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HET0016联合亚低温对缺氧缺血性脑病新生猪仔脑神经元m-calpain蛋白表达的影响
目的 评价H ET0016联合亚低温对缺氧缺血性脑病新生猪仔脑神经元m-calpain蛋白表达的影响.方法 健康新生猪仔36头,雌雄不拘,采用随机数字表法分为4组:假手术组(S组,n=6)、缺氧缺血常温组(HI+NT组,n=6)、缺氧缺血亚低温组(H1+MH组,n=12)、缺氧缺血+HET0016(HET0016)联合亚低温组(HI+HET+MH组,n=12).采取麻醉下吸入低氧浓度-窒息法,建立缺氧缺血性脑病新生猪仔模型.HI+MH组及HI+HET+MH组在建立缺氧缺血性脑病模型后3h,用冰袋将体温降至34℃.HI+HET+MH组在循环恢复后3 min时静脉输注HET0016 l mg/kg.独立喂养10d后麻醉下取脑组织标本,采用免疫组化法确定壳核、感觉皮层、海马CA3及丘脑腹后外侧核m-calpain蛋白的表达水平.结果 与S组比较,其他各组不同脑区m-calpain蛋白表达上调(P＜0.05);与HI+NT组比较,HI+MH组和HI+HET+MH组各脑区m-calpain蛋白表达下调(P＜0.05);与HI+MH组比较,HI+HET+MH组各脑区m-calpain蛋白表达下调(P＜0.05).结论 HET0016联合亚低温抑制缺氧缺血性脑病新生猪仔神经元凋亡的机制可能与下调m-calpain蛋白表达有关.
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HET0016对延迟性亚低温保护氧糖剥夺-复氧复糖大鼠神经元的改良作用:离体实验
目的 评价HET0016对延迟性亚低温保护氧糖剥夺-复氧复糖大鼠神经元的改良作用.方法 健康新生SD大鼠海马神经元分离培养后,以(2～3)×105个/ml的密度接种于6孔板内,采用随机数字表法将其分为4组(n=12):对照组(C组)、氧糖剥夺组(OGD组)、氧糖剥夺-复氧复糖-亚低温组(OGD/R-MH组)、氧糖剥夺-复氧复糖-亚低温-HET0016组(OGD/R-MH-HET组).C组正常培养;OGD组进行氧糖剥夺2 h;OGD/R-MH组在氧糖剥夺2h,复氧复糖4h后亚低温处理24h;OGD/R-MH-HET组于氧糖剥夺后复氧复糖前加入HET0016,终浓度为1μmol/L,其余处理同OGD/R-MH组.继续培养24 h后,采用MTT比色法检测神经元活力;采用PI/FDA染色法确定神经元的存活率.结果 与C组比较,OGD组神经元活力减弱、存活率下降(P＜0.05);与OGD组比较,OGD/R-MH组和OGD/R-MH-HET组神经元活力增强、存活率升高,且OGD/R-MH-HET组变化程度更明显(P＜0.05).结论 HET0016对延迟性亚低温保护氧糖剥夺-复氧复糖离体大鼠神经元具有一定的改良作用.
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HET0016在小鼠纹状体脑出血损伤中的作用及其可能机制
目的 研究20-羟二十烷四烯酸(20-HETE)抑制剂HET0016对脑缺血的作用及其可能机制.方法 选择C57品系小鼠,制备胶原酶诱导的纹状体脑出血模型.阻断剂组予以20-HETE的阻断剂HET00162mg/kg,于脑出血模型制备后2h腹腔注射.对照组予以等体积溶剂羟丙基-BETA-环糊精腹腔注射.各组分别于脑出血后各时点取材,测定脑损伤体积,脑含水量的变化,脑出血后神经功能评分,ELISA方法测定脑组织内20-HETE含量,Fluoro Jade B染色标记变性坏死的神经元数量(FJB阳性细胞),免疫荧光染色检测钙结合蛋白(Iba1)和抗髓过氧化物酶(MPO)表达等脑组织小胶质细胞和中性粒细胞炎症反应的情况.结果 与对照组相比,阻断剂组脑组织内20-羟二十烷四烯酸表达量均明显降低(N=8,P＜0.01),脑损伤体积明显降低(N=5,P ＜0.05),脑水肿降低(N=8,P＜0.05),HET0016明显降低脑出血周围组织内FJB阳性细胞数量(N=5,P ＜0.01),降低激活的小胶质细胞和浸润的中性粒细胞的数量(N=5,P＜0.05).结论 20-羟二十烷四烯酸在脑出血后加重出血周围神经损伤,其抑制剂可以对脑出血起到治疗作用.
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HET0016对局灶性脑缺血再灌注大鼠血脑屏障的影响
目的：研究花生四烯酸P450ω-羟化酶抑制剂HET0016对局灶性脑缺血再灌注大鼠血脑屏障的影响。方法选取60只成年雄性 SD大鼠，体重（250±10） g，随机分成假手术组、模型组、溶剂组、HET0016治疗组，每组15只。线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞缺血再灌注模型。 HET0016组大鼠于再灌注前通过尾静脉给予HET0016（1 mg／kg），于缺血再灌注24 h行神经功能损伤评分，取脑，H-E染色观察病理变化，氯化-2，3，5-三苯基四氮唑（23，，5-triphenyltetrazolium chloride，TTC）染色观察脑梗死体积，免疫组织化学染色及Western blot法测定缺血侧顶叶皮质脑组织炎性因子白介素1β（ IL-1β）、紧密连接蛋白Claudin -5、Occludin及ZO-1表达变化。结果与假手术组比较，模型组大鼠脑缺血再灌注后24h 神经功能损伤评分明显增高（ P＜0．05）；缺血侧顶叶皮质脑组织炎症细胞明显增加，正常神经元明显减少，核固缩，胞质染色浅；脑梗死体积明显增加（P＜0．05）；缺血侧顶叶皮质脑组织IL-1β表达明显增加，紧密连接蛋白Claudin-5、Occludin及ZO-1表达明显减少（ P＜0．05）。与模型组相比，HET0016组大鼠缺血再灌注后24 h神经功能评分明显降低（ P＜0．05）；缺血侧顶叶皮质脑组织炎症细胞明显减少，正常神经元增多，核固缩减轻，胞质染色较深；脑梗死体积明显减小（P＜0．05）；缺血侧顶叶皮质脑组织IL-1β表达明显减少，紧密连接蛋白Claudin-5、Occludin及 ZO-1表达明显增加（ P＜0．05）。与假手术组比较，溶剂组各个指标无明显变化（P均＞0．05）。结论 HET0016能够有效减轻大鼠脑缺血再灌注损伤，其机制可能是通过控制炎性因子IL-1β及血脑屏障紧密连接蛋白的表达，降低血脑屏障通透性，从而减轻缺血再灌注对脑组织的损伤。
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HET0016对延迟性亚低温保护氧糖剥夺-复氧复糖离体神经元的强化效应
目的 探讨HET0016对延迟性亚低温保护氧糖剥夺-复氧复糖(oxygen-glucose deprivation and restoration,OGD/R)离体神经元的强化效应.方法 新生24～48 h的SD大鼠12只,随机分为对照组、氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)组、OGD/R-亚低温(OGD/R-mild hypothermia, OGD/R-HM)组、OGD/R-HM-HET0016(OGD/R-HM-HET)组各3只,均分离海马神经元细胞培养7d,制备海马神经元OGD/R模型.对照组应用3 mL含葡萄糖earle's平衡盐溶液正常条件下培养2h后更换正常培养液继续培养28 h;OGD组应用3 mL无葡萄糖平衡盐,37℃、体积分数1％氧气培养箱中培养2h后更换正常培养液继续培养28 h;OGD/R-HM组应用3 mL无葡萄糖培养液、体积分数1％氧气培养箱培养2h后更换正常培养液,37℃、体积分数5％CO2培养箱中复氧4h后亚低温处理24 h;OGD/R-HM-HET组于复氧前加入HET0016,调整终浓度1μmol/L,余处理同OGD/R-HM组.应用流式细胞仪检测4组细胞凋亡率.结果 流式细胞仪检测结果显示,神经元细胞凋亡率在OGD组[(29.59±0.60)％]、OGD/R-HM组[(19.89±0.39)％]、OGD/R-HM-HET组[(14.17±o.25)％]均高于对照组[(1.63±o.42)％](P＜0.05),且OGD组高于OGD/R-HM组和OGD/R-HM-HET组(P＜0.05),OGD/R-HM组高于OGD/R-HM-HET组(P＜0.05).结论 HET0016对缺血缺氧4h后实施的亚低温保护离体OGD/R神经元具有一定的强化效应.
