军事医学杂志
Military Medical Sciences 군사의학
- 主管单位： 军事医学科学院
- 主办单位： 军事医学科学院
- 影响因子： 0.58
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1674-9960
- 国内刊号： 11-5950/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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HCMV gp52基因的克隆与表达
目的:克隆表达人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)gp52基因,制备特异性抗原,用于HCMV早期诊断.方法:从感染的HCMV细胞上清液中提取病毒的DNA, 用PCR扩增gp52蛋白IgM抗原决定簇编码区DNA片段,并将其克隆到pGEM-Teasy载体测序,然后将其克隆到含有谷胱甘肽转移酶(GST)融合蛋白表达载体pGEX-5X-3中表达,表达产物经GST亲和层析柱纯化后,采用ELISA和免疫印迹(Western blotting)检测重组蛋白的抗原性.结果:经序列测定gp52基因片段的序列正确,并在pGEX-5X-3表达载体中得到了高效表达.表达的融合蛋白用亲和层析柱纯化后经免疫印迹和ELISA分析具有良好的抗原性,能够与HCMV IgM阳性血清呈特异性反应.结论:通过基因工程制备的重组gp52蛋白可作为抗原用于HCMV感染者的早期诊断.
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新分离呼肠病毒BYD1株实验感染食蟹猴动物模型的初步建立
目的:建立新分离呼肠病毒感染食蟹猴动物模型.方法:通过滴鼻和静脉感染两种途径,用从SARS患者分离的呼肠病毒BYD1株感染4只食蟹猴,每天观察体温变化;每组分别在感染后7 d和33 d各处死1只,进行肺脏组织病理学检查和肺脏等脏器的病毒分离.定期采集血清和粪便,分别进行特异性中和抗体的测定和病毒分离.结果:感染猴于接种病毒后的3～4 d均开始出现发热症状,持续4 d,体温高可达40.4℃,退热4 d后又陆续出现第二次发热.感染动物均产生抗呼肠病毒的中和抗体,静脉组抗体滴度高于滴鼻组.从感染动物的肺、心、肝、脾、肾、脑和淋巴组织以及粪便中均分离出呼肠病毒.肺脏组织病理学检查为间质性肺炎.结论:食蟹猴实验感染呼肠病毒BYD1株后,出现发热、免疫应答、病毒血症和间质性肺炎等一系列临床病理学体征,说明食蟹猴可以用作呼肠病毒感染实验动物模型.
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异硫氰酸荧光素掺入法测定mPEG修饰的红细胞半寿期
目的:为甲氧基聚乙二醇(mPEG)包裹改造红细胞制备通用型血实验提供一种简便、可靠、安全无污染的红细胞半寿期测定方法.方法:用异硫氰酸荧光素(FITC)标记、mPEG包裹小鼠红细胞,然后回输到小鼠体内,用流式细胞仪测荧光标记的细胞百分含量,计算红细胞半寿期.结果:mPEG包裹对红细胞膜上异硫氰酸荧光素荧光强度的检测没有影响,异硫氰酸荧光素的衰减也不会影响红细胞半寿期的测定.低剂量的mPEG包裹不影响红细胞的寿命,而高剂量的mPEG包裹会对红细胞产生损伤,使其寿命明显缩短.结论:此方法简便,易操作,安全无污染,是一种可行的测定红细胞半寿期的方法.
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发色底物法定量测定重组u-PA产品的总活性和单链比例
目的:建立一种发色底物酶水解方法定量分析重组尿激酶型纤溶酶原激活剂(u-PA)中的总活性及其单链酶原比例.方法:用嗜热菌蛋白酶激活u-PA转化成具有催化活性的双链尿激酶,再用尿激酶的发色底物S-2444测定u-PA的总活性.在非激活条件下,u-PA产品中的单链酶原不会催化水解S-2444底物,因而可以测定其单链酶原比例.结果:优化了嗜热菌蛋白酶激活u-PA的反应条件和尿激酶催化水解S-2444的反应条件.用这种方法测定了用CHO细胞表达的基因重组u-PA产品,单链比例大于98%,比活性约为11×104 U/mg.结论:用发色底物法测定重组人u-PA产品中的总活性和单链比例具有很好的重复性和准确性.
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恙虫病东方体Karp株主要外膜蛋白基因的克隆与表达
目的:表达恙虫病东方体(Orientia tsutsugamushi)Karp株56?000表面蛋白,探索其作为诊断抗原的可能性.方法:采用PCR方法,从Ot.Karp株菌种基因组DNA中扩增出56 000成熟蛋白基因片段,将该片段克隆于原核表达载体pQE30,构建重组质粒pQE30/56,转化大肠杆菌,经IPTG诱导表达、SDS-PAGE电泳和免疫印迹检测目的蛋白的表达.结果:(1)获得长约1 500 bp的Ot. Karp株56 000外膜蛋白基因;(2)SDS-PAGE电泳和免疫印迹显示该重组质粒转化的大肠杆菌有一相对分子质量约为56?000的独特蛋白带;(3)表达后菌体超声破碎后,目的蛋白主要以包涵体形式存在;(4)重组表达质粒序列分析结果显示,pQE30/56中插入的基因片段的序列与已报道的Ot. Karp株56 000外膜蛋白基因序列基本一致.结论:获得了Ot.Karp 56 000蛋白基因,并在大肠杆菌中实现了表达,表达的重组蛋白具有免疫反应性.
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低氧习服对大鼠血浆内皮素、心房利尿钠肽、C型利尿钠肽和血管紧张素含量的影响
目的:研究急性低氧和低氧习服对大鼠血浆内皮素、血管紧张素、心房利尿钠肽(atrial natriuretic peptide ANP)和C型利尿钠肽(C-type natriuretic peptide,CNP)含量的影响.方法:间断低氧习服大鼠(3 000 m、5 000 m各4 h/d,共2周)和正常大鼠经8 000 m缺氧4 h后,观察其血浆内皮素、血管紧张素、ANP和CNP含量的变化.结果:低氧时大鼠血浆内皮素含量有增加的趋势,低氧对血浆CNP含量无明显影响.急性低氧时大鼠血浆ANP、血管紧张素Ⅰ(AngⅠ)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量显著增高.低氧习服后,ANP和AngⅠ含量显著降低,接近正常水平,AngⅡ含量有下降趋势.结论:大鼠经间断低氧习服后,血浆ANP和AngⅠ含量显著降低,可能是心脏低氧习服的机制之一.
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eIF-5A的亚细胞定位研究
目的:研究eIF-5A的亚细胞定位,为了解其生物学功能提供线索.方法:借助免疫荧光技术和GFP标签技术,用激光共聚焦显微镜检测eIF-5A的亚细胞定位.结果:免疫荧光检测结果表明,eIF-5A定位于细胞质中;GFP-eIF-5A瞬时转染后,起初eIF-5A为全细胞分布,以后逐渐转移到细胞质中.第50位赖氨酸突变为丙氨酸后的eIF-5A则分布于整个细胞.结论:eIF-5A具有核质穿梭功能,它的亚细胞定位是个动态变化过程,hypusine可影响其亚细胞定位,进而可能影响其功能的发挥.
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mpl/G-CSFR融合受体缺失体与突变体的构建
目的:构建mpl/G-CSF融合受体胞内区不同功能域缺失体以及酪氨酸点突变体,并获取稳定转染细胞株,用以研究受体不同区域以及不同酪氨酸的功能.方法:用普通PCR法扩增融合受体短截体,用重叠延伸PCR法和QickChange定点突变法获得融合受体酪氨酸点突变体,并将mpl/G-CSFR全长融合受体转染BaF3细胞.结果与结论:获得mpl/G-CSF融合受体3个短截体和4个点突变体,并筛选到全长融合受体的稳定转染细胞株,为深入研究受体的功能奠定了基础.
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电磁脉冲对记忆的影响及其机制的研究
目的:研究电磁脉冲(EMP)辐照对动物记忆力影响并探讨其作用机制.方法:①行为实验:用穿梭箱训练成年大鼠,使之形成条件反射,采用高场强EMP(6×104 V/m)进行照射,并于照后即刻,3 h,6 h,12 h,24 h分别进行测试,观察其对记忆保持能力的影响;②照射后大鼠活杀取脑,HE和神经元尼氏体染色,组织形态学观察;③海马神经元原代培养,经EMP辐照后观察形态改变,并采用流式细胞仪检测其凋亡情况.结果:照射后即刻大鼠的主动回避反应减少,而被动逃避反应增多,与照射前相比有非常显著性差异(P<0.01),3 h后渐趋照前水平;照射前后大鼠对刺激做出反应的潜伏期无统计学差异(P>0.05).EMP照射可造成海马组织和培养神经元的变性、凋亡、坏死及血液循环障碍等病理改变.结论:EMP照射可迅速造成实验大鼠暂时的记忆力下降,使海马组织细胞损伤及其凋亡增加,上述改变可能是EMP致脑功能障碍的病理学基础之一.
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质粒DNA α粒子损伤的原子力显微镜观察
目的:利用原子力显微镜(AFM)直接观察技术,检测α粒子辐射对质粒DNA的损伤.方法:照射质粒DNA吸附于云母表面,用AFM观察DNA的分子结构;用琼脂糖凝胶电泳检测开环和超螺旋结构的质粒DNA相对含量变化.结果:AFM下清晰观察到开环、线性和超螺旋结构的质粒DNA分子.在2 Gy α粒子照射下,开环质粒DNA的比例就明显增多,并随照射剂量的增加而上升.相比之下,γ射线需要更大剂量照射才能产生同等的损伤效应.结论:本文获得了AFM下辐射所致DNA损伤的直观图像,体外照射下α粒子对DNA的损伤大于γ射线.
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抗SARS冠状病毒药物细胞筛选模型的建立及应用
目的:建立抗SARS冠状病毒(SARS-CoV)药物细胞筛选模型,应用于抗SARS-CoV药物的筛选,为SARS的防治奠定基础.方法:将一定数量的细胞接种96孔板,根据药物的作用机制采用不同的给药途径,以观察到的细胞病变(cytopathic effect,CPE)为指标,按照Reed-Muench法,计算药物的细胞半数中毒浓度 (TD50)和抑制细胞半数病变的有效浓度( IC50).结果与结论:Vero-E6细胞接种SARS-CoV后24 h即可出现CPE,且CPE明显,便于观察,可作为抗SARS病毒药物细胞筛选模型.依此模型筛选了3类87种药物,确认6种药物在Vero-E6细胞上具有抑制SARS病毒的作用.该模型的建立也为其他的抗病毒药物的筛选提供了技术平台.
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检测耐利福平结核分枝杆菌寡核苷酸芯片的研制及应用
目的:探讨用寡核苷酸芯片检测结核分枝杆菌耐利福平株的rpoB基因突变的可行性.方法:制备了检测耐利福平结核分枝杆菌寡核苷酸芯片,并且通过优化引物比例和杂交温度以获得佳结果.应用该寡核苷酸芯片检测6例结核分枝杆菌的rpoB基因突变,并与测序结果比较.结果:不同引物比例PCR产物经热变性后杂交,杂交结果无明显差异.杂交温度可以影响杂交结果的特异性和杂交信号的强度.引物比例1∶1,杂交温度50℃为佳条件.6例标本的芯片检测结果显示其中有1例野生型标本,5例突变标本:516位GAC→AAC,GTC,TAC,GAG,531位TCG→TTG.其结果与测序结果完全相符.结论:寡核苷酸芯片可以推广应用到临床作为耐药结核病快速诊断的一种有效方法.
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一种新的抗辐射性相关蛋白AA12和CHK1相互作用研究
目的:研究AA12蛋白与CHK1蛋白的相互作用.方法:用在大肠杆菌中表达纯化的AA12(LG21)蛋白制备多克隆抗体,Western印迹检测抗体的特异性;用自制的抗体在A1-5和B4细胞中进行了免疫共沉淀实验;同时将AA12与Chk1基因克隆入酵母双杂交载体中,将重组质粒导入酵母菌AH109中,检测报告基因的表达情况.结果:Western印迹结果表明该抗体可以与AA12蛋白特异结合;并用免疫共沉淀实验验证了AA12蛋白与CHK1蛋白在哺乳动物细胞体内的相互作用.同时用酵母双杂交实验验证了AA12蛋白与CHK1蛋白在酵母体内的相互作用,β-半乳糖苷酶活性分析和α-半乳糖苷酶活性分析结果均为阳性.结论:AA12蛋白和CHK1蛋白之间存在相互作用,此结果为进一步研究新基因AA12的功能奠定了基础.
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新型复方戊二醛消毒剂生物效应研究
目的:观察新型复方戊二醛消毒剂的微生物学效应和毒性.方法:采用载体定量与定性实验法观察生物学效应,通过动物实验法进行毒理学评价.结果:戊二醛含量为750 mg/L,对载体上金黄色葡萄球菌和白色念珠菌作用10 min,对大肠杆菌作用7 min,平均杀灭率>99.9%;戊二醛含量为20 g/L,对载体上枯草杆菌黑色变种芽孢杀灭率达到100%,作用240 min对医疗器械上污染的枯草杆菌黑色变种芽孢可达到灭菌要求.毒理试验,小鼠经口给药LD50＞6 000 mg/kg(体重),骨髓嗜多染红细胞微核率与阴性对照无差别,对小鼠精子畸形发生率无影响.结论:复方戊二醛消毒剂具有优良的杀灭微生物效果,在试验剂量下属于实际无毒,无致畸变和致突变作用.
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毛囊生物学及其在皮肤组织工程中的应用
本文讨论了毛囊的胚胎发生和周期性生长特性,重点阐述了毛乳头细胞在毛囊生长过程中的重要作用,毛囊干细胞的特性及定位,以及毛囊生长发育的几种不同机制.通过回顾国外在毛囊生物学研究方面所取得的不同成就及其研究技术手段,探索构建人工复合皮上毛囊的方法和途径.
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大肠杆菌表达系统在红霉素基因工程中应用的研究进展
大肠杆菌表达系统在红霉素基因工程中的应用面临着许多难题:聚酮合成酶中ACP的后修饰、6-dEB生物合成前体供应、大环内酯糖基化修饰等.通过向大肠杆菌中转入枯草杆菌磷酸泛酰巯基转移酶基因sfp,使大肠杆菌中合成的ACP得以后修饰;6-dEB生物合成前体丙酰CoA和丙二酰CoA可通过Pfeifer途径和Dayem途径提供;目前,在大肠杆菌体内已可以合成6-dEB.利用大肠杆菌系统合成新的大环内酯化合物、对大环内酯糖基化修饰和提高大肠杆菌系统合成大环内酯类抗生素产量将是今后研究的重点.
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骨髓内皮祖细胞在恶性肿瘤血管生成中的作用
新的血管生成是肿瘤发生和发展的重要病理生理过程.人骨髓中含有内皮祖细胞,骨髓内皮祖细胞通过不同的机制动员进入血液循环,并参与肿瘤的血管生成.深入研究骨髓内皮祖细胞参与肿瘤血管生成的机制将为肿瘤治疗提供新的措施.
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非病毒载体基因递送系统的研究进展
非病毒载体基因递送系统是相对于以病毒为载体的基因递送系统的另一种基因递送系统.具有高安全性、低免疫原性及易于生产的特性.本文就非病毒基因载体的种类、在疾病治疗中的应用前景及存在的主要问题作一综述.
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志贺菌与宿主细胞之间相互作用的研究进展
志贺菌的致病过程实际上是志贺菌与宿主细胞之间相互作用的结果.本文从细胞微生物学的角度综述了志贺菌与巨噬细胞、肠上皮细胞和多形核白细胞之间的相互作用,较具体地阐述了志贺菌的致病机制.
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FAFLP技术及其在细菌学研究中的应用
荧光素标记的选择性扩增片段长度多态性(fluorescent amplified fragment length polymorphism, FAFLP)分析是一种用荧光素标记引物扩增已知酶切位点和接头DNA片段的指纹图技术,具有快速、简便、价廉、分辨率高、重复性好和污染少的特点.该方法已被成功地应用于植物学、动物学、法医学、微生物学等领域,是目前微生物流行病学调查、鉴定、分型和遗传分析中较为理想的分子生物学方法.本文主要介绍了FAFLP技术的原理、方法及其在微生物学中的应用.
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乳癌患者静脉留置管化疗给药的临床观察
一次性静脉留置针或留置导管被广泛应用于化疗患者,既减少了反复穿刺给患者带来的痛苦,又减轻了护士的工作量,但同时也产生了不同程度的副反应.本文以乳癌患者为研究对象, 对4种不同留置导管或留置针在静脉炎反应、导管堵塞情况、留置时间等方面进行了观察与分析,旨在为肿瘤患者的化疗寻求一种安全、舒适的给药途径.
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免疫PCR方法检测乳癌患者血清抗P53蛋白抗体
p53基因是人类肿瘤中突变频率高的抑癌基因,几乎发生在所有肿瘤,与肿瘤产生、生长调控和细胞凋亡等关系密切,检测p53基因/蛋白对诊断肿瘤、评价患者预后和提高患者术后生存期限具有重要价值.p53突变基因编码突变型P53蛋白并在细胞内积聚,与细胞内的热休克蛋白HSP70结合,导致异常的P53蛋白过度表达,释放入血而诱发机体自身免疫应答,产生抗P53蛋白抗体.近的研究发现,抗P53蛋白抗体可以反映早期p53基因突变和P53蛋白表达,可用于肿瘤的诊断、肿瘤转移和复发检测及p53表达动态观察,已引起了国内外研究者的关注[1～6].
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抗炭疽芽孢杆菌菌体抗原单克隆抗体的制备及其鉴定
炭疽芽孢杆菌(简称炭疽菌)是经典的生物战剂,被列入国际禁止生物武器公约生物战剂清单."9*11"事件以后,在被列入美国国家反恐预案红色警报(高级别)的可引起生物恐怖的烈性病原微生物中,炭疽菌是第一个.炭疽菌用于生物恐怖袭击一般是以喷洒和放置的形式实施.快速侦检是确定是否发生生物恐怖袭击的重中之重,"炭疽邮件"事件后,美国投入大量经费对环境中炭疽菌污染的快速检测进行研究.
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透射电镜观察特定原位培养细胞样品的制备
通过透射电镜观察体外培养细胞,早的方法是将细胞培养在载玻片上,按照顶扣法制备样品即可得到满意的结果[1].
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u-PA在细胞培养上清中的稳定性
尿激酶型纤溶酶原激活剂(u-PA)主要是由无酶催化活性的单链酶原(scu-PA或pro-UK)和具有激活纤溶酶原(plasminogen)活性的双链尿激酶(tcu-PA或UK)组成.scu-PA只激活吸附在纤维蛋白表面的纤溶酶原,具有选择性溶栓作用[1].
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论生物防护情报研究方向和任务
文章分析了生物防护情报研究面临的形势,研究提出了新形势下我国生物防护情报研究的主要方向和任务是:生物防护的组织体制研究、法律法规研究、公约和核查议定书条款研究,以及生物防护技术情报研究的深化.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 |
| 2001 | 01 02 03 04 |
| 2000 | 01 02 03 04 |
