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一种改良的亚硫酸氢盐修饰微量DNA的甲基化分析方法
目的 建立一种改良的亚硫酸氢盐修饰微量DNA的甲基化分析方法.方法 应用低熔点琼脂糖包埋不同含量的DNA,进行亚硫酸氢盐修饰,通过MGMT基凶甲基化与非甲基化特异PCR的扩增,与传统的亚硫酸氢盐修饰法进行分析比较.结果 改良法对于低至15.625ng的DNA修饰均可获得MGMT基因甲基化扩增产物,而传统法对于62.5ng及其以下的DNA修饰难以获得MGMT基因甲基化扩增产物.结论 改良的亚硫酸氢盐修饰方法可有效提高甲基化特异PCR的灵敏度,该方法为微量DNA的甲基化分析提供了一种较理想的研究手段.
关键词： 亚硫酸氢盐修饰 微量DNA 甲基化特异PCR(MSP) -
微量接触DNA的浓缩与回收
目的 对纯化后的微量DNA进行进一步浓缩,提高DNA检验成功率.方法 将30 ml(约600pg)纯化后的微量DNA,分别采用Amicon离心超滤管和DNA Clean & ConcentratorTM-5试剂盒进行浓缩回收,用Identifiler试剂盒进行PCR扩增及分型检测,比较STR分型图谱的平均峰高、峰面积和等位基因丢失率.检验24枚白纸上的汗潜指纹,比较浓缩前后的检验效果.结果 经过Amicon离心超滤管回收后,STR分型平均峰高85.3RFU,平均峰面积为1 130.8,等位基因丢失率为66.13％.经过DNA Clean & ConcentratorTM-5试剂盒回收后,STR分型平均峰高147.5RFU,平均峰面积为1 960.2,等位基因丢失率为35.14％.汗潜指纹的DNA检验通过DNA Clean & ConcentratorTM-5试剂盒纯化浓缩,获得有效分型的数量由浓缩前的9枚提高为20枚.结论 DNA Clean & ConcentratorTM-5试剂盒可以明显提高微量DNA检材的检验成功率,效果优于Amicon离心超滤管.对白纸上的指纹,DNA Clean&Concentrator TM-5试剂盒浓缩后检验成功率升高.
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纯化 PCR 产物检出微量生物检材 STR 分型1例
随着 DNA 检验方法的成熟，大量的微量 DNA被检出，当微量生物检材得到的模板 DNA 量有限时，PCR 扩增产物的再利用就显得尤为重要，因为另辟蹊径能够拓展 DNA 技术在法庭科学中的应用领域，促进 DNA 技术的深度应用。
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应用微量DNA检验技术侦破人命案2起
目的 探讨在命案侦破中如何正确应用微量DNA检验技术.方法 对1例绑架杀人案和1例故意杀人案进行回顾性分析.结果 案例1勒索信背面透明胶带上提取脱落细胞基因分型与嫌疑人基因分型一致.案例2中根据尸体乳头擦拭脱落细胞的STR基因分型与现场犯罪嫌疑人基因分型一致.结论 正确应用微量DNA检验技术可以为案件侦破指明侦查方向,为案件侦破提供重要科学技术支撑.
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人体脱落细胞DNA检测1例
1案例资料1.1简要案情2009年9月21日,石某(女,50岁)在自家中被杀害.现场勘验提取烟头4枚、可疑血迹1处、木棍1根;另在钟表、缸盖(木质)、麦圈盖(铁质)、板箱盖(木质)、抽屉、电视机罩及柜子底层抽屉盖上发现指印及触摸痕迹,现场分析认为,嫌疑人可能触摸过上述物品,故要求对上述检材进行人体脱落细胞DNA分型检验.
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火柴棍上汗斑DNA检验3例
留在刑事案件现场物品上的汗斑,因其含脱落上皮细胞少,DNA含量低,使用常规酚-氯仿法或chelex法提取DNA进行STR分型成功率较低.本文作者应用QIAamp DNA Micro Kit(QIAGEN公司)提取3起案件汗斑DNA并进行了STR检验及mtDNA测序,现报道如下.
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利用指甲缝中残留DNA破案1例
1案例资料1.1简要案情鲁某,女(怀孕6个月).2004年10月某日,一人在家时被他人掐捂窒息死亡.根据尸体检验及案件调查分析,鲁某在与罪犯搏斗时,手指甲抓刮到罪犯皮肤,指甲缝可能留有罪犯皮肤表皮细胞组织.笔者先对死者指甲进行DNA检验,并检出一男性DNA.案件排查中,同乡张某突然失踪,故采集张某父母的血样送检.经检验,鲁某指甲缝中残留男性DNA与张某父母的血样符合遗传关系,从而锁定张某为重大嫌疑对象,抓捕后取张某血样进行DNA鉴定,结果认定张某与指甲缝检材分型一致.在证据面前张某对犯罪事实供认不讳.
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水杯上微量DNA检验破案1例
1 案例简介2016 年 5 月,在外省某县大道教体局北侧,发生一起交通肇事逃逸案.造成一人死亡,一人受伤,现场遗留一不锈钢水杯.经当地 DNA 实验室多次检验,未获得 STR 分型结果.当地公安机关于 2016年 6 月送检至我市物证鉴定所,本文综合运用了分段多处取材、多次平行扩增、混合谱图拆分等手段,有效获得了 STR 分型,为破案提供线索.
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利用种属特异性SSR荧光引物检出稀释液中罂粟DNA 1例
基于DNA检测技术建立的罂粟种属鉴别系统，能准确识别幼苗期罂粟、罂粟植株残渣、罂粟壳和罂粟种子，但针对涉毒案件中稀释液体所含罂粟的DNA种属检验目前尚无报道[1-2]。本文应用种属特异性SSR荧光引物（simple sequence repeat，微卫星标记）的DNA检测技术，通过提取、扩增方法的优化，从1例涉毒案件送检的罂粟稀释浆液样本中检出SSR谱带并成功破案，为将来涉毒案件中类似的毒品原植物疑难、微量检材的种属检验提供一定的参考，现报告如下。
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FTA卡在微量血痕DNA多态性分析中的应用
目的 探索FTA卡样本DNA小检出量及同一FTA卡样本进行多项目检测的可行性.方法 制作含有不同浓度DNA FTA卡,使用Identifiler试剂盒进行检验;对同一FTA卡样本先后使用Identifiler、Y-filer试剂盒进行扩增及线粒体高变区HVI区测序,使用ABI3130测序仪检测各扩增产物.结果 载有0.5ngDNA的FTA卡扩增产物即可正确分型,对同一血痕样本使用不同试剂盒检验,均可清晰正确判型,线粒体高变区HVI区测序图清晰,且各检验结果均与对照一致.结论 载有0.5ngDNA的FTA卡扩增产物可用于DNA分型检测,FTA卡对DNA结合较稳定,可用于多项目检测.
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砂纸擦蹭皮肤的DNA提取及检验
目前,DNA检验技术已广泛用于实际办案,日常检案可能遇到不同的检材载体,其内含的抑制物成分是对检验成功的干扰因素,本文针对砂纸上擦蹭的人体生物检材进行检验,并对抑制因素的影响进行了初步探讨.1 样本及检验1.1 样本送检的被鉴定人手臂擦蹭细砂纸1块,约2cm×2cm;志愿者用与上述检材一致的细砂纸擦蹭皮肤1次的检材1块,以有砂面可见皮肤碎屑为纳入标准.
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TE-MAGS磁珠法提取效率定量研究
目的 利用TE-MAGS在TECAN自动化工作站上结合磁珠试剂盒,定量研究微量DNA提取回收效率和纯化能力.方法 0.1~1ng9947A和混有6种常见PCR抑制剂的1ng9947A,经自动化提取后进行荧光定量和STR分型,定量分析回收效率和纯化能力.结果 0.1~1ng9947A提取后实际回收效率在38.92~60.01%之间,0.3ng以上9947A提取扩增后可以得到完整的STR图谱.胆汁酸盐、胶原质、尿素去除效率大于94.5%,血红素、黑色素、腐殖酸去除效率分别为97.5%、97.85%、82.14% .结论 TE-MAGS磁珠法对微量DNA回收效率较高,纯化能力较强,适合微量DNA提取.
关键词： 法医物证学 微量DNA 定量 TE-MAGS磁珠法 自动化DNA提取 -
全基因组扩增在微量检材DNA分型中的应用
目的 探索全基因组扩增技术对微量检材DNA分型的有效性.方法 通过显微操作制备含1～20个细胞的模拟微量检材样本,在常规PCR-STR分型前加入全基因组扩增步骤,从等位基因不平衡、等位基因丢失、基因座丢失、伪等位基因(包含stutter峰)等方面探究PEP和MDA两种全基因组扩增方法对微量检材DNA分型的有效性.结果 MDA扩增效率高于PEP,但等位基因丢失和伪等位基因严重;PEP方法的正确分型率高于MDA,但小片段DNA优势扩增现象较严重.结论 MDA方法并不适合目前以STR分型为主导的法庭科学,当微量检材样本的绝对量相当少时,可以考虑使用PEP方法来扩大样本量,以满足重复检验的要求,但可能面临大片段DNA扩增失败的风险.
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手套印、袜印DNA检验4例
1案例
1.1简要案情
案例1：某年1月30日，某市区单元楼发生盗窃案。在被盗现场墙面上发现一处手套印，采用微湿棉签转移该手套印，成功检出一男性DNA分型，并与嫌疑人比中。 -
放置不同时间果核微量生物物证的提取
近年来,犯罪分子反侦察意识增强,留下的常规生物物证越来越少,DNA检验的主要对象逐渐转变为一些存在形式特殊、类型多样的非常规生物检材,即接触DNA.目前,接触DNA检验是法医DNA检验的难点和热点,其中接触DNA的发现和提取是影响检验成功率的主要因素之一[1].本研究将苹果果核在自然环境下放置不同时间,采用擦拭法收集果核不同部位的微量DNA样本,对各样本的STR分型结果进行分析比较,旨在为基层单位微量生物物证的提取检验提供参考.
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一种改良的亚硫酸氢盐修饰微量DNA的甲基化分析方法
目的 建立一种改良的亚硫酸氢盐修饰微量DNA的甲基化分析方法.方法 应用低熔点琼脂糖包埋不同含量的DNA进行亚硫酸氢盐修饰.通过MGMT基因甲基化与非甲基化特异PCR的扩增,与传统的亚硫酸氢盐修饰法进行分析比较.结果 改良法对于低至15.625ng的DNA修饰均可获得MGMT基因甲基化扩增产物,而传统法对于62.5ng及其以下的DNA修饰难以获得MGMT基因甲基化扩增产物.结论 改良的亚硫酸氢盐修饰方法可有效提高甲基化特异PCR的灵敏度,该方法为微量DNA的甲基化分析提供了一种较理想的研究手段.
关键词： 亚硫酸氢盐修饰 微量DNA 甲基化特异PCR(MSP)
