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微透析法进行芎冰喷雾剂鼻腔给药的脑内药动学研究
目的:测定芎冰喷雾剂经鼻腔给药后主要成分磷酸川芎嗪(TMPP)在大鼠脑内的药代动力学参数.方法:大鼠鼻腔或静脉注射给予芎冰喷雾剂后,利用微透析技术进行脑内药动学研究,高效液相色谱法测定透析液样品中TMPP的浓度,用Das2.0药动学软件计算主要药动学参数.结果:鼻腔给药和静注给药后TMPP在脑内的吸收均符合一室模型,芎冰喷雾剂鼻腔给药与静注给药TMPP都迅速进入脑内达到峰浓度,鼻腔给药TMPP在脑内的停留时间更长.结论:微透析法能较好的反映芎冰喷雾剂鼻腔给药后TMPP的药动学特征,鼻腔给药是治疗缺血性脑血管机能不全急性期的一种速效途径.
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不同压敏胶基质对小儿清热宣肺贴释药速率和透皮吸收的影响
目的 考察不同压敏胶基质对小儿清热宣肺贴中有效成分释放速率和微透析累积透过率的影响,测定其释药和透皮性能,为小儿清热宣肺贴优选出适宜的基质.方法采用HPLC测定0.5～8 h苦杏仁苷的累积溶出量和给药8 h苦杏仁苷微透析累积透过量,比较不同压敏胶基质对小儿清热宣肺贴中有效成分释放速率和透皮吸收的影响.结果小儿清热宣肺凝胶基质贴溶出8 h时苦杏仁苷基本完全释放,中分子量聚异丁烯基质贴溶出8 h时苦杏仁苷溶出度约为10％,高分子量聚异丁烯基质贴在此时间段内未检测到苦杏仁苷的释放.凝胶基质贴给药8 h苦杏仁苷微透析累积透过量为(29.13±3.09)％,中分子量聚异丁烯基质贴在此时间段内微透析累积透过量为0.结论水凝胶基质有利于药物有效成分的释放和透皮吸收,更适合用作小儿清热宣肺贴的基质.
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天智颗粒对叠氮钠诱导脑损伤大鼠纹状体细胞外乙酰胆碱和儿茶酚胺含量的影响
目的:观察天智颗粒(TZ)对脑线粒体损伤大鼠纹状体细胞外乙酰胆碱(ACh)和儿茶酚胺类递质的影响,探讨促智中药TZ的神经保护作用机理.方法:应用微透析技术和高效液相色谱相结合,建立清醒自由活动大鼠脑内灌流叠氮钠(NaN3)造成局部脑区线粒体能量代谢障碍的急性模型,动态监测TZ对叠氮钠灌流大鼠脑细胞外ACh、胆碱(Ch)和儿茶酚胺类递质水平的影响.结果:NaN3灌流后,大鼠纹状体细胞外ACh、去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)、多巴胺(DA)、3,4-二羟基苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)水平均显著下降(P＜0.05～0.01),Ch水平则明显升高(P＜0.01);停止NaN3灌流后,各递质水平逐渐恢复.TZ可延缓叠氮钠灌流大鼠脑内ACh水平的降低;促进Ch水平的恢复;与都可喜合用升高叠氮钠灌流大鼠ACh水平的作用显著优于单用TZ或都可喜.TZ还有延缓儿茶酚胺类递质水平降低和促进其恢复的趋势,与都可喜合用可促进DOPAC水平的恢复,对DA的代谢异常具有积极的调节作用.结论:TZ对线粒体损伤,能量代谢障碍引起的胆碱能神经系统的损伤具有保护作用,并与都可喜有协同作用;对肾上腺素能、多巴胺能神经系统的损伤,TZ也有保护的趋势.
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利用微透析技术进行青藤碱贴剂的生物等效性研究
目的:研究不同制剂工艺的青藤碱凝胶贴剂的生物等效性,探讨微透析技术在生物等效性研究中的可行性和优越性.方法:以不同工艺制备青藤碱的普通凝胶贴剂和脂质体凝胶贴剂,以裸鼠为实验动物进行经皮给药后,分别采用组织匀浆法及微透析法对青藤碱的体内药量的进行测定.结果:组织匀浆法的测定结果显示出经过20 h以上的时间后,脂质体凝胶贴剂比普通凝胶贴剂具有更高的皮肤局部剩余药量;而微透析法的检测结果则显示出在整个测定过程中,脂质体凝胶贴剂比普通凝胶贴剂具有更高的皮肤局部瞬间药量,且皮肤局部药时曲线与国际上报道的大多数经皮吸收情况相符.结论:青藤碱的脂质体凝胶贴剂比普通凝胶贴剂具有更高的局部生物利用度,且脂质体可能存在贮库效应;微透析技术可用于制剂的生物利用度及生物等效性研究.
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大鼠脑纹状体微透析法研究天王补心方剂中桔梗的应用与抑制性神经递质变化的相关性
目的:研究天王补心丸对大鼠脑内氨基酸类神经递质的影响,来探讨该药的安神作用机制.方法:利用微透析技术从给药大鼠脑纹状体取样,利用邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生反相高效液相色谱法结合荧光检测器测定标准晶和样品中抑制性氨基酸(甘氨酸、γ-氨基丁酸)的含量并进行统计分析.结果:全方组、桔梗+酸枣仁组给药后大鼠纹状体区细胞外液中兴奋性氨基酸含量变化不明显,而抑制性氨基酸GABA和Gly含量均有所增加.结论:本方法具有快速、准确、灵敏度高、稳定性好等优点,适用于脑组织中微量氨基酸类神经递质的测定.桔梗对大鼠脑中抑制性神经递质有明显的影响.
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桔梗与氯丙嗪伍用对大鼠脑纹状体多巴胺的影响
目的:研究桔梗与氯丙嗪联合应用对大鼠脑纹状体单胺类神经递质多巴胺的影响,探讨中西药配伍应用后可能发生的药物相互作用与机制.方法:大鼠随机分成4组:生理盐水组、桔梗(生药15.2 g·kg~(-1)·d~(-1))单独给药组、氯丙嗪(20mg·kg~(-1)·d~(-1))单独给药组、氯丙嗪与桔梗(20 mg·kg~(-1)·d~(-1)+15.2 g·kg~(-1)·d~(-1))合并给药组,每组6只,给药10 d后,利用微透析法在大鼠脑纹状体取样,HPLC检测透析液中多巴胺水平.结果:药后140 min(取样点80 min)时,氯丙嗪+桔梗组中多巴胺水平(1.52±0.34)μg-L~(-1)显著高于氯丙嗪组(1.25±0.22)μg·L~(-1)(P<0.05)和生理盐水组(1.06±0.24)μg·L~(-1)(P<0.01).结论:桔梗与氯丙嗪合用后大鼠脑内多巴胺水平升高,治疗时同时给予桔梗,可以减少氯丙嗪的用量,达到保持疗效,降低其不良反应的目的.
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天麻钩藤方对自由活动大鼠脑缺血海马细胞外液递质氨基酸的影响
目的:观察天麻钩藤方(天钩方)对不完全脑缺血清醒自由活动大鼠海马细胞外液递质氨基酸的影响.方法:用CMA微透析采样系统收集双侧颈总动脉结扎和放松引起的清醒自由活动大鼠不完全缺血前、缺血期间及再灌后大鼠海马细胞外透析液;用高效液相色谱-电化学法测定透析液中谷氨酸(Glu)、牛磺酸(Tau)、精氨酸(Arg)、γ-氨基丁酸(GABA)和半胱氨酸(Cys)的浓度.结果:天钩方中剂量组可升高正常大鼠脑海马细胞外液GABA和Tau的浓度.与模型组比较,大鼠不完全缺血120 min时,天钩方中和大剂量组的Glu水平分别降低了38.64%和31.35%,Tau升高了13.99%和12.86% ,GABA升高了25.89%和33.99%,Cys降低了40.93%和42.08%,Arg升高了16.95%和8.96%;再灌120 min时,天钩方中和大剂量组的Glu的水平分别降低了14.55%和11.48%,Tau升高了16.13%和14.03%,GABA升高了24.41%和26.22%.结论:天钩方能增加正常大鼠海马细胞外液中抑制性氨基酸的浓度,抑制缺血再灌引起的兴奋性氨基酸的过度释放,增加Arg和抑制性氨基酸的浓度,从而发挥神经保护作用.
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自由活动大鼠颈静脉微透析法研究丹参素的药动学参数
目的:应用自由活动大鼠颈静脉微透析实验技术研究丹参素在大鼠体内的药代动力学参数.方法:10只SD大鼠随机分为2组,每组5只,在右颈外静脉植人微透析导管,术后恢复3 d.从导管将微透析探针插入上腔静脉并平衡30 min后,按40mg·kg~(-1)单剂量静脉注射或灌胃丹参素后采集透析液,用HPLC紫外检测器分析透析液中丹参素的含量,换算成血药浓度,并计算药动学参数.结果:静脉注射组丹参的药动学参数:终末段消除半衰期t_(1/2zeta)为(69.62±33.42) min,药-时曲线下面积AUC_(0-∞)(3416.24±779.80)mg·min~(-1)·L~(-1),平均滞留时间MRT_(0-∞)为(38.15±8.61) min.灌胃组相应的药动学参数:C_(max)为(7.42±3.08) mg·L~(-1),t_(max)为(31.50±8.57) min,t_(1/2zeta)为(83.25±37.35) min,AUC_(0-∞)(793.19±101.32) mg·min_(-1)·L_(-1),MRT_(0-∞)为(125.89±58.270)min;生物利用度F为22.56%.结论:自由活动大鼠颈静脉微透析技术结合高效液相色谱分析可有效分析丹参素血药浓度,获得药-时曲线,提示该技术较适合于采用小动物对长时程连续用药中药活性成分进行药动学研究.
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金铃子散不同配比方对大鼠肝药酶CYP1A2活性的影响
目的:通过比较金铃子散不同配比方对大鼠肝药酶CYPI A2活性的影响,探讨其配伍规律.方法:按L9(34)正交表,设计9个不同配比组方.体外实验采用大鼠肝药酶孵育体系,测定不同配比方对CYP1 A2的半数抑制浓度(IC50)；体内实验采用大鼠口服金铃子散不同配比方5d后注射探针药物非那西丁,通过微透析探针采集肝脏部位样品,HPLC测定非那西丁及其代谢物对乙酰氨基酚浓度,winNonlin软件统计拟合药代参数.结果:川楝子、延胡索单味提取物和配比方1～9对肝药酶CYP1A2的IC50分别为(0.025 2±0.005 2),(0.012 1±0.007 9),(0.091 9±0.015 0),(0.071 9±0.005 3),(0.028 2±0.004 5),(0.075 4±0.015 5),(0.062 8±0.003 3),(0.091 9±0.015 0),(0.197 6±0.027 3),(0.159 1±0.008 1),(0.131 1±0.008 5)g· L-1,无显著抑制酶CYP1 A2活性.体内实验,药代参数显示金铃子散不同配比方均能诱导CYP1 A2活性,影响酶活性强弱顺序是:诱导剂组(方3)＞方4(方5)＞方9(方6,方1,方2,方8,川楝子,延胡索组)＞方7＞正常对照组.结论:金铃子散不同配比方对肝药酶CYP1 A2活性有诱导作用,且诱导作用的强弱与配比有一定的相关性.
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牛黄、唑吡坦单用及合用对大鼠脑纹状体中2种抑制性氨基酸递质含量的影响
目的:探索中药牛黄及西药唑吡坦单用或合用与脑内2种抑制性氨基酸递质变化的相关性.方法:利用微透析技术从给药大鼠脑纹状体中取样,运用邻苯二甲醛(0PA)柱前衍生反相高效液相色谱法,结合荧光检测器检测对照品和样品中2种抑制性氨基酸递质甘氨酸(Gly)、γ-氨基丁酸(GABA)的含量并进行统计分析.结果:与生理盐水组相比,牛黄组脑纹状体透析液中GABA的含量极显著增高(P<0.01);唑吡坦组GABA的含量也显著增高(P<0.05);牛黄与唑吡坦合用组CABA的含量同样显著增高(P<0.05);牛黄组GABA的含量高于合用药组(P<0.05),唑吡坦组GABA的含量与合用组没有显著性差异.单用牛黄或单用唑吡坦与生理盐水组、联合用药组相比,Gly的含量均显著增高(P<0.05).结论:牛黄单独用药组、唑吡坦单独用药组和2药合用组大鼠脑纹状体透析液中2种抑制性氨基酸递质均显著增高,且单独给药组较联合用药组增高幅度大.表明牛黄与唑吡坦合用后,2种抑制性氨基酸递质末呈现加强效应,推测其可能作用机制是二者竞争同一受体.因此,在临床镇静治疗环节中主含牛黄的中成药与唑吡坦类两药合用没有重要意义,同时也验证了牛黄不作为开窍药使用的中医理论的正确性.
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稳定同位素内标微透析技术用于尼古丁的药动学研究
目的:利用稳定同位素内标微透析采样技术,建立尼古丁(nicotine)经皮制剂的整体及大脑局部的药物动力学研究方法.方法:实验动物为健康大鼠,尼古丁贴剂以腹部经皮吸收的方式给药后,氘代尼古丁(DL-nicotine)作为微透析的内标物,同时进行血液及脑部的微透析采样.样品采用LC-MS/MS检测.结果:大鼠血液和脑部尼古丁的配置过程符合二室模型,其巾血液的t1/2α为29.38min,t1/2β为208.51min,AUC0-∞为152127.10μg·min·L-1;脑部的t1/2α为86.64min,t1/2β为386.00min,AUC0-∞为152820.90μg·min·L-1；两者的tmax均为140min.结论:氘代尼古丁可作为尼古丁的内标物进行探针同收率的校正；稳定同位素内标微透析技术可用于尼古丁经皮给药的整体和局部药动学研究,为新型给药系统的体内过程研究提供了新的思路和研究方法.
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微透析技术在医药领域的应用
参考近期文献,综述了微透析技术在神经药理、药代等学科中的应用进展,通过分析其优缺点及与其他分析仪器联用进行检测的特点,展望该技术在中医药研究领域中的应用前景.
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注射用双黄连(冻干)微透析回收率的体外测定方法
目的:以双黄连为模型药物,对微透析技术应用于中药复方药动学研究进行探索.方法:利用反透析法获得透析液,HPLC梯度洗脱测定透析液中待测成分的含量以计算双黄连体外回收率,考察同一成分在不同成分组成的透析媒介中回收率变化情况,并考察浓度、流速对回收率的影响.结果:随着透析媒介中物质数量的增多,特定成分的回收率有下降趋势,但与透析媒介中该成分的浓度无关,在相同浓度下回收率随流速增大而减少.结论:微透析技术可用于中药复方药动学研究.
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在体皮肤微透析法研究制川乌白芍配伍对6种酯型生物碱局部药动学的影响
以小鼠为实验对象,分别给予制川乌凝胶和制川乌-白芍凝胶,生理盐水为灌流液,灌流速度2 μL·min-1,每30 min收集1次,共收集8h.采用HPLC-MS/MS测定制川乌中6种生物碱的含量,并绘制浓度-时间曲线,计算药动学参数并对其参数进行SPSS分析,研究制川乌白芍配伍对制川乌中6种生物碱透皮吸收的影响.结果显示制川乌白芍配伍后,3种单酯型生物碱达峰时间Tmax缩短,同时,苯甲酰乌头原碱和苯甲酰次乌头原碱的Cmax和AUC均增加;而配伍后,3种双酯型生物碱的AUC均降低,且次乌头碱的Tmax延长,Cmax降低.结果表明制川乌白芍配伍促进了单酯型生物碱的经皮渗透,抑制了部分双酯型生物碱的吸收,该研究从经皮转运的角度阐明了制川乌-白芍伍用“增效减毒”的配伍机制,同时也为其他药对配伍机制的研究提供参考.
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丹皮酚、丁香酚、胡椒碱经皮微透析体内外回收率的研究
建立活血止痛膏中有效成分丹皮酚、丁香酚、胡椒碱微透析体内外回收率校正方法,为其经皮药动学研究提供依据.利用高效液相色谱法测定透析液中丹皮酚、丁香酚、胡椒碱的浓度,并计算微透析探针回收率;研究浓度、校正方法对3种成分微透析探针回收率的影响,并考察探针吸附性、体内外回收率的稳定性和重复性.结果表明,以30％乙醇生理盐水作为灌流液时,探针对3种成分均无明显的吸附,短时间内即可从探针上被完全洗脱下来;在8h内,3种成分体内外回收率均能保持稳定;交替用含药溶液和空白灌流液灌流探针3次,3种成分体内外回收率基本不变.不同质量浓度丹皮酚(2.46～53.64 mg·L-1)、丁香酚(4.26～32.15 mg·L-1)和胡椒碱(5.75～45.87 nmg· L-1)体外回收率分别为(45.7±4.66)％,(41.3±3.96)％,(27.82±2.95)％,即3种成分的探针回收率对浓度没有依赖性;在相同条件下,零净通量法、透析法和反透析法所测得的探针体外回收率几乎相等.因此,采集部位药物的浓度可用体外测得的回收率或在体回收率进行校正.同时也证明了该研究建立的微透析方法可用于活血止痛膏的经皮药动学研究.
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线性探针微透析研究阿魏酸经皮给药后药动学
目的:建立线性探针测定阿魏酸皮下浓度方法,考察温度、灌流液流速、浓度对线性探针回收率的影响,研究阿魏酸溶液经皮给药后体内药动学.方法:采用减量法测定阿魏酸线性探针的体内外同收率的稳定性,采用增量法测定体外回收率的影响因素,选择CD-1裸鼠作为实验动物,采用经皮微透析法进行体内药动学研究,HPLC测定透析液中阿魏酸的浓度.结果:温度对阿魏酸体外同收率有显著性影响,随着温度的升高,阿魏酸的体外回收率显著提高,随着流速的增加阿魏酸的体外同收率呈指数下降,在测定范围内,浓度对阿魏酸的体内外回收率无影响,在测定时间内阿魏酸体内外同收率稳定性、重复性良好,体外平均回收率为(24.82±1.01)％；体内平均回收率为(16.50±1.92)％；经皮给药后,阿魏酸86 min达到峰值,平均滞留时间为291 min.结论:线性探针可用于阿魏酸经皮给药的研究；阿魏酸可迅速透过角质层,适宜制成经皮给药制剂.
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川芎提取物经皮给药后体内外相关性的研究
目的:研究川芎提取物有效成分阿魏酸的经皮渗透特性和体内药动学,建立其经皮渗透的体内外相关性.方法:采用Franz扩散池法,以CD-1裸鼠腹皮作为渗透介质,进行体外透皮实验；存CD-1裸鼠腹部植入线性探针,以PBS为灌流液,采用微透析取样法进行体内药动学试验,用HPLC测定接收液、透析液中阿魏酸的含量；采用反卷积分法对体外透皮数据和体内药动学数据进行相关性研究.结果:川芎提取物中阿魏酸的透皮速率为(0.094 4±0.0494) μg·cm2·min,经皮给药后阿魏酸Cmax为808.91μg·L-1,Tmax为183 min.体内外相关系数为93.61.结论:川芎提取物中阿魏酸可快速透过皮肤,利用阿魏酸体内外透皮的相关性,可以采用简单的体外透皮的方法研究其药动学变化.
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UHPLC-MS/MS联用微透析法研究牛膝引栀子苷关节靶向在佐剂性关节炎大鼠体内药动学的影响
建立了UHPLC-MS/MS测定栀子苷(GE)和3种牛膝皂苷成分(姜状三七皂苷R1、人参皂苷Ro、竹节参皂苷Ⅳa)在大鼠关节、血液透析液中药物浓度的分析方法,并应用该法研究牛膝总皂苷-栀子苷(ABS-GE)配伍前后在佐剂性关节炎(AA)大鼠体内的药动学过程,以探讨ABS“引药下行”作用的活性部位.AA大鼠模型单用或联用ABS,GE后,微透析探针植入大鼠关节腔及颈静脉血管中收集样品,采用Waters Acquity HSS C18色谱柱分离,以乙腈-0.1％甲酸水为流动相梯度洗脱,采用电喷雾离子源(ESI),负离子模式扫描,多反应监测模式(MRM)检测上述4种成分.结果显示,大鼠关节及血液透析液中GE、姜状三七皂苷R1、人参皂苷Ro及竹节参皂苷Ⅳa,分别在2～4 000,16～4 096,14～3 584,23～5 888μg·L-1线性良好;上述4种成分精密度、准确度、稳定性及基质效应结果均符合生物样品定量分析要求.ABS与GE联用(60 mg· kg-1+60 mg·kg-1)后,使GE的AUCjoint/AUCplasm达到GE单用(60 mg·kg-1)的2倍,表明ABS可以提高GE向关节腔靶向分布的程度.同时3种牛膝皂苷成分在关节腔的药动学变化趋势与配伍后GE的变化趋势无显著差别.此外,ABS与GE联用后对AA大鼠足爪肿胀、关节炎指数及关节滑膜病理组织的改善作用均强于GE单用.表明ABS对GE具有靶向引导作用,增加GE在关节腔浓度,并在药效上协同增强.
关键词： 牛膝总皂苷 栀子苷 UHPLC-MS/MS 微透析 药动学 -
麻黄汤中9个有效成分的微透析体外回收率研究
在建立同时定量麻黄汤中9个有效成分(麻黄碱、伪麻黄碱、甲基麻黄碱、苦杏仁苷、甘草苷、桂皮醇、桂皮酸、桂皮醛、甘草酸)方法的基础上,测定相应的微透析探针体外回收率,为体内药代动力学研究提供依据.HPLC-DAD检测透析液中9个有效成分浓度,考察探针回收率的日内稳定性以及流速(增量法、减量法)、媒介浓度对回收率的影响.结果9个有效成分在52 min内可以达到良好的分离,当流速为1.0 μL·min-1时,测得麻黄碱、伪麻黄碱、甲基麻黄碱、苦杏仁苷、甘草苷、桂皮醇、桂皮酸、桂皮醛、甘草酸的回收率分别为(50.95 ±0.82)％,(52.74±1.13)％,(51.29±0.51)％,(32.56 ±0.84)％,(45.36±0.83)％,(70.94 ±0.99)％,(69.98±2.30)％,(71.68±0.63)％,(22.14±0.48)％,且探针能在7h内保持稳定.在相同浓度下,探针回收率随流速的增大呈指数下降,除苦杏仁苷、桂皮醛外,其余7个成分2种方法所得回收率在一定流速下相差不大.在相同流速下,桂皮醇、桂皮酸、桂皮醛回收率随浓度变化较大(9.55％～16.2％),其余6个成分变化较小(3.27％～5.71％).表明微透析法可用于麻黄汤中9个成分体外回收率的测定,当流速为2.0 μL·min-1时反透析法可作为麻黄碱、伪麻黄碱、甲基麻黄碱、甘草苷、桂皮醇、桂皮酸和甘草酸体内探针回收率的校正方法.
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MD-HPLC联用研究中药苏合香对西药舒必利脑药和血药浓度的影响
目的:为了观察中药苏合香对联用药西药舒必利血药与药脑浓度的影响,探讨苏合香开窍作用与增加胃肠屏障与血脑屏障透过性的关系,并研究苏合香与舒必利联用的相互作用.方法:大鼠连续口服用药1周后,进行脑部与颈部安装探针手术,平衡1h后,利用血微透析法与脑微透析法分别在(30,60,90,120,150,180 min)各时间段采集大鼠右心房内血液中与脑海马组织中的透析液,利用反相高效液相荧光色谱系统检测样品中舒必利的含量,利用统计学方法比较2组给药后脑中及血液中的舒必利含量.结果:舒必利合用苏合香组的大鼠脑中和血中舒必利浓度明显高于单用舒必利组,单用舒必利组大鼠血中和脑中舒必利的浓度比值为1∶0.2,舒必利与苏合香合用组血脑比增加为1∶0.3,与单用舒必利组相比,舒必利与苏合香合用组的舒必利脑浓度上升39％,血浓度上升69％.结论:苏合香能够明显增加舒必利在大鼠脑中和血中的浓度,说明苏合香能够促进舒必利透过胃肠屏障与血脑屏障,该研究从药理学角度揭示了苏合香“开窍”的机制是促进了胃肠屏障及血脑屏障通透性增加.
