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PTEN和p33/ING1在食管癌的发生及浸润转移中的作用
PTEN(Phosphate and tensin homology deleted on chromosom eten)是近年发现的一种与细胞信号传导途径有关的具有双特异性磷酸酶活性的新型抑癌基因.生长抑制基因(inhibitor of growth1,ING1)也是新发现的一个押癌基因,p33/ING1是ING1编码的重要抑癌蛋白.p33/ING1的过表达抑制细胞生长,促进细胞凋亡.研究表明,这两基因的突变与人类多种恶性肿瘤的发生发展密切相关.但近年来的研究发现食管癌中PTEN、p33/ING1蛋白的突变较少见,而在食管癌组织中的表达普遍下降,表达程度与食管癌的恶性程度、浸润、转移及预后密切相关.因此,PTEN、p33/ING1的低表达可能参与了食管癌的发生发展、浸润、转移过程.
关键词： PTEN抑癌基因 p33/ING1抑癌基因 食管癌 -
PTEN蛋白在喉鳞癌中表达的研究
PTEN抑癌基因是迄今为止发现的第1个具有磷酸酶活性的抑癌基因,定位于人类染色体10q23,全长200 kb.PTEN蛋白定位于细胞质,具有双特异性磷酸酶活性,在酪氨酸磷酸酶和丝氨酸/苏氨酸磷酸酶介导的信号传递过程中具有重要作用.PTEN基因异常表达与肿瘤的侵袭、转移和生长有关.本研究采用免疫组织化学技术对喉鳞状细胞癌中PTEN蛋白的表达情况进行研究,旨在探讨PTEN蛋白在喉鳞癌的发生、发展中的临床意义.
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抑癌基因PTEN与胃癌关系的研究进展
胃癌是我国常见的多发性的恶性肿瘤之一;PTEN基因是近年发现的新抑癌基因的发生发展有密切的关系.在许多肿瘤中都有PTEN基因表达,目前已经证实其与多种肿瘤异常,且其表达异常与肿瘤发生发展的生物学行为有一定相关性.在胃癌组织中PTEN通过多种途径表达降低.PTEN的突变和蛋白异常表达与胃癌的发生、发展、浸润、转移有显著关系,可能成为检测胃癌的有效指标之一.
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PTEN抑癌基因对人黏液表皮样癌细胞系增殖和细胞周期的影响
目的:探讨外源性PTEN抑癌基因对唾液腺黏液表皮样癌细胞系增殖抑制的机制.方法:将含野生型PTEN抑癌基因cDNA重组反转录病毒表达质粒导入高转移性唾液腺黏液表皮样癌细胞系M3SP2,转染空载体细胞为对照.MTT比色法测定细胞增殖,流式细胞术测定细胞周期,免疫组化染色检测PCNA、EGFR、CDK4、P16INK4a和P57Kip2蛋白表达.采用SPSS11.0软件包进行统计学分析.结果:与对照细胞比较,PTEN基因转染癌细胞M3SP2-PTEN对表皮生长因子(EGF)介导的细胞增殖具有显著的抑制作用,癌细胞阻滞在G0/G1期,PCNA、ECFR、CDK4以及C-mye蛋白表达减弱,而P16INK4a和P57 Kip2蛋白表达增强(P<0.05).结论:外源性PTEN基因具有抑制唾液腺黏液表样癌皮细胞系EGF介导的增殖作用,其作用机制与细胞周期进程受阻以及细胞周期调控分子有关.
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PTEN抑癌基因对高转移性黏液表皮样癌细胞系生物学行为的影响
目的探讨外源野生型PTEN抑癌基因对人高转移性黏液表皮样癌细胞系M3SP2体外黏附、迁移和侵袭特性的影响.方法用脂质体介导方法将PTEN抑癌基因导入M3SP2细胞系(M3SP2-PTEN细胞),转染空载体的细胞系作为对照(M3SP2-pBp细胞),分别用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、细胞迁移试验及细胞侵袭试验测定M3SP2-PTEN细胞和M3SP2-pBp细胞体外黏附、迁移和侵袭能力.结果 M3SP2-PTEN细胞在Metrigel和Fn基质上黏附数量减少,与对照组比较差异有显著性(P＜0.01),黏附抑制率分别为34.3%和49.4%.M3SP2-PTEN细胞在Matrigel基质上迁移距离小,与对照组比较差异有显著性(P＜0.05),迁移抑制率为26.0%.M3SP2-PTEN细胞体外侵袭细胞数量减少,与对照组比较差异有显著性(P＜0.01),侵袭抑制率为31.4%.结论外源性PTEN抑癌基因对高转移性黏液表皮样癌细胞系M3SP2体外黏附、迁移和侵袭具有抑制作用.
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PTEN研究的相关进展
人类第十号染色体缺失与磷酸酶和张力蛋白同源基因(Phosphatase and TENsin homolog deleted on chromosome 10,PTEN或者MMAC1、TEP1)定位于染色体10q23.31,调控编码由403个氨基酸组成的多功能蛋白,该蛋白具有磷脂和蛋白质的双重磷脂酶活性[1-3].自1997年被三个独立的实验小组:一组采用定位克隆的方法,另外一组采用生物学方法发现以来[2-3],是公认为既P53之后又一个被持续关注的抑癌基因,其相关研究在细胞凋亡、细胞周期阻滞、细胞迁移过程中起着关键性作用.已有文献报道关于PTEN缺失和突变与多种恶性肿瘤及遗传性疾病(Cowden病)等常染色体疾病的发生密切相关,本文就PTEN新研究动态做一概述,以便进一步认识其功能和作用.
关键词： PTEN抑癌基因 PI3K/Akt信号通路 -
抑癌基因PTEN与食管癌
PTEN是近年发现的一种与细胞信号传导途径有关的具有双特异性磷酸酶活性的新型抑癌基因.研究表明,该基因的突变与人类多种恶性肿瘤的发生发展密切相关.近年来国内外的学者在食管癌组织中发现,虽然该基因发生突变的频率较低,但其蛋白表达却普遍下降,表达程度与食管癌的恶性程度及预后密切相关.因此,PTEN的低表达可能参与了食管癌的发生发展过程.
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外源性PTEN基因诱导黏液表皮样癌细胞系凋亡的研究
目的:探讨转染外源性PTEN抑癌基因对黏液表皮样癌细胞系M3SP2的诱导凋亡作用.方法:用含野生型PTEN抑癌基因逆转录病毒载体转染高转移性涎腺黏液表皮样癌细胞系M3SP2,转染空载体亲本细胞为对照细胞.体外细胞凋亡采用苏木精-伊红染色、电镜、TUNEL染色和流式细胞仪检测,裸鼠移植瘤细胞凋亡应用苏木精-伊红染色形态学判定.Bcl-2、P53和H-ras蛋白表达用免疫组化染色检测.结果:试验细胞M3SP2-PTEN与对照细胞M3SP2-pBp比较,出现较多的典型的凋亡细胞特征.试验细胞和对照细胞凋亡率分别为7.5%～13.6%和1.2%～2.3%;裸鼠移植瘤M3SP2-PTEN组和M3SP2-pBp组的凋亡指数分别为17.4%和3.5%.免疫组化染色显示M3SP2-PTEN细胞与对照细胞比较,P53蛋白表达增强,Bcl-2和H-ras蛋白表达减弱.结论:外源性PTEN抑癌基因能显著诱导高转移性涎腺黏液表皮样癌细胞凋亡,并且与P53、Bcl-2和H-ras蛋白表达有一定关系.
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PTEN抑癌基因对高转移性粘液表皮样癌细胞辐射敏感性的影响
目的:评价外源PTEN抑癌基因对人高转移性粘液表皮样癌细胞系M3SP2辐射敏感性的影响.方法:用汁质体介导法将PTEN抑癌基因导入M3SP2细胞系,以空载体转染细胞为对照,应用MTT比色实验和克隆形成实验测定两种癌细胞对60Co-γ射线的敏感性.结果:与对照组比较,转染PTEN抑癌基因组的治疗指数为1.68,放射生物学参数SF2减小49.6%,D0减小41.7%,SER为1.72,DMF0.5为1.65.结论:外源野生型PTEN抑癌基因能增强粘液表皮样癌细胞对γ-射线的敏感性.
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PTEN抑癌基因对高转移性粘液表皮样癌细胞药物敏感性的影响
目的评价外源性PTEN抑癌基因对人高转移性粘液表皮样癌细胞系M3SP2药物敏感性的影响.方法用脂质体介导法将PTEN抑癌基因导入M3SP2细胞系,以空载体转染细胞为对照,然后应用MTT比色法测定两种癌细胞对10种常用抗癌药物敏感性.结果与对照细胞比较,PTEN基因转染细胞对6种抗癌药物甲氨喋呤、重组人干扰素-γ、丝裂霉素、多西环素、平阳霉素和氟脲嘧啶的相对抗肿瘤活性呈不同程度地增强,药物增敏比增加了1.5～52.1倍.结论外源性野生型PTEN抑癌基因能增强粘液表皮样癌细胞对常用抗癌药物的敏感性.
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大鼠胰腺癌和非癌胰腺组织中EZH_2和PTEN的表达及其意义
目的 探讨大鼠胰腺癌和非癌胰腺组织中EZH_2和PTEN的表达水平及其在胰腺癌发生中所起的作用.方法 将二甲基苯荓蒽(DMBA)直接置入胰腺实质内制备胰腺癌模型(A,B组),B组成模1周后每周腹腔注射曲古霉素A(TSA)1μg,A,B组3～5个月内处死,对照组(C组)于第5个月处死;肉眼检查和镜下观察胰腺癌发生情况.EnVision~(TM)免疫组化法检测3组EZH_2和PTEN的表达.结果 (1)A组3～5个月癌发生率为48.7%(18/37),17例为胰腺导管腺癌,1例为纤维肉瘤;B组3～5个月癌发生率为33.3%(12/36),11例为胰腺导管腺癌,1例为纤维肉瘤;A组胰腺痛大径均值大于B组(P＜0.05＝;C组胰腺和A,B,2组胰腺外主要脏器均未见明显病理改变.(2)A,B组胰腺导管腺癌EZH_2表达阳性率明显高于相应非癌胰腺组织(P＜0.01＝;A组+B组胰腺导管癌PTEN表达阳性率明显低于A组+B组非癌胰腺组织(P＜0.05＝,但A组和B组胰腺导管癌PTEN表达阳性率与A组或B组非癌胰腺组织间差异无统计学意义(P＞0.05);EZH_2阳性表达和/或PTEN阴性表达的非癌胰腺组织导管上皮均呈轻至重度不典型增生;胰腺导管癌中EZH_2与PTEN表达呈明显不一致性(P=0.045);C组正常胰腺EZH_2表达均阴性而PTEN表达均阳性.2例纤维肉瘤EZH_2和PTEN表达均阴性.结论 较大剂量DMBA置入胰实质内可获得较高胰腺癌发生宰,TSA能抑制胰腺癌的发生和生长;EZH_2基的激活及PTEN基因的失活在大鼠胰腺癌发生中可能起关键作用.
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PTEN和mTOR在食管鳞癌组织中的表达及意义
目的 观察食管鳞癌组织中PTEN与roTOR的表达,探讨其与临床病理特征的关系.方法 应用免疫组化染色检测148例食管鳞癌组织、癌旁组织及其正常食管组织中PTEN和mTOR表达,分析其与常见临床病理特征的关系.结果 PTEN在癌组织中阳性表达率为43.9％,癌旁组织为67.6％,而正常组织为93.2％,食管癌组织中PTEN表达率均低于癌旁组织及正常食管黏膜组织,差异有统计学意义(P＜0.05);mTOR在癌组织中阳性表达率为85.8％,癌旁组织为35.1％,而正常组织为3.4％,食管癌组织中roTOR表达明显高于癌旁组织及正常食管组织,差异有统计学意义(P＜0.05).PTEN的表达与mTOR的表达强度呈负相关(P＜0.05).mTOR表达与性别、年龄、肿瘤长度差异无统计学意义(P＞0.05),而与肿瘤浸润深度、肿瘤分化程度以及有无淋巴结转移上差异无统计学意义(P＜0.05).结论 mTOR信号通路的激活与PIEN的抑制,可能在食管鳞癌的发生发展中起重要的作用,PTEN低表达与mTOR高表达与肿瘤恶性程度有关,两者联合检测可能有助于预后的判断.
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野生型抑癌基因PTEN真核表达载体的鉴定及其在COS-7细胞株表达产物的鉴定
目的:电泳并真核细胞鉴定pcDNA3.0-PTEN真核表达质粒.方法:将含有pcDNA3.0-PTEN真核表达质粒的E coli JM109细胞挑少许于LB液体培养基上,振荡过夜,离心,碱裂解法裂解细菌,参照UNIQ-10柱式质粒抽提试剂盒操作步骤抽提质粒,电泳鉴定,将获得的pcDNA3.0-PTEN真核表达质粒采用脂质体转染法转入COS-7细胞株,传代培养细胞株,West-Blot鉴定PTEN蛋白质的表达.结果:实验得到的pcDNA3.0-PTEN真核表达质粒大小约为6.0kb,质粒浓度为0.080 μg/μl.该质粒目的基因在COS-7细胞株表达产物经West-Blot鉴定证实为目的基因表达产物.结论:pcDNA3.0-PTEN真核表达质粒内含有所需目的基因,该真核表达系统能在真核细胞株COS-7表达所需目的基因产物,可以应用该质粒对PTEN基因缺失或杂合性缺失的肿瘤细胞进行试验性治疗.
