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核心结合因子a1在小鼠矿化期牙胚中的表达
目的 研究核心结合因子a1 (core binding factor a1,Cbfa1)蛋白及mRNA在小鼠矿化期牙胚的各细胞及不同组织中的表达定位,探讨其对牙齿发育的作用.方法 取出生后第5-7天BALB/c小鼠,拉颈处死,分离解剖含下颌第一磨牙区下颌骨,新鲜配制4％多聚甲醛固定过夜,常规石蜡包埋,近远中向5μm连续切片,采用免疫组化和原位杂交方法检测Cbfa1蛋白和mRNA在矿化期牙胚中的表达及特点.结果 Cbfa1蛋白在前期牙本质和牙槽骨中表达;Cbfa1 mRNA表达较为广泛,不仅在前期牙本质和牙槽骨、成骨细胞中强阳性表达,还在多种软组织中表达,如牙囊细胞,牙髓细胞,中间层细胞,星网状层细胞中均可见Cbfa1 mRNA表达;但在成牙本质细胞、成釉细胞和牙本质中,Cbfa1 mRNA和蛋白均未见表达.结论 Cbfa1与矿化期牙胚的发育密切相关,对不同的组织细胞发挥特异性的调控作用.Cbfa1可能对早期牙槽骨和前期牙本质的形成及矿化启动具有重要作用,并参与调控牙囊细胞、牙髓细胞等的分化及星网状层细胞和中间层细胞等的相互作用,但是对此期的成矛本质细胞、成釉细胞及已经形成的牙本质,Cbfa1的作用可能不明显.
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儿童脑血管畸形的影像学诊断
小儿脑血管畸形是一种先天性疾病,是脑的牙胚血管组织在发育分化过程中出现形态变异,引起脑局部血管数量和(或)结构异常,并对正常脑血流产生影响的一组疾病.随着影像检查技术的发展,特别是磁共振成像(MRI)的广泛应用,可精确区分不同类型的脑血管病,进而提高了小儿脑血管病的检出率.
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帽状期成釉器重建体外模型的建立
目的:建立帽状期成釉器体外重建模型.方法:取胚14 d小鼠下颌第一磨牙帽状期牙胚,在体外利用胰蛋白酶解离后的混合成牙上皮细胞与间充质进行重组培养.结果:培养24 h,混合成牙上皮开始重建至蕾状期,48～72 h原发釉结节形成,96 h牙尖开始形成,144 h成釉器发育进入钟状期.结论:帽状期混合成牙上皮细胞与间充质重组培养后成釉器获得迅速重建,牙齿发育得以继续进行.
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Shh、Ptch1及Ptch2基因在小鼠磨牙发育过程中的表达
目的 通过原位杂交的方法研究Sonic Hedgehog(Shh)、Patehed1(Pteh1)及Patched2(Ptch2)在小鼠下颌磨牙发育过程中的表达,以探讨该信号通路在牙胚发育中的作用.方法 制备小鼠下颌第一磨牙发育各期标本,原位杂交检测Shh、Ptch1及Ptch2的表达部位及强度.结果 Shh在帽状期表达于釉结,钟状早期表达于内釉上皮,钟状晚期表达于成釉细胞;Ptch1在帽状期表达于牙囊、外釉上皮及星网状层,钟状早期表达于牙囊、外釉上皮及牙乳头,钟状晚期表达于成牙本质细胞及牙乳头;Ptch2在帽状期表达于釉结,钟状早期表达于内釉上皮,钟状晚期无表达.结论 Shh信号系统在牙胚发育各期有各自的表达特点,提示可能在牙胚形态的调控,成釉细胞、成牙本质细胞分化的诱导中起重要作用.
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骨形成蛋白信号转导与成牙本质细胞分化
骨形成蛋白在牙胚发育过程中发挥重要的作用,参与调控成牙本质细胞分化和牙本质形成.本文就骨形成蛋白与成牙本质细胞分化的分子机制相关的研究进展作一综述.
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乙酰基亚硝基脲对体外培养小鼠牙胚的作用研究
目的:观察化学致畸、致癌物乙酰基亚硝基脲(ethylnitrosourea,ENU)对体外培养牙胚发育、分化的影响.方法:通过体外牙胚器官培养模型观察培养液中不同浓度的ENU对17天胎龄的小鼠下颌第一磨牙牙胚形态发育的影响.结果:牙胚培养6天后,在含10%小牛血清的BGJb培养液中,牙胚的内釉上皮细胞分化为成釉细胞并分泌牙釉质基质,而其下方的牙乳头细胞分化为成牙本质细胞并分泌前期牙本质.当BGJb培养液中含0.025%ENU时,牙胚成釉器的星网层发生液化、囊性变.当BGJb培养液中含0.05%ENU时,牙胚发育受到抑制,其完整性被破坏,部分细胞溶解坏死.结论:一定量的ENU可使发育中的牙胚发生囊肿样变,过量的ENU对发育中的牙胚产生毒性作用.
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牙胚微环境对皮肤真皮多能干细胞特性的影响
目的:研究皮肤真皮多能干细胞诱导后成牙分化的可行性,以期为组织工程再生牙齿探寻一种可靠的成体干细胞.方法:使用大鼠胚胎期发育牙胚制备条件培养基,诱导皮肤真皮多能干细胞分化,检测诱导后细胞增殖变化、矿化能力以及体外检测基因表达和细胞表型.结果:大鼠胚胎期发育牙胚细胞条件培养基诱导皮肤真皮多能干细胞后,皮肤真皮多能干细胞增殖加快、矿化能力增强,同时,诱导组细胞中可检测到ALP、OCN、BSP mRNA以及DSP和DMP-1mRNA的表达,进一步细胞表型分析显示,诱导组皮肤真皮多能干细胞表达DSP、DMP-1以及ALP阳性.结论:利用发育早期牙胚细胞分泌的信号分子在体外模拟牙胚发育的微环境,使得皮肤真皮多能干细胞实现了向牙源性间充质细胞方向的表型转化.
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Shh及其受体Ptc1、Ptc2在鼠帽状期磨牙的基因表达
目的 观察信号分子Sonic Hedgeho g(Shh)及其受体P tc1、Ptc2在小鼠下颌第一磨牙帽状期的基因表达，以探讨Shh信号路径在牙胚形态发育早期 的作用。方法 制备昆明小鼠磨牙形态发育早期标本（E 10.5～E 15 .5），常规HE染色观察组织形态。免疫组化SP法对增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）进行定位研究。原位杂交法分析Shh、Ptc1、Ptc2 mRNA在牙胚中的 表达与分布。结果 E 14.5, 内、外釉上皮，星网状层及牙乳头 细胞PCNA阳性，大部分釉结细胞PCNA阴性，少量釉结细胞PCNA阳性。Shh、Ptc1、 Ptc2 mRN A在内、外釉上皮、星网状层及釉结中均有表达。结论 在帽状期 ，信号分子Shh可能经自分泌或旁分泌途径作用于釉结以外的上皮和间充质，促进其增殖。
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用Western Blot和原位杂交法研究Shh在小鼠牙胚钟状晚期的表达
目的从形态学和半定量分析两方面研究Shh(Sonic Hedghog)基因在小鼠牙胚钟状晚期的表达,探讨Shh在牙胚钟状晚期的生物学作用.方法取出生后1、2、3、5和7 d(P1,P2,P3,P5,P7)的Bal b/c纯系小鼠牙胚,用Western印迹方法检测Shh的表达量;原位杂交检测Shh在出生后1 d和3 d天乳鼠牙胚中的表达部位与强度.结果钟状晚期Shh特异表达于成釉细胞层,其强度随出生天数增加而减弱;随着成釉细胞发育成熟,44 500 Shh表达量逐渐降低,P1的吸光光度值为P7的5.5倍.P1,P2与P3可检测出活性Shh-N片段.结论Shh在钟状晚期特异地表达于成釉细胞层,其表达量与成釉细胞的功能状态有关.
关键词： 基因表达 牙胚 发育 Sonic hedgehog -
同源盒基因Msx-1、Msx-2和Dlx-2在小鼠下颌第一磨牙发育阶段的表达
目的观察同源盒基因Msx-1、Msx-2和Dlx-2 mRNA在小鼠下颌第一磨牙发育阶段的表达.方法取胎龄E11～E18和新生P1～P3小鼠的头或下颌,制备5 μm连续冠状切片.体外转录合成地高辛标记的Msx-1、Msx-2和Dlx-2 RNA探针.原位杂交后观察Msx-1、Msx-2和Dlx-2在小鼠下颌第一磨牙中的表达.结果在牙胚发育过程中,Msx-1转录信号始终只在间质细胞中观察到,在上皮细胞中呈阴性.Msx-2和Dlx-2在牙源性上皮和间质中均表达,在磨牙发育起始期二者表达相似,但在随后的牙胚发育过程中,它们出现不同的表达特征.结论牙胚发育过程中,Msx-1、Msx-2和Dlx-2有不同的表达特征,可能共同参与调控上皮和间质间的相互作用.
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大鼠牙齿发育过程中骨涎蛋白和骨桥蛋白的表达
目的 探讨骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)在大鼠牙齿发育中的时间和空间分布特点,及两者在矿化中的作用.方法用免疫组化方法检测了SD大鼠出生后1 d及1、2、3、5、8周的牙胚和颌骨中BSP及OPN的表达特点.结果成熟的成釉细胞、成牙本质细胞、成牙骨质细胞和成骨细胞及基质中均表达BSP和OPN.牙骨质和牙槽骨中BSP和OPN的表达高于牙釉质和牙本质.在牙骨质和牙槽骨中,BSP在未矿化的基质和已矿化的基质中均有高表达,而OPN仅在矿化的前沿和新生线处有高表达.结论 BSP和OPN在大鼠牙齿及颌骨的形成和矿化中具有重要作用,尤其是OPN与牙釉质的形成也有重要关系.BSP和OPN的表达特点不同,提示二者在矿化组织的形成和矿化中的作用不同.
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小鼠成釉蛋白基因cDNA全序列的克隆
目的筛选与小鼠牙胚发育相关的特异基因. 方法利用随机引物、反转录酶合成特异和非特异探针, 采用差异显示方法筛选小鼠牙胚cDNA文库,挑选阳性克隆并测序. 结果得到6个阳性克隆, 经测序证实其中1个克隆序列与大鼠成釉蛋白序 列高度同源:其中用pTriplEX 3′引物测得的526个碱基序列与大鼠成釉蛋白基因5′端的32 -580序列有497个碱基一致,5′引物测得的567个碱基序列与大鼠成釉蛋白基因3′端的128 5-1854序列有533个碱基一致.结论筛选到小鼠釉基质特异蛋白--成釉蛋白基因的cDNA全序列.
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基质小泡在牙胚及颅面骨矿化组织发育中的作用
目的 进一步深入了解基质小泡(matrix vesicles,MVs)在生物硬组织矿化中的作用.方法 应用透射电子显微镜(TEM)观察Wistar大鼠牙胚、颅骨和颌骨矿化过程中MVs的超微结构.结果 ①MVs是由分泌型成骨细胞、成牙本质细胞及其突起芽生进入胶原基质;②MVs在细胞外胶原基质中有一个逐渐成熟的过程,并以羟基磷灰石(hydroxyapatite,HAP)晶体的出现为其主要特征;③HAP在MVs内形成、增多,终进入胶原基质并进一步沉积、钙化;④部分胶原原纤维表面沉积的HAP 晶体与MVs分泌的晶体有明显的移形迹象.结论 MVs在生物硬组织矿化中有重要作用;成熟胶原原纤维特定的排列方式可能为矿化的进一步形成创造良好的环境,并提供一个晶体生长的模板.
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转化生长因子β1 mRNA在鼠磨牙形态发生过程中表达的研究
目的探讨转化生长因子β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1） mRNA在鼠磨牙形态发生过程中的表达及其意义。方法制备鼠磨牙各发育阶段标本，用原位杂交法分析TGF-β1 mRNA在牙胚中的表达与分布。结果 TGF-β1 mRNA在鼠磨牙形态发生过程中以时间和空间上特异的模式来表达。TGF-β1 mRNA在成釉细胞层和牙乳头细胞中很丰富，TGF-β1在成牙本质细胞和成釉细胞层的表达随这些细胞的分化程度而增高。结论 TGF-β1在牙形成过程中通过旁分泌和自分泌机制发挥重要作用。
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BMP2在成釉细胞瘤中的表达及成熟肽片断的基因克隆
成釉细胞瘤是较常见的一种牙源性的肿瘤,目前普遍认为其来源于胚胎发育时期的成釉器,肿瘤性的成釉上皮过度增生且失去其诱导硬组织形成的活性.骨形成蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)在牙胚成釉器中有较高表达并诱导间充质细胞向成釉上皮分化,是牙釉质和牙本质形成过程中的重要因素之一.我们检测了成釉细胞瘤中的BMP的表达及作用,研究成釉细胞瘤丧失其成骨性的病理发生机制.
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富含亮氨酸的间质蛋白多糖在小鼠牙周组织发育中的组织学定位
目的研究富含亮氨酸的蛋白多糖类物质:纤维调节素(FMN)、核心蛋白聚糖(DCN)及双糖链蛋白聚糖(BGN)在小鼠牙周组织不同发育时期的分布特点,探讨其在牙周组织发育中的作用.方法取出生后第5、10、15、25天的BALB/c小鼠36只,引颈处死,解剖并分离含下颌第一磨牙区的下颌骨,新鲜配制4%多聚甲醛固定24 h,甲酸-甲酸钠复合脱钙液脱钙1～3周,常规石蜡包埋,近远中向5 μm连续切片.免疫组织化学Power VisionTM二步法,观察各发育时期第一磨牙牙周组织中3种间质蛋白多糖的组织学分布特点.结果 FMN在牙龈结缔组织和牙周膜中呈强阳性表达,且在牙周膜与牙骨质及牙槽骨界面有较强表达;DCN强阳性表达于牙龈结缔组织、靠近牙槽骨面的牙周膜及牙槽骨表面的成骨细胞中;BGN则在各期牙龈结缔组织及牙周膜中表达,在牙槽骨表面及成骨细胞中为阴性.结论 FMN可能与DCN及BGN相互作用,调节牙龈结缔组织及牙周膜胶原纤维的网络形成,并可能参与牙槽骨和牙骨质的矿化过程.
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先天性颌间闭锁征一例
先天性颌间组织闭锁较罕见,现将我们遇到的1例报告如下.患者男性,出生2 d.出生时发现无法张口,身体发育在正常范围.足月顺产,父母非近亲婚配,母亲孕期正常,无外伤及精神创伤和服药史.家族中无类似病史.检查:全身一般情况尚好,心、肺未闻及病理性杂音,肝脾未触及.因无法进食,呈脱水状态.面下1/3短小,口裂大小正常,上下唇正常,口腔前庭存在,但上下颌牙龈融合为一体,上下牙槽突、颌骨存在,下颌骨较健康婴儿短小,薄弱.固有口腔无法探及.X线显示上下颌骨发育不良,未见牙胚.身体其他部位骨骼发育正常.临床诊断:先天性颌闭锁.
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釉蛋白在大鼠牙胚发育过程中的转录表达
目的观察釉蛋白在大鼠牙胚发育过程中的转录表达,为进一步研究釉蛋白的生物学功能提供基础.方法采用原位杂交方法,检测出生后1、3、7、10、14 d龄大鼠第一磨牙牙胚中釉蛋白mRNA的表达.结果大鼠出生后1～10 d在成釉细胞和成牙本质细胞中均检测到釉蛋白mRNA的表达.在成釉细胞中的表达随细胞的分化、基质分泌具有规律性,1 d已有微弱表达,3 d表达增强,7 d达到强,10 d减弱, 14 d为阴性.釉蛋白mRNA在成牙本质细胞中的表达1 d很微弱,14 d阴性,3～10 d为持续的中等强度的表达.结论釉蛋白在成釉细胞中的转录表达从前成釉细胞一直持续到成熟期,至牙冠硬组织发育完全时中止.成牙本质细胞也表达釉蛋白基因,提示釉蛋白可能参与早期罩牙本质的形成.
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转录调节因子LMO4在牙胚发育中的基因表达
目的观察转录调节因子LMO4在鼠磨牙牙胚形态发生中的基因表达,并与Shh信号分子的基因表达进行比较.方法制备昆明小鼠磨牙形态发育各期标本(E11.5～P1.5), whole-mount 原位杂交分析 LMO4 mRNA 在鼠胚中的表达与分布.切片原位杂交分析LMO4 及 Shh mRNA 在牙胚中的表达与分布.用免疫组化SP法对增殖细胞核抗原(PCNA)进行定位研究.结果 whole-mount 原位杂交发现,在E11.5, LMO4 mRNA在上下颌突、肢芽、脑、表皮和体节中呈阳性表达.切片原位杂交发现, E13.5～E16.5, LMO4 mRNA 分别在牙蕾上皮、成釉器两侧尖部和颈环处呈阳性表达,Shh mRNA表达于釉结; E18.5～P1.5, LMO4 mRNA 在成釉细胞层和中间层呈阳性表达.免疫组化染色发现,E13.5～E16.5,部分牙蕾上皮及颈环处细胞PCNA阳性,恰与LMO4基因表达部位重合.结论 LMO4在牙胚形态发生中呈时空特异性表达并且局限表达于上皮来源的组织.LMO4与Shh信号分子表达范围邻近,在牙胚发育早期可能调控细胞增殖,晚期可能参与成釉细胞的分化.
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诞生牙1例
诞生牙是婴儿出生时即存在的牙齿,在临床上比较少见,其发生率国内外报道不一[1-3],多数认为1∶2000 ～ 1∶3000.近期笔者接诊1例,现报道如下.病例患儿,女,50 d,家长诉出生时见下颌有牙,近来舌头溃烂不愈.检查:右下乳切牙切缘暴露约0.7 mm,无松动;左下乳切牙切缘微露;相对右下乳切牙之舌尖腹部可见1个大小约0.3 mm × 0.4 mm的溃疡,边缘发白、微隆,中央凹陷、糜烂,无出血,见图1.X线片见下颌乳中切牙牙冠已形成,但钙化程度低,牙根尚未发育,下端无牙胚,旁边牙槽骨内可见乳侧切牙和乳尖牙牙胚,见图2.
