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具核梭杆菌感染KB细胞影响细胞增殖和炎症因子分泌的研究
目的 具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum,F. nucleatum),为革兰氏阴性杆菌,是牙周病的重要致病菌之一.研究发现,牙周病原体感染和口腔癌的发生发展密切相关.因此,本研究通过分析细菌感染对KB细胞增殖和细胞因子分泌的影响,为具核梭杆菌感染和口腔癌症发展之间的关系提供新的证据.方法 建立具核梭杆菌感染KB细胞模型(MOI=10和100),透射电镜观察细胞和细菌形态变化,PI单染流式细胞术检测细胞周期,ELISA检测上清液中IL-6和IL-8细胞因子分泌水平.结果 透射电镜观察发现,4 h具核梭杆菌侵入细胞,细菌在细胞内保持完整形态,细胞与细胞之间紧密连接破坏.感染24 h后,细胞内仍能发现细菌,菌体被膜状结构包绕,并保持完整形态.低浓度具核梭杆菌(MOI=10)感染KB细胞,细胞周期G1期进程在感染早期加速,细胞增殖率没有显著变化(P> 0.05).高浓度具核梭杆菌(MOI=100)感染KB细胞,细胞周期S期4 h至8 h细胞数增多,同时促进细胞增殖;感染24 h后抑制G1期进程,S期细胞显著减少,从而抑制细胞增殖(P<0.05).上清液中IL-6和IL-8细胞因子分泌水平均升高,并对具核梭杆菌感染的时间和浓度存在依赖性.结论 具核梭杆菌感染口腔癌细胞可能通过影响细胞增殖和细胞周期进程,促进细胞炎症反应从而加重癌细胞恶性程度.
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五倍子对牙周可疑致病菌蛋白酶和糖苷酶活性的抑制作用
目的体外观察五倍子水提取物对牙周可疑致病菌胞外酶(蛋白水解酶和糖苷酶)活性的影响.方法应用荧光分光光度计检测荧光底物的降解来测定酶活力.结果除中间普菌的L-arginine-arylamidase活性不受五倍子的影响外,浓度0.05%～0.10%的五倍子可以抑制所测其他细菌≥50%胞外酶底物的降解.结论五倍子水提取物可有效抑制牙周可疑致病菌蛋白水解酶和糖苷酶活性,其抑制作用可能会阻碍细菌生长,降低细菌毒力,减缓牙菌斑的形成.
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具核梭杆菌与大肠癌关系的研究进展
牙周炎与全身健康和疾病关系密切.近年来,牙周炎与大肠癌(colorectal cancer,CRC)发生发展的关系已引起越来越多学者的关注.具核梭杆菌是牙周炎重要的致病菌之一,其感染可能参与了CRC的发生发展,本文拟就其研究进展作一综述.
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具核梭杆菌与肠道肿瘤相关性及机制的研究进展
具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum)是革兰氏阴性专性厌氧菌,与多种感染性疾病密切相关.研究发现,具核梭杆菌在人体肠道内广泛存在,依其黏附和侵袭性产生毒性,并且不同菌株具有不同的毒力.目前,越来越多的实验研究证明,具核梭杆菌与结直肠癌之间存在相关性.具核梭杆菌在结直肠癌发生发展中的作用仍在探索中.
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中草药提取物联合应用锌离子对口臭相关致病菌的体外抑菌效果
目的 评价中草药提取物与锌离子对口臭相关致病菌的体外抑菌效果；探讨其联合应用是否具有协同作用.方法 选用厚朴酚、小檗碱、黄芩素、鞣酸、银杏双黄酮、苦参碱、绿原酸、丹皮酚和甘草酸等9种中草药提取物与锌离子,采用倍比梯度稀释法,分别测定对口臭相关致病菌牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)、具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum,Fn)、牙周有益菌血链球菌(Streptococcussanguis,Ss)的小杀菌浓度值(Minimum Bactericidal Concentration,MBC);采用杯碟法分析筛选出的中草药成分与锌离子联合应用对Pg和Fn的抑制作用.实验数据使用SPSS19.0软件进行单因素方差分析.结果 厚朴酚、小檗碱、绿原酸、银杏双黄酮、锌离子对Pg和Fn抑制效果明显,且对Ss的MBC高于其它两种口臭相关致病菌；厚朴酚与锌离子联合应用组作用于Pg或Fn所形成的抑菌环直径均大于各单独应用组的抑菌环直径(P＜0.05)；小檗碱联合应用锌离子对Fn形成的抑菌环大小与两种成分单独应用时的抑菌环直径之间也存在显著差异(P＜0.05).结论 厚朴酚、小檗碱、绿原酸、银杏双黄酮、锌离子是较为理想的抑菌成分.厚朴酚、小檗碱联合应用锌离子对口臭相关致病菌的抑制具有协同作用.
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新疆维吾尔族粪样中具核梭杆菌水平与2型糖尿病的相关性研究
目的:探索新疆维吾尔族糖耐量正常人群及2型糖尿病患者粪样中具核梭杆菌水平与2型糖尿病的相关性.方法:收集新疆维吾尔族糖耐量正常人群(NGT)及2型糖尿病(T2DM)患者血样和粪便样本,采用16SrDNA实时荧光定量PCR技术检测粪便样本中具核梭杆菌水平;运用Pearson相关分析方法分析该菌水平与两组人群的体质量指数(BMI)、空腹血糖(FBG)、胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)水平的相关性.结果:与维吾尔族糖耐量正常组比较,该民族T2DM组中具核梭杆菌水平显著升高(P =0.011).具核梭杆菌水平与BMI(r=0.335,P=0.049)、TC(r=0.472,P=0.011)、LDL(r=0.368,P=0.029)水平呈正相关.结论:新疆维吾尔族T2DM患者肠道中具核梭杆菌水平可能与该民族T2DM患者的糖脂代谢紊乱密切相关.
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具核梭杆菌灌胃对大鼠肠道菌群的影响
目的 探究具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum)灌胃对健康大鼠肠道菌群的影响.方法 将16只SD雄性大鼠随机分为2组(每组8只),处理组在大鼠第4、5、6、7、8周龄分别用具核梭杆菌灌胃1次,对照组在相同时间点以等量生理盐水灌胃.在大鼠第3、8、12周末收集粪便,提取DNA后通过Illumina Miseq平台进行16S rRNA基因高通量测序.应用蛋白印迹法检测大鼠粪便中针对具核梭杆菌的特异性IgA.结果 第3周时,两组在菌群多样性、主要菌门水平方面的差异无统计学意义.第8周时,处理组菌群多样性明显低于对照组(P=o.o09);处理组的厚壁菌门、变形菌门含量低于对照组,拟杆菌门含量高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).第12周时,处理组菌群多样性明显高于对照组(P=0.021),两组大鼠肠道菌群的主要菌门水平差异无统计学意义.同时,具核梭杆菌灌胃刺激机体产生了特异性IgA.结论 具核梭杆菌通过未定植方式,对肠道菌群产生了影响,并可持续一定时间.具核梭杆菌刺激产生的特异性IgA可能是其不能在肠道定植的原因之一.
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Toll样受体4在具核梭杆菌相关结直肠癌中作用的研究进展
Toll样受体(Toll-like receptor, TLR)4是TLR家族成员之一,在结直肠癌中明显高表达.TLR4已被证实是多种细菌脂多糖的配体,识别脂多糖后激活下游靶分子,介导多种信号转导通路,在结直肠癌的生长、侵袭、转移及免疫逃逸过程中发挥重要作用.目前,病原微生物感染相关结直肠癌的发生、发展机制成为研究的热点.具核梭杆菌是一种革兰阴性厌氧菌,与结直肠癌的发生、发展关系密切.本文就TLR4在具核梭杆菌相关结直肠癌中作用的研究进展作一综述.
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具核梭杆菌通过上调c-Jun表达促进结直肠癌细胞系caco-2的DNA复制
目的 研究具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum,Fn)促进结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞系caco-2 DNA复制,并初步探讨其机制.方法 Fn感染caco-2细胞后,通过EdU检测caco-2细胞DNA复制情况,采用RT-PCR及Western blotting检测c-Jun基因转录和蛋白表达,Western blotting检测细胞增殖相关基因CCND1的表达,利用siRNA敲低c-Jun表达,Western blotting技术检测感染Fn后caco-2细胞CCND1蛋白表达及EdU检测caco-2 DNA复制情况.结果 Fn感染caco-2细胞6 h后,caco-2细胞DNA复制显著增加,c-Jun和Cyclin D1表达量增加,Fn感染并敲低c-Jun后,caco-2细胞DNA复制减少,Cyclin D1蛋白表达量也显著降低.结论 Fn可通过上调c-Jun的表达促进CRC细胞系caco-2的DNA复制.
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固定矫治器对龈沟液内具核梭杆菌变化的影响
目的:探讨正畸过程中固定矫治器对龈沟液内具核梭杆菌变化的影响,分析其在正畸牙龈炎性反应发生发展中的作用.方法:收集济南市口腔医院正畸科就诊患者64例,分别于矫治前后不同时期采集龈沟液标本,采用16SrDNA PCR技术对具核梭杆菌进行检测,分析其与牙龈炎症性反应之间的关系.结果:矫治器戴入的不同时期具核梭杆菌的检出率有一定的变化,其与矫治过程中的牙龈炎性反应可能有一定的关系.结论:固定矫治器对龈沟液内具核梭杆菌的变化有一定的影响,具核梭杆菌与正畸治疗中牙龈炎性反应的发生发展密切相关,正畸医师应高度重视正畸治疗过程中的口腔卫生指导与监督.
关键词： 具核梭杆菌 固定矫治器 牙龈炎性反应 16SrDNA PCR技术 -
具核梭杆菌对牙龈卟啉单胞菌或伴放线聚集杆菌诱导多形核白细胞活性氧生成的影响
目的:探讨与具核梭杆菌(F.nucleatum,Fn)共同感染时,牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis,Pg)或伴放线聚集杆菌(A.actinomycetemcomitans,Aa)对多形核白细胞(PMNs)产生活性氧(ROS)的影响.方法:取健康人抗凝外周血,经Percoll分离后取PMNs,将分离的PMNs与2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)混合,于37℃的水浴箱中孵育15 min,然后分别向管中加入A组和B组细菌(细菌分组:A1,Pg;A2,Aa;A3,Fn;B1,Pg+Fn;B2,Aa+ Fn;B3,Pg+Aa;B4,Pg+ Aa+ Fn;B5,Aa+Pg+Fn),充分混合后于37℃孵育1h和4h,流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)检测PMNs产生ROS的量.结果:不同牙周致病菌与分离的PMNs在37℃作用1h,PMNs生成ROS的量分别是A1-16.52;A2-18.74;A3-19.59;B1-17.60;B2-20.09,其中B1＞ A1;B2＞A2,差异显著(P＜0.05).不同微生物与分离的PMNs在37℃作用4h,PMNs生成ROS的量分别是A1-176.05;A2-203.19;A3-230.36;B1-259.08;B2-274.89,其中B1＞A1;B2＞A2,差异显著(P＜0.05).结论:与Fn共聚后,Pg或Aa诱导PMNs产生ROS的能力被增强.
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响应面法优化IgY抑制具核梭杆菌增殖的研究
目的:利用响应面法研究免疫球蛋白Y(IgY)影响口腔唾液模拟环境中具核梭杆菌(F.nucleatum)的生长繁殖特性,发现F.nucleatum终菌落数与培养时间、F.nucleatum初始接种浓度和IgY剂量的关系.方法:以F.nucleatum终菌落数为评价指标,在单因素试验基础上,设计三因素三水平响应面实验进行优化,通过响应面法对回归方程的分析,得到各因素佳条件,优化后的条件重复试验3次,以验证模型的准确性.结果:以2×106 CFU/mL初始浓度接种F.nucleatum、181 mmol/L剂量给药IgY,培养时间6h得到终菌落数4.52×104CFU/mL,与预测值相对误差小于5％,方差分析表明模型P值显著,缺失值P值不显著,理论值与实测值拟合度良好,优化后F.nucleatum终菌落数显著降低.结论:响应面法优化结果表明IgY能显著抑制口腔唾液模拟环境中具核梭杆菌的增殖,回归模型能够预测IgY影响口腔唾液模拟环境中F.nucleatum增殖的特性.
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具核梭杆菌调控牙龈卟啉单胞菌感染对口腔鳞状细胞癌KB细胞周期和细胞因子分泌的研究
目的:通过研究牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonasgingivalis,P.gingivalis)和具核梭杆菌(Fusobacteriumnucleatum,F.nucleatum)感染对KB细胞的细胞周期和炎症因子分泌的调控,初步探讨牙周细菌感染对口腔鳞状细胞癌进展和炎症反应的影响.方法:建立P.gingivalis和F.nucleatum单独或联合感染KB细胞模型,透射电镜观察细菌感染细胞情况,流式细胞术检测细胞周期变化,酶联免疫法检测IL-6和IL-8蛋白分泌水平.结果:P.gingivalis联合F.nucleatum感染KB细胞8h抑制细胞周期进程,感染24 h后加速细胞周期进程;P.gingivalis联合F.nucleatum感染促进KB细胞分泌IL-6和IL-8,并且有时间和F.nucleatum浓度依赖性.结论:牙周致病菌之间的联合作用更能促进口腔鳞状细胞癌的发展及免疫炎症反应.
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血链球菌细菌素对唾液生物膜中牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌拮抗作用的实验研究
目的:提取血链球菌标准菌株(ATCC10556)细菌素,研究其对唾液生物膜中牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌的拮抗作用.方法:通过超声破碎,高速离心,盐析等方法提取血链球菌细菌素;采用二倍稀释法,测定血链球菌细菌素对浮游状态下牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌的小抑制浓度(MIC);在体外建立牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌唾液生物膜模型,利用激光共聚焦扫描电镜观察该生物膜中细菌活性的变化.结果:血链球菌细菌素对浮游状态下的牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌的MIC为0.5 g/L;使用血链球菌细菌素作用牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌生物膜,活菌百分比显著下降,与对照组相比具有显著性差异(P<0.05).结论:血链球菌细菌素对浮游状态下和生物膜中的牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌生长均有显著的抑制作用.
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10%过氧化氢尿素甘油溶液治疗牙周病的疗效比较
国内外大量微生物学研究证明G厌氧菌是牙周病的主要致病因素.中间类杆菌、产黑色素类杆菌、牙龈炎杆菌、放线菌、具核梭杆菌等在牙周袋内占优势,口服阿莫西林、硝唑类等抗菌药对牙周病的治疗有较好的疗效,但可导致菌群失调,耐药菌的产生等问题,故不宜长时间用于牙周病的治疗,局部用药是目前人们感兴趣的研究方向[1].作者自行配制10%过氧化氢尿素甘油溶液(GOL),作为一种抑菌给氧缓释剂用于临床牙周病的治疗,效果满意,报道如下.
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具核梭杆菌与大肠肿瘤发生发展的研究进展
肠道微生物在大肠肿瘤中的作用受到广泛关注，而作为肠道共生菌群的具核梭杆菌（Fusobacterium nucleatum， Fn）与肠癌发生关系密切，可促进肠癌的发展并影响预后。Fn 与大肠肿瘤发生的临床流行病学以及分子机制研究可为肿瘤防治提供新的思路。本文就近年来对 Fn 影响大肠肿瘤发生发展的研究进行汇总，并对未来研究展望作一概述。
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具核梭杆菌促进食管癌细胞增殖的研究
目的 研究具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum,Fn)对食管癌细胞粘附入侵和增殖的作用,探讨其作用机制.方法 本实验应用具核梭杆菌标准株ATCC 25586与食管癌Eca-109细胞共培养,建立具核梭杆菌与食管癌细胞体外的肿瘤微环境模型.采用细胞免疫组化染色法检测细菌对细胞的粘附入侵能力[3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐]MTT及流式细胞仪检测Eca-109细胞的增殖,酶联免疫吸附试验方法(ELISA)检测观察正常对照组、细菌与细胞共培养模型组的细胞培养液中IL-6的浓度,Western blot检测STAT3和p-STAT3的蛋白表达.结果 具核梭杆菌可粘附和入侵到Eca-109细胞内.与对照组比较,加入具核梭杆菌的实验组作用后第1～4天Eca-109细胞增殖加快,48 h内其细胞培养液内IL-6浓度也是对照组的4倍.Western blot结果显示,与对照组相比,具核梭杆菌处理组p-STAT3蛋白表达增加,STAT3蛋白表达没有明显改变.中和IL-6受体蛋白后,具核梭杆菌处理组p-STAT3、STAT3蛋白表达量均不变.结论 具核梭杆菌通过刺激IL-6的产生促进食管癌细胞的增殖.
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口腔唾液富组蛋白抗菌及中和内毒素活性
唾液构成牙齿和口腔软组织的化学环境,与口腔健康密切相关.现已分离纯化出40多种唾液蛋白,其中发现多种抗菌成分,如溶菌酶、乳铁蛋白、唾液过氧化物酶、分泌型IgA等.新近发现一类小分子阳离子抗菌肽特别引人注目.因其分子富含组氨酸,故称之为富组蛋白(histatins).本文用制备性酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳(AU-PAGE),从健康成人刺激性唾液中分离纯化了3种主要富组蛋白,即HRP-1、-3和-5.经Tricine-SDS-PAGE分析所得分子均为单一条带,说明纯度很高,其分子量3～5 kD.分离纯化富组蛋白的方法很多,本试验采用制备性AU-PAGE分离纯化富组蛋白,具有分辨率高、操作简便、纯化效率好等特点,但该法获得率不太高,有待改进.采用琼脂糖弥散抗菌试验显示3种富组蛋白对变形链球菌和金色葡萄球菌均有抗菌活性;对大肠杆菌和绿脓杆菌,HRP-3和HRP-5有明显抗菌活性,而HRP-1无抗菌活性.其抗菌活性随浓度增高而增大.HRP-3和HRP-5的抗菌活性强于HRP-1.3种主要富组蛋白对革兰氏阴性专性和兼性厌氧的牙周可疑致病杆病,在本检测系统中均未显示抗菌活性.采用Wesphal热酚水法提取牙龈卟啉菌(47-A)和具核梭杆菌临床分离株的LPS,并用酶消化法配合超速离心进行纯化.采用鲎试验试管法观察了HRP-5对LPS的中和作用.结果显示两株菌的LPS在浓度≥1 ng/mL时,均显示较强鲎活性,与标准大肠杆菌LPS的鲎活性相似.HRP-5 (10 μg/mL)对牙龈卟啉菌、具核梭杆菌和大肠杆菌LPS(1 ng/mL)的鲎活性,均具相同的抑制作用.本试验提示唾液富组蛋白可能通过中和牙周可疑致病杆菌的内毒素,在维护牙周健康上发挥一定作用.
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具核梭杆菌感染与结直肠癌的关系
目的：探讨具核梭杆菌（ Fn）感染与结直肠癌（ CRC）的相关性。方法对手术切除、经病理证实的101例CRC组织和配对正常组织进行实时荧光定量PCR（FQ－PCR）检测组织中Fn丰度。随机抽选其中22例CRC和配对正常组织进行荧光原位杂交，验证FQ－PCR的结果，分析Fn的富集度与临床病理指标的相关性。结果两检测方法均证实Fn在CRC组织中富集，CRC组织中Fn丰度显著高于配对正常组织者占87.1％（88／101），CRC组织Fn丰度归一化值为0.242±0.034，显著高于配对正常组织的0.050±0.017（P＝0.000）。 Fn的高丰度与患者的性别、年龄、肿瘤位置、分化程度、浸润程度、Dukes分期等临床病理指标均无显著相关性（ P＞0.05），而与淋巴转移密切相关（ P＜0.05）。结论 Fn在CRC组织中富集，并有可能促进淋巴结转移。
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结直肠癌放疗患者粪便具核梭杆菌变化研究
目的 研究具核梭杆菌在结直肠癌放疗患者中的感染率,以及放疗前后、肿瘤复发后的体内变化情况.方法 经肠镜证实无肠道疾病体检者20例纳入对照组,收集粪便标本.40例结直肠癌患者纳入研究组,术前3 d、术后5 d、术后放疗7 d、放疗30 d均收集粪便标本,随访1年,复发者也收集粪便标本.采用过滤收集菌液沉淀,进行实时荧光定量PCR方法检测粪便标本中的核梭杆菌基因相对表达量.结果 40例结直肠癌患者中粪便具核梭杆菌的阳性率为30.0%,对照组阳性率为5.0%.12例结直肠癌阳性患者在术前3 d、术后5 d、术后放疗7 d、放疗30 d基因相对表达量分别为8.50±0.45、1.20±0.22、5.2±0.34、0.20±0.15.12例Fn阳性患者在术后5 d的Fn基因相对表达量明显高于术前3 d,差异有统计学意义(t=10.419,P=0.001),放疗7 d、放疗30 d的Fn基因相对表达量明显低于术前3 d,差异均有统计学意义(t=12.728,P=0.001;t=25.889,P=0.001).6例患者在手术后1年内复发,Fn基因相对表达量为7.20±0.56,复发时的Fn基因相对表达量较放疗后7 d明显升高,差异有统计学意义(t=14.427,P=0.001).结论 具核梭杆菌感染可能是结直肠癌的高危因素,其基因相对表达量的升高可能作为疾病复发的预警指标.
