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人牙本质涎蛋白对狗牙髓损伤修复影响的实验研究
目的探讨人牙本质涎蛋白对狗牙髓损伤修复的影响.方法实验共分3组,实验组(hDSP组);对照1组(无hDSP组);对照2组(PBS组);选择10 Kg、6～12月龄的杂种狗3只,上、下尖牙、上、下磨牙和下前磨牙为实验牙,每只狗选10个牙,随机分配实验组和对照组,实验组共18个牙,对照1组和2组各6个牙.于所选牙齿颈部, 用1/2球钻在灭菌生理盐水滴注下穿通髓腔、露髓处置上述实验组和对照组胶原膜,光固化封闭窝洞.2、4、8周处死动物,经4%多聚甲醛灌注后,分离实验牙,再固定48 h后,脱钙3～4周,脱水,石蜡包埋,制备5～8 μm厚连续切片,HE染色.结果术后2周:对照组与实验组无明显差异,无牙本质桥形成.术后4周:对照组无牙本质桥形成,实验组有部分骨样牙本质桥形成.术后8周:对照组牙髓组织基本正常, 无牙本质桥形成,实验组有完整的骨样牙本质桥形成,其下方有排列整齐的成牙本质细胞样细胞形成.结论首次发现hDSP在体内能够诱导牙髓细胞分化,形成修复性牙本质.
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人牙本质涎蛋白在人牙胚发育过程中的表达和意义
目的:探讨人牙本质涎蛋白(human dentin sialoprotein, hDSP)在人牙胚发育过程中的表达和意义.方法:用免疫组化方法检测人牙本质涎蛋白在人牙胚不同发育阶段中的表达.结果:hDSP在蕾状期、帽状期釉上皮以及钟状早期内釉上皮有弱阳性表达,钟状中期正在分泌基质的成牙本质细胞、牙本质小管有强阳性表达,钟状晚期,牙本质小管仍有强阳性表达,而成牙本质细胞转为弱阳性表达.前成釉细胞、成釉细胞有一过性表达.前期牙本质始终无阳性表达.牙胚周围骨组织、软骨组织和口腔软组织无阳性表达.结论:提示hDSP可能参与了牙本质的形成.另外前期牙本质阴性表达,表明hDSP蛋白由成牙本质细胞分泌后,可能通过成牙本质细胞突起穿过前期牙本质分泌至矿化前沿,参与牙本质的形成.
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人牙本质涎蛋白对体外培养的人牙乳头间充质细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响
目的:观察人牙本质涎蛋白对体外培养的人牙乳头间充质细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响.方法:分对照组和实验组,对照组是转染不含目的基因的空白质粒pcDNA3的培养上清,实验组是转染pcDNA3-hDSP重组质粒的培养上清.取第5代人牙乳头间充质细胞,接种于96孔板,对照组6孔,实验组10孔,用MTT法检测 hDSP对体外培养的人牙乳头间充质细胞增殖的影响,用碱性磷酸酶检测试剂盒检测 hDSP对体外培养的人牙乳头间充质细胞碱性磷酸酶活性的影响.结果:hDSP能明显抑制体外培养的人牙乳头间充质细胞增殖(P<0.01),但能促进细胞内和培养上清中碱性磷酸酶的分泌(P<0.01).结论:hDSP能促进人牙乳头间充质细胞的分化和矿化.
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人牙本质涎蛋白的抗体制备和组织表达研究
目的:制备人牙本质涎蛋白抗体,观察其在不同组织的表达情况.方法:用原核表达并经过初步纯化的人牙本质涎蛋白免疫新西兰大白兔获得多克隆抗血清并用Western blot法测定效价和检测牙胚和其它组织的蛋白表达.结果:抗人牙本质涎蛋白抗血清效价可达1:100000;Western blot显示牙本质涎蛋白在人牙胚中有表达,其分子量约为Mr 60×103左右.结论:牙本质涎蛋白在人牙胚组织中有表达,提示其在牙齿发生、牙本质修复和再矿化中可能起重要作用.
关键词： 人牙本质涎蛋白 抗体 Western blot
