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牙本质磷蛋白在人牙胚发育中的原位杂交研究
目的:观察牙本质磷蛋白(DPP)基因在人牙胚组织发育过程中的表达,探讨其在牙齿发育中的作用.方法:采用原位杂交的方法,检测帽状期、钟状期牙胚组织DPP mRNA的表达.结果:人牙胚帽状期、钟状早期均未检测到DPP mRNA的表达,在钟状晚期前期牙本质形成时成牙本质细胞、前成釉细胞中呈阳性表达.结论:牙本质磷蛋白基因的转录具有明显的时空特异性,它可能在牙体硬组织的形成中起重要的作用.
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大鼠牙胚发育过程中环氧合酶-2分子的表达和分布
目的:观察环氧合酶-2 (cyclooxygenase-2,COX-2)在大鼠牙胚发育过程中的时空表达,探讨其在牙胚发育中的作用.方法:制备大鼠牙胚发育各期标本,兔抗大鼠COX-2多克隆抗体(1∶200)免疫组织化学染色.结果:COX-2在牙胚发育期间存在特异的时空分布模式,其阳性表达主要在牙胚发育帽状期、钟状期的口腔上皮、牙板上皮、外釉、中间层和星网状层.结论:首次观察到大鼠牙胚发育过程中存在COX-2的特异性时空表达,提示COX-2可能在牙胚发育中发挥一定的作用.
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原癌基因c-jun、c-fos在大鼠牙胚发育过程中的表达
目的:通过观察原癌基因c-jun、c-fos在大鼠牙胚发育过程中时空表达的特点,探讨它在牙胚发育中的作用.方法:制备大鼠牙胚发育各期组织标本,采用免疫组化的方法观察c-jun、c-fos在大鼠牙胚发育不同阶段的表达情况,并对结果进行图像分析和统计学分析.结果:c-jun在大鼠牙胚的蕾状期、帽状期呈阴性表达,在钟状晚期牙胚的成牙本质细胞中呈阳性表达,成釉细胞中亦有表达;c-fos在大鼠牙胚的蕾状期呈阴性表达,帽状期表达于内釉、外釉上皮和星网层,以内釉上皮层表达强.钟状期表达于成熟的成牙本质细胞,且随着硬组织的形成、矿化,表达逐渐减弱.结论:观察到c-jun、c-fos在大鼠牙胚发育不同时期的表达和表达变化,提示其可能参与成牙本质细胞、成釉细胞的分化和牙本质形成的过程.
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人牙本质涎蛋白在人牙胚发育过程中的表达和意义
目的:探讨人牙本质涎蛋白(human dentin sialoprotein, hDSP)在人牙胚发育过程中的表达和意义.方法:用免疫组化方法检测人牙本质涎蛋白在人牙胚不同发育阶段中的表达.结果:hDSP在蕾状期、帽状期釉上皮以及钟状早期内釉上皮有弱阳性表达,钟状中期正在分泌基质的成牙本质细胞、牙本质小管有强阳性表达,钟状晚期,牙本质小管仍有强阳性表达,而成牙本质细胞转为弱阳性表达.前成釉细胞、成釉细胞有一过性表达.前期牙本质始终无阳性表达.牙胚周围骨组织、软骨组织和口腔软组织无阳性表达.结论:提示hDSP可能参与了牙本质的形成.另外前期牙本质阴性表达,表明hDSP蛋白由成牙本质细胞分泌后,可能通过成牙本质细胞突起穿过前期牙本质分泌至矿化前沿,参与牙本质的形成.
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氟化物作用下体外培养人牙胚内釉上皮细胞中Smad4表达的变化
目的:观察不同浓度的氟化物对体外培养的人牙胚内釉上皮细胞中Smad4表达的影响,从细胞内信号转导水平探讨发生氟牙症可能的细胞内机制.方法:Trowell法体外培养人牙胚,用10 mg/L和 25 mg/L的氟分别刺激培养的牙胚,免疫组化观察结果.结果:免疫组化结果经图像分析显示10 mg/L组从第8天,25 mg/L组从第4天开始内釉上皮细胞中Smad4的表达低于对照组.结论:观察到,氟化物能抑制体外培养的人牙胚内釉上皮细胞中Smad4表达.提示:氟可能通过抑制Smad4分子来干扰上皮和间充质之间正常的信号转导,进而使釉质的分化发育受到影响.这有可能即是氟牙症发生的细胞内机制之一.
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牙胚中上游刺激因子部分序列的cDNA克隆
目的:克隆牙胚中上游刺激因子(upstream stimulatory factor,USF)基因编码区特异片段.方法:从生后5 d balb/c 鼠牙胚中抽提总RNA, 用随机引物逆转录合成cDNA,然后用PCR方法借助特异性引物从cDNA中扩增小鼠USF1基因片段(289bp), 电泳检测、回收目的片段.将所得的基因片段连接至Teasy质粒载体,并转化到大肠杆菌DH5α后挑选阳性克隆,扩大培养,提取重组质粒DNA, 酶切分析和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆.结果:酶切图谱显示质粒重组、克隆成功,序列分析结果与国外报道一致.结论:在牙胚中克隆到USF1基因片段.
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人牙胚cDNA文库的构建
目的:构建具足够库容量的人牙胚cDNA 文库.方法:提取人牙胚mRNA并反转录成cDNA,经LD PCR扩增后, 将双链cDNA克隆到λ TripleX2中,包装噬菌体,以XL-1-Blue为受体菌滴定、扩增文库,用两端引物做PCR鉴定.结果:500μl文库的库容量为0.8×106pfu,重组率为83%,10个克隆有9个可扩增出cDNA片段,长度为500～20 00bp. 结论:构建的文库具较好的库容量、重组率以及较大的插入片段.
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胶质源性神经营养因子在人牙胚和体外培养的人牙乳头间充质细胞中表达的实验研究
目的:观察胶质源性神经营养因子(GDNF )在人牙胚和体外培养的人牙乳头间充质细胞中表达部位及其表达变化.方法: 应用免疫组织化学和免疫细胞化学技术.结果:GD NF在人牙乳头间充质细胞和人牙胚免疫组化染色呈阳性结果,表达位于人牙乳头间充质细胞以及牙胚的成牙本质细胞和前期牙本质细胞层,为胞浆内着色,呈黄褐色. 结论:GDNF可能参与促成牙本质细胞分化,对牙齿硬组织发育起非神经源性调节作用.
关键词： 胶质源性神经营养因子 牙胚 牙乳头间充质 -
大鼠牙胚发育过程中釉原蛋白的表达
目的：研究釉原蛋白在大鼠牙胚发育不同时期的表达。方法：免疫组织化学和病理学方法。结果：胚胎第17天未观察到釉原蛋白的表达，第18天先观察到免疫染色。出生后第3天和第5天成釉细胞分泌期釉基质中染色强烈，以后处于低水平持续状态(第6、7、8天)。第9天染色为阴性。结论：釉原蛋白只在前成釉细胞处于分泌阶段和成釉细胞正分泌基质的时候才出现，在分泌后期，釉原蛋白的表达处于一种很低的水平。一旦分泌完成或釉质已形成，釉原蛋白就降解消失。在成牙本质细胞中未检测到釉原蛋白的表达。
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氯丙嗪对大鼠牙齿矿化抑制作用的实验研究
目的：探讨氯丙嗪（chlorpromazine ,CPZ）对大鼠切牙硬组织矿化的影响。方法：采用酶联反应仪及高压液相色谱仪（HLPC）检测CPZ对培养不同时间牙胚ALP及Ca2+的含量，利用显微放射照相技术观察CPZ对大鼠硬组织矿化的情况。结果：培养0～7d牙胚Ca2+含量及ALP逐渐上升。培养7～10d的牙胚中，实验组Ca2+含量及ALP活性的上升幅度显著减弱；CPZ剂量依赖性地抑制大鼠牙本质形成，并且对血浆中Ca 、P无明显影响。结论：CPZ 对大鼠牙齿矿化过程具有抑制作用，该作用是通过成牙本质细胞的钙调节系统实现的。
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人牙胚cDNA文库的筛选和Hevin cDNA的克隆
目的: 筛选人牙胚cDNA文库，考察Hevin在牙齿发育过程中是否表达。方法: 以Hevin的一段编码序列作为探针筛选人牙胚cDNA文库，挑取阳性噬菌斑，将其转化为质粒DNA，再通过限制性酶切和部分核苷酸序列分析的方法鉴定阳性克隆。结果: 从人牙胚cDNA文库中筛选到一个阳性克隆，序列分析结果证实为Hevin的cDNA。结论: 克隆到Hevin基因的部分cDNA序列，说明Hevin在牙胚发育过程中确有表达。
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TGF-?TGF-?TGF-?蛋白在人牙胚表达的免疫组化研究
目的：探讨TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3在人牙齿发育过程中的作用。方法：采用SP免疫组化方法，检测正常引产的胎龄为4～7个月的胎儿颌骨组织切片中TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3在牙胚中的分布。结果：TGF-β1、TGF-β3主要在成釉细胞及成牙本质细胞表达，TGF-β2主要在内釉细胞及成釉细胞表达；TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3在釉结均呈阳性表达。结论：TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3是人牙齿发育过程中重要的调节因子，参与牙胚细胞分化、基质形成及牙齿形态形成。
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尖牙先天缺失1例
病人女,17岁,2008-09-20因乳牙脱落后恒牙未萌就诊.口腔检查:右侧上颌尖牙和左侧下颌尖牙缺失,左侧上颌乳尖牙滞留,松动Ⅰ度,余牙正常.全口曲面断层X线片显示:13、23、33无牙胚,左侧上颌乳尖牙牙根较短,牙根无明显吸收(图1).其母亲叙述也有2个尖牙缺失.诊断:13、23、33先天缺失.
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双侧磨牙后多生牙1例
患者女,35岁.因左侧上颌后牙出血半年就诊.口腔检查发现:左侧上颌第三磨牙远中探及一低位阻生牙,牙龈红肿、出血,其他第三磨牙后未探及多生牙.病人诉左侧下颌后牙曾拔过牙,拍左侧上颌第三磨牙X线片及曲面断层片(图1、2),见双侧上颌第三磨牙远中对称各有1个多生牙,右侧下颌第三磨牙远颊向有一埋伏牙,左侧下颌第一、二前磨牙下方有一埋伏牙.X线片上见左侧上颌多生牙.对于磨牙远中多生牙的出现,目前仍无确切原因.有人认为与牙胚分裂有关,但多认为与返祖现象或隔世遗传有关.该患者在双侧上、下颌磨牙后对称出现多个多余牙实属罕见.
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下颌双侧埋伏多生牙1例
患者女,15岁,因错颌畸形就诊.临床检查:恒牙列,中性颌,上颌牙列不齐,口内检查未见23.下颌牙列不齐,33舌向错位,32和34间隙约2.5 mm.常规曲面断层片检查:已萌出牙牙根发育正常,在33和34间埋藏一多生牙胚.
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双侧上颌第一磨牙先天缺失1例
患者女,9岁.因前牙反(牙合)求治,查:替牙(牙合),前牙8个恒切牙萌出,双侧下颌第一磨牙萌出,上颌第一磨牙缺失,余为乳牙,右侧乳磨牙亦为反(牙合).随拍头颅侧位片和全(牙合)曲面断层片,断层片显示:未见双侧上颌第一恒磨牙牙胚,临术上第一磨牙缺失比较少见.
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32与33、42与43融合牙1例
患者女,10岁.主诉右侧下颌牙疼痛1 d来我科就诊.查:84残根,牙周红肿,无溢脓.32与33融合,42与43融合.从融合牙唇侧可见两牙解剖外形及两牙之间的一条纵形浅沟,近切缘处有3 mm未完全融合(图1).X线片示:两融合牙均为单根、单根管,34、35、44、45牙胚正常.追问病史:其母妊娠期无感染及服药史,患者婴幼儿期无传染病史及外伤史,无类似家族史.诊断:32与33、42与43融合牙.融合牙在临床上较为常见,但是双侧对称发生者较少.
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多数恒牙先天性缺失1例
患者男,12岁,因多个恒牙未萌来诊.检查:16、26、36、46已萌,形态正常,51缺失,其余乳牙均尚滞留.乳前牙呈小圆锥形,排列稀疏.咬牙合关系无明显异常.口腔全景片示:除16、26、36、46已萌出外,未见其余恒牙牙胚,颌骨发育基本良好,密度无异常.
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多个恒牙迟萌1例
患儿男,12岁.因切牙未萌就诊.检查:全身消瘦,口内14,16,26,35,36,46已萌,51,52,53,55,61,62,63,64,65,71,72,73,74,81,82,83,84,85未脱落,乳牙无松动,无龋齿.拍曲面断层片显示:31,41先天缺失,其余未萌的恒牙均有牙胚,口内乳牙无牙槽骨吸收现象.母亲代述患儿自幼以来不吃肉、蛋类食品,母亲怀孕时有阑尾炎病史.
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右侧上颌多生融合牙1例
患者男,12岁,汉族.因右侧上颌前牙形态异常就诊.检查:22缺如,21、23间有2mm间隙.11、21位置形态正常.12为形态似侧切牙的两个牙冠融合.X线片示:12冠根融合,根尖1/3稍弯曲,11根尖远中1/3可见形态似切牙的牙胚,22缺如.
