军事医学杂志
Military Medical Sciences 군사의학
- 主管单位： 军事医学科学院
- 主办单位： 军事医学科学院
- 影响因子： 0.58
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1674-9960
- 国内刊号： 11-5950/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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登革2型病毒中国分离株感染性全长cDNA克隆的构建与鉴定
目的:构建登革2型病毒中国分离株(DEN2-43)的感染性全长cDNA克隆.方法:根据我室测定的DEN2-43株病毒全基因组序列,利用长链RT-PCR及融合PCR技术扩增此病毒基因组全长cDNA分子,并将其克隆至低拷贝载体pWSK29中构建该病毒株的全长cDNA克隆.将此克隆体外转录后,通过电穿孔导入宿主细胞获得恢复病毒.结果与结论:构建的DEN2-43基因组全长cDNA克隆具有感染性,所获得的恢复病毒具有与原型病毒类似的生物学性质及小鼠乳鼠神经毒力,且可稳定传代.该感染性克隆的构建为深入探讨登革病毒的致病机制及研制新型登革疫苗奠定了基础.
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hPLIC-2分子RNA干涉稳定细胞系的建立及鉴定
目的:建立人源性泛素类似蛋白hPLIC-2(human protein links IAP and cytoskeleton-2)knockdown稳定细胞系.方法:将RNA干涉载体稳定整合于MCF-7细胞中,建立hPLIC-2 knockdown细胞系.结果:从经抗性基因筛选的48个单细胞克隆中获得6个hPLIC-2表达被显著抑制的细胞克隆. 结论: 利用RNA干涉技术成功建立了hPLIC-2 knockdown稳定细胞系,为hPLIC-2分子的功能研究提供细胞模型.
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我国北方部分地区土拉弗菌感染宿主动物的分子流行病学研究
目的:了解我国北方部分地区宿主动物感染土拉弗菌状况和基因型别.方法:鼠夹诱捕鼠,从鼠脾组织提取DNA,应用巢式PCR检测土拉弗菌,计算并比较各地区及各鼠种阳性率.阳性标本用型特异性引物及短串联重复序列(SSTR9、SSTR16)引物扩增两区域并测序,用ClustalX(5.0)和DNA Club软件对序列进行比较分析.结果:共捕获鼠421只,分属14种鼠种,其中7个鼠种20份标本PCR检测阳性,总阳性率为4.75%.吉林、新疆、黑龙江、内蒙古和浙江的阳性率分别为11.65%,10.00%,6.54%,1.76%和0%.地区间阳性率差异显著(χ2 = 20.90,P = 0.0003);不同鼠种间阳性率未见差异(χ2 =11.82,P = 0.066).对20份扩增阳性标本进行型特异性扩增及SSTR9、SSTR16序列测定并对比分析,结果显示均为土拉弗菌B亚型,但型内差别较大,标本及菌株相互比较均显示基因多态性程度高且地区间有交叉.结论:我国北方部分地区可能依然存在B亚型土拉弗菌型感染(宿主动物)情况,且其基因型内差异较大.
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不同电融合和激活参数对猪体细胞核移植胚胎发育的影响
目的:摸索猪体细胞核移植佳的融合和激活条件.方法:利用体外成熟的去核猪卵母细胞为受体,颗粒细胞为供核细胞,透明带间隙注射法构建重构胚,对电融合和激活的参数(电场强度、脉冲宽度、脉冲次数、融合液中Ca2+浓度、联合激活参数)进行摸索.结果:发现在电场强度1.5 kV/cm,脉冲宽度30 μs,2次脉冲(间隔3 s),电融合液中0.1 mmol/L的Ca2+浓度下进行电激活,进而用(CB,7.5 μg/ml)+(6-DMAP,2 mmol/L)激活3.5 h发育率高,48 h卵裂率为72.5%,第6天桑葚胚率为35.1%;初次尝试了在胚胎培养前48 h加入0.05 mol/L的甘露醇来增加渗透压以减少电激活后重构胚的碎片化程度,但发现卵裂率及桑葚胚发育率与对照组差异不显著.结论:初步得到了适宜的猪体细胞核移植的融合和激活条件,为随后克隆胚早期发育基因的研究打下了基础.
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新型人阳离子抗菌蛋白18的构建及其表达
目的:构建新型人阳离子抗菌蛋白18(NHCAP18)的氨基酸序列,合成其编码基因并在原核细胞表达.方法:设计NHCAP18氨基酸序列,经生物信息学分析后,合成其编码基因,将该基因插入表达载体pGEX-4T-1,尔后在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导表达.结果:NHCAP18经生物信息学分析符合改造要求,构建的重组表达质粒pGEX-4T-1/ NHCAP18在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导4 h表达量约占菌体总蛋白量的39%,NHCAP18经谷胱甘肽-Sepharose 4B亲合层析纯化后对大肠杆菌有杀灭作用.结论:NHCAP18的成功改造,重组蛋白pGEX-4T-1/HCAP18在大肠杆菌BL21中高效表达及纯化,为研究NHCAP18功能打下了良好的基础.
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HIV-1 Tat 蛋白对细胞周期相关基因表达及辐射细胞周期阻滞的影响
目的:探讨HIV-1 Tat蛋白对细胞周期相关基因表达以及电离辐射诱发细胞周期阻滞的影响.方法:使用包含102个与DNA损伤修复和细胞周期相关的基因微阵列检测人横纹肌肉瘤细胞(TE671)及已转染tat基因的TE671细胞(TT2)基因表达谱的改变;使用流式细胞仪检测细胞周期变化;Western印迹检测蛋白表达变化.结果:在基因芯片的检测中发现,与DNA损伤修复及细胞周期调控相关的6个基因Cdc25C,KIF2C,Cdc20,DNA-PKcs,CTS1,Wee1在转染tat基因的细胞中表达下调;细胞周期检测发现TE671细胞和TT2细胞经4 Gy γ射线照射后表现出不同程度的G2/M期阻滞,但表达Tat的TT2细胞G2/M阻滞出现较TE671细胞晚,而在照射后48 h时TE671细胞G2/M期阻滞已恢复,但TT2细胞阻滞仍很显著.另外,TT2细胞S期阻滞时间延长.研究进一步发现细胞周期蛋白(cyclin)B1在TT2细胞中表达增强.结论:HIV-1Tat蛋白导致G2/M检验点功能紊乱,将影响细胞的辐射敏感性,本研究为了解AIDS合并肿瘤患者对放射治疗敏感性提供了重要实验数据.
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在2.2.15细胞中siRNA对HBV复制和表达的抑制
目的:检测设计的siRNA对HBV复制和表达的影响.方法:选择针对乙型肝炎病毒(HBV)的siRNA基因序列,化学修饰合成3种stealth siRNA,脂质体转染带有HBV的2.2.15细胞,ELISA法及荧光定量PCR检测其对HBV复制和表达的影响.结果:3种stealth siRNA对HBV的复制和表达在不同时间有不同程度的抑制作用.结论:HBV在2.2.15细胞中的复制和表达被stealth siRNA抑制.
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人层黏连蛋白α4链LG1-3组件的克隆及酵母表达
目的:利用巴斯德毕赤酵母表达系统获得重组的人层黏连蛋白LG1-3组件蛋白,为进一步研究LG1-3的结构和功能间的关系奠定基础.方法:利用RT-PCR从人胎盘组织总RNA中扩增LG1-3组件cDNA,并重组入pPICZαA,电转化入毕赤酵母GS115,利用甲醇诱导表达目的蛋白.结果和结论:获得了1 800 bp LG1-3组件cDNA,利用体外定点突变将SacⅠ酶切位点GAGCTC突变为GAGCGC,经SDS-PAGE和Western印迹检测到相对分子质量为67.48×103的LG1-3组件蛋白的表达.
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重组肉毒毒素B重链结合区片段的表达、纯化及其抗原性分析
目的:克隆、表达并纯化肉毒毒素B重链结合区C端(BoNT/B Hc)保护性抗原片段.方法:采用PCR扩增BoNT/B Hc基因,插入表达载体pET-His,转化E.coli BL21(pLys)细胞获得表达工程菌株,并对诱导表达条件和纯化条件进行优化.利用Western印迹和间接ELISA方法鉴定rBoNT/B Hc的抗原性.结果:表达工程菌BL21/pETHis-BHc于37℃经0.2 mmol/L IPTG诱导6 h后,目的蛋白获得高表达,约占菌体总蛋白的24%.经过Ni-NTA亲和层析柱一步纯化,rBoNT/B Hc的纯度可达96%以上.Western印迹和间接ELISA均显示其具有良好的抗原性.结论:成功克隆、表达并纯化了BoNT/B Hc片段,并可被抗天然BoNT/B马血清所识别,为建立快速检测方法和制备相应的抗体及亚单位疫苗奠定了基础.
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5-脱氧氮杂胞苷逆转食管鳞癌细胞系p16基因转录表达研究
目的:探讨5种食管鳞癌细胞株中p16基因转录失活以及去甲基化药物对其作用的机制.方法:采用细胞培养、PCR、DHPLC、MSP、Northern印迹、MTT等方法,检测EC1,EC18,EC109,TE1,TE10食管鳞癌细胞株中p16基因的缺失、突变、甲基化状态和p16的转录表达,观察去甲基化药物5-脱氧氮杂胞苷对p16基因转录表达和细胞增殖能力的影响.结果:除了EC1,其余4种食管鳞癌细胞株均检测出p16基因的不同变化:纯合缺失(EC18),纯合型甲基化(EC18,EC109),杂合型甲基化(TE1,TE10),且纯合缺失的发生率较低(20%),甲基化的发生率较高(80%),经过5-Aza-CdR处理,可见2株发生了杂合型甲基化的TE1和TE10细胞p16基因的转录表达得到了逆转.结论:不同食管鳞癌细胞株p16基因转录失活的原因是不同的,启动子区甲基化为主要原因,其中杂合型甲基化可以被去甲基化药物5-脱氧氮杂胞苷逆转,使p16的转录表达上调.
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pUDKH基因治疗制剂临床前安全性初步分析
目的:观察大鼠肌肉注射pUDKH后,出现毒性反应的时间、性质和程度,为临床毒副反应的监测和确定初始安全剂量提供依据.方法:实验设3个组,即正常对照组、pUDKH小剂量(0.63 mg/kg)和大剂量(2.50 mg/kg)组,给药途径为肌肉注射,且每只大鼠的给药方式相同,每只大鼠共给药14次,停药后观察16周.试验期间观测一般药物反应,分析尿液生化和血清生化,测定大鼠血清中抗人肝细胞生长因子(HGF)的抗体,目的基因HGF在多种组织内的分布,病理组织学检查各脏器的组织结构.结果:试验中给药组动物未见药物毒性反应,尿生化指标基本无有意义的变化,各时间点血清生化也无明显有意义的改变.各时间点血清样品中未检测到抗HGF抗体.除了注射局部的肌肉组织检测到高表达的HGF外,其他组织未见到高表达的HGF.各脏器病理学检查均未见异常改变.结论:大鼠肌注pUDKH剂量为0.63 mg/kg和2.5 mg/kg两种,分别是大鼠起始有效剂量的3倍和12.5倍,各项观测指标未见明显有意义的改变,故在本试验条件下可视2.50 mg/ kg以下为安全剂量,pUDKH基因治疗大鼠肢体缺血是安全、可行的.
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乳癌哨兵淋巴结检测临床应用
目的:探讨乳癌哨兵淋巴结活检预测腋窝淋巴结转移状态的可靠性.方法:本组为2000年11月至2004年2月我院收治的140例乳癌患者.术中应用国产亚甲蓝注射液4～6 ml肿瘤上、外、下半圆形皮下连续注射,134例行乳癌改良根治术或患侧乳腺区段切除加腋窝淋巴结清扫术.术后解剖蓝染淋巴管,沿着色淋巴管找到蓝染的哨兵淋巴结.哨兵淋巴结及腋窝淋巴结常规行石蜡病理切片检查.5例行乳腺区段切除加哨兵淋巴结活检,1例行全乳切除加哨兵淋巴结活检(冰冻、石蜡病理检查SLN转移阴性),未行全腋窝淋巴结清扫.结果:140例患者中136例检出哨兵淋巴结,检出率97.14%,灵敏度 88.71%,准确率94.31%,阴性预测值89.71%,假阴性率11.29%,仅哨兵淋巴结阳性7例.结论:应用亚甲蓝注射液淋巴结着色方法行乳癌哨兵淋巴结活检可以准确地预测腋窝淋巴结转移状态.
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激光心肌血运重建术对犬心肌的去神经作用
目的:观察激光心肌打孔血运重建(TMLR)术后早期对心肌缺血犬的去交感神经作用.方法:健康杂种犬20只,随机平均分为4组(每组5只),即对照组,切开心包后不作任何处理;心肌缺血组;TMLR组和酚处理组(阳性对照组),于左室相应区域以化学方法去除局部神经结构.术后2周采用Western印迹、RT-PCR检测各组心肌酪氨酸羟化酶的表达.结果:免疫印迹结果显示TMLR组和酚处理组酪氨酸羟化酶表达阴性.mRNA的表达结果均为阴性.结论:TMLR可破坏犬心脏交感神经及串行于其内的感觉神经,提示临床患者TMLR后症状的改善与痛觉传导障碍有关.
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银杏叶提取物对IL-1β诱导的黏附分子表达的影响及与NO的关系
目的:观察银杏叶提取物(GBE)对IL-1β诱导的血管内皮细胞黏附分子表达的影响,探讨该过程中NO可能的作用机制.方法:分离培养新生牛脑微血管内皮细胞;采用ELISA方法测定E-选择素(E-selectin)、αvβ3整合素的表达. 结果:GBE能够降低IL-1β诱导的E-选择素和αvβ3表达,NO增强剂L-精氨酸可进一步降低IL-1β诱导的E-选择素和αvβ3表达,而给予NO拮抗剂后GBE的抑制作用明显减弱. 结论:影响NO生成可能是GBE抑制E-选择素和αvβ3整合素表达途径之一.
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具有多种剪接形式的RNA结合蛋白基因的克隆、表达及其细胞内定位
目的:构建具有多种剪接形式的RNA结合蛋白(RBPMS)基因的真核表达载体,并在真核细胞中进行表达,确定RBPMS在细胞中的定位.方法:采用PCR技术,从人卵巢文库中扩增RBPMS基因的完整编码序列,将所扩增基因克隆到带FLAG标签的真核表达载体上,转染人胚肾细胞293T,Western印迹鉴定RBPMS的表达.然后将所扩增基因克隆到带绿色荧光标签的pEGFP-C1表达载体上,转染乳癌细胞ZR75-1,观察RBPMS在细胞中的定位情况.结果:经限制性内切酶分析和DNA序列测定鉴定构建的重组表达载体正确,Western印迹实验证明RBPMS表达成功,通过激光共聚焦显微镜观察,RBPMS分布在胞质中,在40%～50%细胞中RBPMS呈聚集状分布.结论:成功构建了RBPMS基因的真核表达载体,该基因产物分布在胞质中,在40%～50%细胞中RBPMS呈聚集状分布.
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成年脑神经元发生的影响因素
科学家已经证实,在正常成年啮齿类、灵长类及哺乳动物海马(hippocampus)的齿状回、脑室下区等脑区中,神经元发生现象存在并终生持续.神经元发生为多种退行性脑病的治疗带来了希望,并为研究神经可塑性提供了线索.本文将从药理学和神经元微环境(microenviroment)等角度对神经元发生的影响因素及可能机制作一综述.
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轴突导向信号的研究进展
在神经发育过程中,轴突沿特定的路径延伸,穿越很长的路线到达靶区并与之形成精确的神经连接.轴突在前进过程中受到多种因素的影响,其中主要的是具有吸引或排斥作用的导向分子,这类分子既可以通过长程也可以通过短程方式指导轴突选择正确的前进路线,目前发现的轴突导向分子家族主要有netrins,slits,semaphorins和ephrins.此外,神经营养因子、细胞黏附分子、胞外基质分子等对轴突延伸也具有导向作用.这些分子与相应的受体结合,启动下游的一系列信号转导途径,调控生长锥的细胞骨架动力学,使轴突按特定的路径前进并终到达靶标.
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CTLA-4基因多态性与自身免疫性疾病的相关性研究进展
人类自身免疫性疾病的遗传学病因较为复杂,除人类主要组织相容复合体(HLA)基因是这些自身免疫性疾病遗传易感性的主要遗传因素外,其他一些非-HLA基因也起着重要的作用.近年大量研究表明,细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(cytotoxic T lymphocyte-associated antigen 4, CTLA-4)基因多态性与诸多自身免疫性疾病的发生风险可能相关,因而被确定为自身免疫性疾病的候选遗传易感基因.本文对CTLA-4基因的遗传多态性及其与自身免疫性疾病的相关性研究进行综述.
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Ⅱ型GnRH及其受体系统研究进展
近年来,下丘脑GnRH(GnRHⅠ)的类似物已在性激素依赖性疾病和生殖辅助治疗上得到广泛应用,而对Ⅱ型GnRH及其受体系统的研究则刚刚起步.Ⅱ型GnRH在进化过程中保守了5亿年,可能在性激素分泌、生殖行为调节以及性器官功能调节方面具有重要作用,很可能是早形成的调节生殖的GnRH.克隆Ⅱ型GnRH受体将有助于阐明这一系统的功能并促进临床应用,而阐明人类Ⅱ型GnRH受体的功能则具有更重要的意义.本文就Ⅱ型GnRH及其受体的结构、分布、信号转导途径及其可能功能作一综述.
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靶向性腺病毒载体的研究进展
腺病毒载体广泛应用于恶性肿瘤的基因治疗,但它在体内应用时仍存在感染效率低、缺乏靶向性等问题.近年来,多种方法对腺病毒载体进行改建使之具有感染或表达的特异性,提高外源基因的表达效率和特异性.本文对腺病毒载体的靶向性构建相关进展作一综述,主要包括:①转导靶向设计,即通过改变腺病毒的嗜性,提高对靶细胞的转导效率或增加对靶细胞感染的特异性;②转录靶向设计,即在转录水平控制外源性基因的表达,限制基因在靶细胞中表达;③双靶向设计,即以上两方面结合起来改建腺病毒载体.
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P19细胞神经分化研究进展
哺乳动物神经系统的发育是一个复杂的过程,包含有多层次基因的表达与调节.P19胚胎瘤细胞系具有正常雄性小鼠染色体核型,在维甲酸的诱导下可向神经细胞方向分化,是研究神经发育机制的一个理想的细胞模型.本文就P19细胞﹑P19细胞的诱导、分化及参与P19细胞神经分化的相关因素做一综述.
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机动卫生装备舱室空气净化的关键技术
机动卫生装备舱室内部产生的及外部进入舱室的污染物, 受外部环境和内部布局等众多因素的影响,是影响舱室内部空气质量和作业人员安全的重要因素.空气净化是保证人员健康和人身安全以及卫勤作业任务的重要手段.本文着重介绍了机动卫生装备舱室污染物及其来源、相应的净化方法、舱室空气净化的关键技术,提出了机动卫生装备舱室空气净化技术的研究重点.
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细菌的细胞程序性死亡中毒素-抗毒素系统的研究进展
与哺乳动物细胞相同,细菌也存在着细胞程序性死亡.本文对细菌中存在的细胞程序性死亡现象、引发细菌造成细胞程序性死亡的毒素-抗毒素系统的组成、分类、意义以及影响细胞程序性死亡的因素进行了介绍.
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谷氨酰-脯氨酰-tRNA合成酶(EPRS)结构与功能的新认识
氨基酰-tRNA合成酶(ARS)催化特异的氨基酸结合到对应tRNA上,确保mRNA高精度地翻译为蛋白质.近陆续报道ARS同时也在细胞基本生命活动如RNA运输、转录、翻译、免疫反应以及血管生成中充当重要的调节分子和活性成分.目前报道谷氨酰-脯氨酰-tRNA合成酶(EPRS)在具有催化谷氨酸和脯氨酸分别结合到不同tRNA上的功能之外,还可通过基因选择性沉默机制阻遏血浆铜蓝蛋白的表达,从而终止炎症反应等.本文就该酶结构与功能的研究新进展进行综述,并对其进行分子进化分析.
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化学毒剂中毒救治的护理
许多化学毒剂与我们日常生活有着密切的关系.目前我们使用广泛的农业杀虫剂有机磷杀毒剂属于神经性毒剂;芥子气属于糜烂性毒剂,医药卫生界用其制成药膏,使用于银屑病的救治;光气属于窒息性毒剂,是民用化学工业重要的中间产品.上述化学毒剂在生产、储存、使用过程中,由于各种原因,偶有意外中毒的发生.我院自20世纪60年代开始收治有机磷中毒和其他化学毒剂中毒患者,在对中毒患者的护理过程中,总结和积累了丰富的临床护理经验,现总结如下,为平、战时化学毒剂中毒救治的护理提供参考.
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100例肝源性高血糖和低血糖患者临床分析
据文献报道,80%以上的肝硬化患者有糖代谢异常,表现为口服葡萄糖耐量试验时出现糖耐量减低、肝源性糖尿病及肝源性低血糖,前2种发生率较高[1].本科室自1994年1月至2004年12月收治慢性肝病患者450例,其中高血糖87例(占19.3%),低血糖13例(占2.9%),现将其临床特征总结如下.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 |
| 2001 | 01 02 03 04 |
| 2000 | 01 02 03 04 |
