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基质金属蛋白酶抑制剂2研究进展
内源性金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMPs)为基质金属蛋白酶(matrix metalloprotease,MMP)特异性抑制剂,属半胱氨酸蛋白酶超家族,存在于果蝇、秀丽隐杆线虫、人等多种真核生物中,机体缺乏TIMP会引起胚胎发育异常[1-3].
关键词： 基质金属蛋白酶抑制剂2 血管形成 血管增殖 -
豚鼠形觉剥夺早期后极部巩膜基质金属蛋白酶2及其抑制剂动态表达
目的 探讨豚鼠形觉剥夺性近视(form-deprivation myopia,FDM)早期后极部巩膜基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)及基质金属蛋白酶抑制剂2(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-2,TIMP-2)mRNA的表达.方法 4周龄三色豚鼠50只,随机分成实验组和正常对照组各25只,实验组又随机分为5组,单眼形觉剥夺(monocular deprivation, MD)右眼1、4、7、14、21 d制备FDM动物模型,未遮盖眼为自身对照组.各组豚鼠进行检影验光和A超测量眼轴长度.提取后极部巩膜总RNA,二步法逆转录聚合酶链反应检测各组后极部巩膜MMP-2及TIMP-2 mRNA的表达水平.结果 除1 d外,各组MD后极部巩膜MMP-2 mRNA的表达与正常对照组、自身对照组差异均有统计学意义(P<0.05),MD组间差异也有统计学意义(P<0.01);而TIMP-2 mRNA的表达则逐渐下降.各自身对照组MMP-2、TIMP-2 mRNA的表达与MD组变化趋势大致相同.结论 MMP-2/TIMP-2之间动态平衡失调可能是启动豚鼠FDM巩膜细胞外基质早期主动重塑的重要因素.
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反义CD147分子对人胆管癌细胞株侵袭性影响的实验研究
目的 探讨反义CD147分子对人胆管癌细胞株QBC939侵袭性的影响.方法 构建含反义CD147分子片段的重组真核表达质粒,将人胆管癌细胞株QBC939分为三组:(1)反义CD147组,运用重组真核表达质粒asCD147-pcDNA3.1(-)转染QBC939细胞;(2)空质粒组,运用pcDNA3.1(-)空质粒转染QBC939细胞;(3)对照组,运用DMEM常规处理细胞.采用MTT法检测各组QBC939细胞的生长情况,RT-PCR和Western blotting法分别对三组QBC939细胞中的CD147、MMP-2、MMP-9、TIMP-2的mRNA表达水平及其对应蛋白的表达水平进行检测.结果 成功构建了携带反义CD147分子片段的重组真核表达质粒.MTT法检测显示:三组QBC939细胞的生长曲线及对数生长期情况无统计学差异(P>0.05).RT-PCR法检测显示:反义CD147组QBC939细胞中CD147和MMP-2分子的mRNA表达均低于空质粒组和对照组(P<0.05),且空质粒组与对照组相比无统计学差异(P>0.05);反义CD147组QBC939细胞中MMP-9和TIMP-2分子的mRNA表达与空质粒组和对照组相比无统计学差异(P>0.05).Western blotting检测发现:与空质粒组和对照组相比,反义CD147组QBC939细胞中CD147和MMP-2分子的蛋白表达明显降低(P<0.05),空质粒组与对照组相比无统计学差异(P>0.05);与空质粒组和对照组相比,反义CD147组QBC939细胞株中MMP-9和TIMP-2分子的蛋白表达无统计学差异(P>0.05).结论 (1)反义CD147对胆管癌细胞株QBC939的生长无影响;(2)反义CD147对胆管癌细胞株QBC939中MMP-9和TIMP-2的mRNA表达及对应蛋白表达无影响;(3)反义CD147降低胆管癌细胞株QBC939中CD147和MMP-2的mRNA表达及对应蛋白表达,可能会降低胆管癌细胞株的侵袭性.
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姜黄素衍生物L6H4对2型糖尿病大鼠肝组织的保护作用
目的:探讨姜黄素衍生物L6H4对2型糖尿病及高脂大鼠肝组织的保护作用及其机制.方法:40只雄性SD大鼠随机均分为5组:正常对照组、高脂组、高脂治疗组、糖尿病组及糖尿病治疗组.高脂高糖喂养诱导高脂模型,高脂高糖喂养加腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导2型糖尿病模型.高脂治疗组和糖尿病治疗组用0.2 mg·kg-1·d-1 L6H4灌胃8周.生化法检测大鼠血糖、血脂水平以及血谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、血浆白蛋白(ALB)等肝功能指标;放射免疫法测定血胰岛素(FINs)水平并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);光镜及透射电镜下观察大鼠肝组织形态改变;免疫组织化学法检测大鼠肝脏转化生长因子β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)的蛋白表达水平.结果:高脂组、糖尿病组血糖,血脂及血清ALT、AST水平显著升高,ALB水平显著下降,经L6H4干预后,高脂治疗组及糖尿病治疗组的血糖,血脂及血清ALT、AST均明显下降,ALB明显增高.高脂组肝细胞脂肪变性,有少量胶原纤维形成;糖尿病组正常肝索结构破坏,肝细胞脂肪变性更为显著,局灶可见坏死,纤维增生明显,纤维间隔增厚,汇管区可见粗大胶原纤维;L6H4治疗后上述形态学改变明显改善.高脂组及糖尿病组肝脏TGF-β1、TIMP-2蛋白表达升高,MMP-2蛋白表达下降,L6H4治疗后,TGF-β1、TIMP-2蛋白表达明显降低,MMP-2蛋白表达明显升高.结论:姜黄素衍生物L6H4可改善2型糖尿病大鼠的糖脂代谢及胰岛素抵抗,对2型糖尿病及高脂大鼠肝组织具有保护作用,抑制肝脏TGF-β1及TIMP-2表达,上调MMP-2表达为其可能机制.
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食管癌患者血清TIMP-2水平以及临床意义
目的 检测基质金属蛋白酶抑制因子-2在食管癌患者血清中的蛋白水平及其临床意义.方法 通过对100例血浆样本,包括50例食管癌患者、50例健康人,采用酶联免疫吸附试验进行检测,测定基质金属蛋白酶抑制因子-2蛋白的血清浓度,检验其诊断食管癌的敏感性和特异性.结果 酶联免疫吸附试验检测结果显示,食管癌患者血清中基质金属蛋白酶抑制因子-2蛋白浓度显著低于正常对照人群(P＜0.01).当cutoff值定为107.5 ng/mL时,基质金属蛋白酶抑制因子-2检测食管癌的敏感性为70％,特异性为94％.结论 检测血清中基质金属蛋白酶抑制因子-2的蛋白水平有助于食管癌的诊断.
关键词： 食管癌 基质金属蛋白酶抑制剂2 酶联免疫吸附试验 -
人TIMP-2蛋白在肝癌细胞迁移与侵袭中的作用
目的：通过原核表达获取人 TIMP-2蛋白，探讨 TIMP-2在肝癌细胞迁移及侵袭中的作用。方法以SMMC-7721肝癌细胞总RNA为模板，用RT-PCR技术扩增出人TIMP-2基因cDNA，通过基因重组技术构建原核表达载体pGEX-TIMP-2并在大肠杆菌Origami（DE3）中诱导表达人TIMP-2重组蛋白。采用亲和层析法纯化表达产物，并用Western blotting鉴定；用RNAi技术和添加外源蛋白方法分析TIMP-2蛋白对肝癌细胞迁移和侵袭的作用；荧光定量PCR、Western blotting检测siRNA-TIMP-2转染细胞后肝癌细胞内源性TIMP-2的mRNA及蛋白表达水平。结果外源添加的TIMP-2蛋白抑制肝癌细胞迁移及侵袭的能力，而RNAi技术能抑制内源的TIMP-2蛋白增强肝癌细胞迁移及侵袭的能力；肝星状细胞的条件培养液能够促进肝癌细胞迁移和侵袭，而这种作用能够被TIMP-2蛋白抑制。结论肝癌微环境中的TIMP-2蛋白水平与肝癌细胞的迁移和浸润密切相关。
关键词： 肝细胞癌 基质金属蛋白酶抑制剂2 转移 侵袭 -
c-Met、TIMP2与宫颈鳞癌浸润转移的相关性
目的 研究肝细胞生长因子的受体c-Met与基质金属蛋白酶抑制剂TIMP2在宫颈鳞癌组织中表达的意义及其与宫颈鳞癌临床分期、病理分级和淋巴结转移的关系.方法 采用SP法检测40例宫颈鳞癌、13例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)、15例正常宫颈组织中c-Met和TIMP2的表达,对结果进行秩和检验分析.结果 正常宫颈、CIN和宫颈鳞癌组织中c-Met表达依次增高,宫颈癌的临床分期越晚,c-Met表达越强.TIMP2表达CIN中明显高于正常组织,到宫颈鳞癌又呈下降趋势,临床分期越晚,表达越弱.有淋巴结转移组与无淋巴结转移组比较,c-Met表达增高,TIMP2表达降低,而两者均与病理分级无关.结论 c-Met与宫颈鳞癌发生发展有关,TIMP2可能是宫颈鳞癌发展过程中的一早期事件.c-Met、TIMP2可成为判断宫颈癌转移、预后的良好参考指标.
关键词： 肝细胞生长因子受体 基质金属蛋白酶抑制剂2 宫颈癌 浸润转移 相关性 -
补骨脂素对人皮肤成纤维细胞衰老相关基因的调控作用
目的 研究补骨脂素对人皮肤成纤维细胞(ESF-1)衰老相关基因的影响.方法 以雌二醇为阳性对照,采用MTF法检测补骨脂素高、中、低剂量组(100,10,1μmol· L-1)对细胞增殖的影响,用RT-PCR技术检测补骨脂素作用于ESF-1细胞后对衰老相关基因Ⅰ型胶原蛋白(Col Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(Col Ⅲ)、基质金属蛋白酶1(MMP-1)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)及基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)mRNA表达水平的影响.结果 补骨脂素中剂量组的作用与雌二醇相似,能使ESF-1细胞的增殖明显提高,同时使Col Ⅰ、ColⅢ、TIMP-1、TIMP-2 mRNA的表达水平显著增强,MMP-1 mRNA的表达水平显著降低.结论 补骨脂素具有促ESF-1细胞增殖的作用,可促进胶原蛋白合成,提示其具有潜在的抗皮肤衰老作用.
