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细胞角蛋白20和生存素基因在老年结肠癌患者外周血中的表达及其意义
目的 检测老年结肠癌患者外周血中细胞角蛋白20(CK20)和生存素(survivin)基因的表达,探讨二者与肿瘤诊断、转移的关系.方法 选取老年结肠癌患者72例、癌前病变者54例及正常对照者42例,用实时定量反转录聚合酶链反应(Real-time RT-PCR)检测CK20和生存素基因的转录,并分析二者与临床病理因素之间的关系.结果 正常对照组外周血中未检测到CK20和生存素mRNA的转录;癌前病变者外周血生存素mRNA的转录率为7.4%(4/42),平均拷贝数为(2.22±0.86);结肠癌患者外周血CK20和生存素mRNA转录率分别为47.2%(34/72)和73.6%(53/72),二者的转录量与Dukes分期及淋巴结转移有关.生存素mRNA高转录者5年生存率(58.6%)显著低于低转录者(90.7%),差异有统计学意义(P＜0.01).回归分析发现,生存素的表达、淋巴结转移及Dukes分期是影响患者预后的独立因素.结论 CK20 mRNA和生存素mRNA在老年结肠癌患者中过表达,可作为诊断微转移和评估预后的客观指标.
关键词： 结肠肿瘤 细胞角蛋白20 生存素 实时定量反转录聚合酶链反应 -
胃癌患者外周血癌胚抗原、细胞角蛋白20及生存素基因检测的临床意义
目的:研究癌胚抗原(CEA)mRNA、细胞角蛋白20(CK20)mRNA及生存素(survivin)mRNA与胃癌患者诊断、转移的相关性,评估其检测的临床应用价值.方法:采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR')方法联合检测79例胃癌、56例癌前病变及50例正常对照者外周血survivin、CEA、CK20基因的转录,并分析其与临床病理及预后关系.结果:正常对照组外周血未检测到CEA、CK20、survivin mRNA的转录,癌前病变患者survivin转录检测的阳性率为16.1%,平均拷贝数为1.6±0.8.胃癌外周血CEA、CK20、survivin mRNA转录阳性率分别为48.1%、60.8%、87.3%,其阳性率和肿瘤的分期、淋巴结转移等相关.Survivin mRNA高转录者5年生存率显著低于低转录者.胃癌患者外周血CEA、CK20、survivin mRNA转录的联合检测对肿瘤预后的判断具有较高的特异度和阳性似然比.结论:实时RT-PCR联合检测胃癌外周血中多个肿瘤标志物基因的表达,是一种较为理想的监测肿瘤复发、判断预后的方法.
关键词： 胃癌 肿瘤标志物 实时定量反转录聚合酶链反应 转移 预后 -
肠癌患者外周血中肿瘤标志物联合检测的临床研究
背景与目的:肠癌患者的生存期与是否存在转移密切相关,外周血中肿瘤标志物的检测有助于对肿瘤发生转移的判断,但单个检测指标尚难于判断.本实验旨在研究多种肿瘤标志物与肠癌患者生存期的关系,并评估其同时检测的临床应用价值.方法:采用实时定量反转录聚合酶链反应(Real-time RT-PCR)方法联合检测92例肠癌、68例肠癌前病变及50例正常对照者外周血生存素(survivin)、癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白20(CK20)基因的转录,并分析其与临床病理因素及预后关系.结果:正常对照组外周血中未检测NCEA、CK20及survivin mRNA的转录;良性病变患者survivin转录的检测阳性率为7.35%,平均拷贝数为(2.5±0.9).肠癌外周血CEA、CK20、survivin mRNA转录的阳性率分别为41.3%、47.8%、72.8%,其阳性率与疾病的分期、淋巴结转移等相关.survivin mRNA高转录者4年生存率显著低于低转录者.肠癌患者外周血CEA、CK20、survivin mRNA转录的联合检测对肿瘤预后判断具有较高的特异性和阳性似然比.结论:Real-time RT-PCR联合检测肠癌外周血中多个肿瘤标志物基因的表达,是一种较为理想的监测肿瘤复发、判断预后的方法.
关键词： 肠癌 肿瘤标志物 实时定量反转录聚合酶链反应 转移 预后 -
WT1基因在急性白血病患儿中的表达及其临床意义
目的 探讨WT1基因在急性白血病患儿中的表达及其临床意义.方法 采用实时定量RT-PCR方法检测198例急性白血病患儿(男124例,女74例;年龄1～13岁)WTI基因的表达水平.应用SPSS 13.0软件进行统计学分析.结果 急性白血病患儿WT1基因的中位数为932.99,对照组儿童为38.50,病例组显著高于对照组;ALL患儿WT1基因的中位数为195.73,AML患儿WT1基因的中位数为6 297.75,ALL患儿与急性髓性白血病(AML)患儿之间存在统计学差异(P<0.01),且在AML患儿FAB分型中M3、M4表达水平相对较高(中位数分别为8 081.83和8 123.54);WT1基因在急性白血病初诊组及复发组患儿中表达水平较高(WT1基因中位数分别为932.99和2 840.54),而完全缓解组表达水平显著下降(WT1基因中位数为144.32);可进行临床疗效评估的97例急性白血病患儿中,第1个疗程后完全缓解组与未缓解组初诊WT1基因表达水平差异有统计学意义,其中位数分别为311.98和3 768.43;对3例复发患儿进行WT1基因表达水平动态监测,发现复发前WT1的表达水平均有上升趋势.结论 WT1基因在各类急性白血病患儿骨髓中呈高表达水平,动态监测WT1基因的表达可了解急性白血病的发展,为疾病的复发提供依据.WT1基因作为一个"泛白血病"标志,可用于微小残留病的检测.
关键词： WT1基因 白血病 急性 实时定量反转录聚合酶链反应 儿童 -
实时定量反转录聚合酶链反应检测患儿急性粒细胞性白血病1-ETO融合基因的临床意义
目的 分析实时定量RT-PCR在检测急性粒细胞性白血病(AML)1-ETO融合基因阳性AML微小残留病中的临床意义.方法 对2000年1月-2007年1月收治的32例AMLI-ETO阳性AML患儿进行实时定量RT-PCR检测.诱导化疗结束后及在巩固化疗阶段每1.5-2.0个月行AMLI-ETO融合基因定量检测.使用Kaplan-Meier法分析不同融合基因水平患儿生存率.采用SPSS10.0软件进行统计学分析.结果 共32例患儿进行诱导化疗,其中29例(90.625%)达到形态学完全缓解,3例形态学未缓解后放弃.达到分子生物学缓解患儿有更高的无瘤牛存率(P=0.001 8).AML1-ETO高拷贝数组牛存率低于低拷贝数组(P=0.108 0).诱导缓解化疗结束后AML1-ETO定量结果 示＞10-3组生存率低于定量＜10-3组生存率(P=0.023 0).化疗6个月时AML1-ETO定量结果 示＞10-3组生存率高于定量＜10-3组生存率(P=0.000 1).巩固化疗结束时AML1-ETO定量＞10-5组生存率低于定量＜10-5组生存率(P=0.004 9).结论 定量评估AML1-ETD阳性的小儿AML微小残留病十分重要,有可能对治疗方案的选择提供重要信息.
关键词： 实时定量反转录聚合酶链反应 融合基因 粒细胞白血病 急性 儿童 -
胃肠癌患者外周血肿瘤标志物检测的临床研究
目的 检测胃癌和肠癌患者外周血中生存素(survivin)和细胞角蛋白20(CK 20)基因的表达,并探讨其与肿瘤诊断、转移之间的关系.方法 取胃癌79例,肠癌101例,癌前病变124例(胃56例,肠68例)及正常对照组50例,用实时定量反转录聚合酶链反应(Real-time RT-PCR)方法检测外周血中CK 20和生存素基因的转录情况,并分析其与临床病理因素之间的关系.结果 正常对照组未检测到CK 20和survivin mRNA的转录;良性病变者survivin mRNA的表达率为11.3%,肿瘤组CK 20和survivin mRNA表达率分别为胃癌48.1%、87.3%,肠癌48.5%、72.3%,其阳性率与疾病分期及淋巴转移等相关.survivin mRNA高转录者5年生存率显著低于低转录者(P＜0.01).CK 20和survivin mRNA表达阳性率高于CEA、CAl9-9.结论 CK 20和survivn mRNA在胃肠癌患者中过表达,可作为诊断微转移和评估预后的客观指标,其诊断外周血微转移优于CEA和CA 19-9,联合检测有更高的判断价值.
关键词： 胃癌 肠癌 CK20 生存素 实时定量反转录聚合酶链反应 -
微小RNA-125a在骨肉瘤组织的表达及其临床意义
目的 检测骨肉瘤组织及其癌旁组织中微小RNA(miRNA,miR)-125a基因表达差异,分析miR-125a表达水平差异与患者临床病理特征的相关性.方法 收集郑州市骨科医院2014年10月至2015年12月20对骨肉瘤患者癌组织及其对应癌旁组织手术标本,提取20对标本总RNA,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测骨肉瘤组织及其癌旁组织标本中miR-125amRNA表达差异,分析miR-125a表达与患者临床病理特征的相关性.结果 20对配对骨肉瘤及其癌旁组织RT-qPCR检测结果显示,与癌旁组织比较,miR-125a在12例癌组织中呈低表达,占总体样本的73.33％ (12/20),癌组织中miR-125a mRNA的相对表达量为(0.4098 ±0.0673)明显低于癌旁组织(0.932 7 ±0.081 6),差异有统计学意义(t=2.920,P=0.010),且两者之间的平均表达差异达2.28倍.临床资料分析结果显示,miR-125a在骨肉瘤组织中的表达差异与骨肉瘤患者病理分期(x2=23.375,P=0.000)、是否规律化疗(x2=4.444,P=0.035)及有无肺转移(x2=4.469,P=0.043)关系密切;与年龄、性别无关(x2=0.317,P=1.000).结论 miR-125a在骨肉瘤组织中的表达明显低于其相应的癌旁组织;miR-125a与骨肉瘤的Enneking外科分期、有无肺转移及是否规律化疗显著相关.
关键词： 骨肉瘤 微小RNA-125a 实时定量反转录聚合酶链反应 -
p62蛋白在结肠癌组织的表达及临床意义
目的 探讨p62蛋白在结肠癌组织中的表达及临床意义.方法 收集60例散发的结肠癌患者临床资料和手术标本,应用免疫组织化学和Western blot法检测p62蛋白在肿瘤组织和癌旁组织中的表达;应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)的方法对标本中p62 mRNA的表达水平进行检测;探讨癌组织中p62的表达水平与患者的临床病理特征之间的相关性.结果 60例结肠癌组织与癌旁组织比较,p62 mRNA的表达明显上调(3.179 4±0.817 0比1.3866±0.4482),差异有统计学意义(t=14.633,P=0.000);p62蛋白的表达明显上调(0.9825 ±0.2646比0.329 8±0.114 5),差异有统计学意义(t=20.593,P=0.000).p62的表达与患者性别、年龄、民族、肿瘤部位、肿瘤大小、组织学类型和分化程度、肿瘤浸润深度无明显相关,与淋巴结转移及肿瘤分期显著相关(x2=11.250,P=0.001).结论 p62高表达的结肠癌患者淋巴结转移率高,病期晚;p62的异常累积与结肠癌的发生发展明显相关.
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宫颈癌及癌前病变组织中microRNAs的差异表达
目的 寻找与宫颈癌及宫颈癌前病变相关的microRNA.方法 利用miRNA芯片,筛查宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤变及正常宫颈组织中差异表达的miRNA,并用实时定量RT-PCR在60份宫颈组织标本中对4个miRNA进行验证.利用生物信息学对部分差异表达的miRNA的靶基因进行功能分析.结果 与正常宫颈组织比较,宫颈癌及高级别宫颈病变(HSIL)中存差异表达的miRNAs,其中在宫颈癌中下调明显的是miR-218(下调倍数为0.175),上调明显的是miR-21(上调倍数为5.68).实时定量RT-PCR验证结果与miRNA芯片结果基本一致.功能分析显示预测的miR-218及miR-21的靶基因与肿瘤的生长、侵袭转移有关.结论 宫颈癌及癌前病变中存在异常表达的miRNA,它们在宫颈癌发生过程中可能起癌基因或抑癌基因的作用.
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两种实时定量RT-PCR方法检测miRNAs表达的技术分析
目的 比较两种实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测microRNAs (miRNAs)表达含量的技术差异,优化不同实验目的和条件下研究miRNAs表达的技术方法.方法 取21d和42d两个时间点的SD大鼠关节软骨组织,采用Trizol法提取总RNA备用.选取rno-miR-15b、rno-miR-16、rno miR 195、rno-miR-497作为研究对象,分别用茎环引物和试剂公司提供的试剂盒方法反转录总RNA,并应用实时定量PCR方法检测这些miRNAs的表达量.提取人血浆中总RNA,用上述两种RT-qPCR方法实时定量检测has-miR-16的表达量.结果 两种方法检测这些miRNAs表达量,在大鼠21d和42 d这两个时间点其表达量变化趋势相同,都呈现增高的趋势,这与我们前期Solexa测序结果相同.在血浆中的结果显示,其中茎环引物反转录方法灵敏度相对较高.结论 茎环引物法在少量几个重要的miRNAs检测中具有优势,而试剂盒方法适用于大量miRNAs的筛查.
关键词： miRNAs 茎环引物 实时定量反转录聚合酶链反应 软骨 血浆
