性判断不受影响.[结论]该法特异性强,灵敏度高,精密性及稳定性好,适用于献血员的筛查和临床HIV感染的检测.
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抗ENA 4种试剂盒对风湿病诊断性能的比较研究
临床上与自身免疫有关的一组疾患,如红斑性狼疮(SLE),类风湿性关节炎(RA),多发性肌炎(PM),皮肌炎(SM),多发性系统性硬化(SS),Sjogren综合症(SjS)等曾命名为结缔组织病,现统一归类为风湿病.
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非淋菌性尿道炎的治疗及护理体会
我科于2010年5月至2012年4月治疗非淋菌性尿道炎感染168例,现将治疗和护理体会报告如下.1 临床资料 1.1一般资料:本组病例均为男性,年龄18-48岁,平均28岁,病程1-20天,临床症状均为尿频、尿急、尿道刺痒、刺痛,尿道口红肿,挤压尿道口可见少量粘液性分泌物,分泌物涂片找不到淋球菌,尿道分泌物支原体培养或衣原体试剂盒实验阳性,符合男性非淋菌性尿道炎诊断.
