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胆囊组织中的Cajal样间质细胞与胆石形成的关系
Cajal样间质细胞是一种广泛存在于多种平滑肌组织中的特殊间质细胞,在消化系统中被认为是消化道慢波的起搏细胞.该细胞同样分布于胆道系统之中,并与胆道系统运动功能密切相关,其数量在胆石症患者的胆囊组织中明显减少.胆石症是一种常见疾病,在其发病机制中胆道运动功能减弱被认为具有重要意义.本文复习近年关于Cajal样间质细胞与胆石症关系的文献,就Cajal样间质细胞的形态、分类、起源、功能及与胆石症的关系做一综述.
关键词： Cajal样间质细胞 胆石症 胆囊结石 -
豚鼠膀胱Cajal样间质细胞钙震荡特性
目的：探讨正常成年豚鼠膀胱Cajal样间质细胞（Cajal-like interstitial cells）是否有自发周期性钙震荡（calcium oscillation），以期为膀胱兴奋性起搏细胞为Cajal样间质细胞这一学说提供实验依据。方法：运用胶原酶V消化法，获得原代豚鼠膀胱Cajal样间质细胞进行培养，采用激光共聚焦显微镜成像技术，Fluo-4AM负载后的Cajal样间质细胞内钙离子荧光强度的变化采用激光共聚焦显微镜成像技术进行记录，荧光强度的改变代表细胞内钙离子浓度的变化。结果：培养后的Cajal样间质细胞保持其固有特征，可见胞体为梭形且胞体两极有两个细长突起；培养的Cajal样间质细胞有两类不同的钙震荡：一类震幅小而频率不规则，另一类震幅大而频率慢。第二类钙震荡与膀胱逼尿肌细胞的钙震荡显著不同。结论：与消化道起搏细胞Cajal间质细胞（interstitial cells of Cajal，ICCs）自发性钙震荡类似，成年豚鼠膀胱Cajal样间质细胞亦存在自发钙震荡，提示膀胱收缩活动的起搏细胞可能为其中一种类型的膀胱Cajal样间质细胞。
关键词： 钙震荡 Cajal样间质细胞 膀胱 起搏细胞 激光共聚焦显微镜 -
豚鼠胆囊Cajal样间质细胞的体外分离、培养和鉴定
目的：探讨豚鼠胆囊Cajal样间质细胞（ICLC）的原代分离、培养及鉴定方法。方法健康豚鼠5只，4周龄，体质量300～350 g，雌雄不限。禁食12 h，颈椎脱臼处死。在无菌条件下取出胆囊。在解剖显微镜下剖开胆囊，剥去胆囊黏膜和黏膜下层。将肌条剪碎，经消化、离心及过滤后制备胆囊组织单细胞悬液。用含有干细胞因子（SCF）的M199培养液培养。于倒置显微镜下连续观察细胞生长情况，用酪氨酸蛋白激酶受体c-kit特异性抗体免疫荧光染色鉴定细胞类型。结果培养1周，胆囊ICLC保持其固有特征，多突起，核大，细胞有2～3个短突起。4周时，细胞形态清晰，突起为细长。 c-kit抗体免疫荧光染色，异硫氰酸荧光素（FITC）呈阳性，4’，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）复染细胞核呈蓝色荧光。结论酶解法分离豚鼠胆囊ICLC并培养成功，为胆囊ICLC的生物学特性及其与胆道动力障碍性疾病关系的研究奠定了基础。
关键词： 胆囊 Cajal样间质细胞 细胞培养 豚鼠 -
含人干细胞白血病基因慢病毒载体转染Cajal 样间质细胞的效果研究
目的：观察携带增强绿色荧光蛋白（GFP）的含人干细胞白血病（SCL）基因慢病毒载体转染体外培养的豚鼠膀胱 Cajal 样间质细胞（ICC）的效果。方法2014年10月—2015年8月，选取普通级成年健康豚鼠16只。构建含人 SCL 基因的慢病毒载体，并标定病毒滴度；采用随机数字表法选取健康豚鼠4只，采用颈椎脱臼方法将其杀死，体外培养豚鼠膀胱 ICC。设置不同感染复数（MOI）（0.5、1.0、5.0、10.0、50.0、100.0），利用含人 SCL 基因的慢病毒载体转染 ICC，在激光共聚焦显微镜下观察 ICC 生长状态并计算转染效率，确定佳 MOI。采用随机数字表法将 ICC 分为正常对照组、空白质粒对照组与慢病毒转染组，其中正常对照组加入1％磷酸盐缓冲液（PBS），空白质粒对照组加入空慢病毒，慢病毒转染组按佳 MOI 加入含人 SCL 基因的慢病毒载体，计算各组转染效率，确定佳转染时间。采用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测 SCL mRNA 表达情况。上述实验均独立重复4次。结果经测定，病毒滴度为5×108 TU/ ml。倒置显微镜下发现一些特征性梭形细胞，其两侧有显著外凸分枝，细胞核较大，其外形规则，有序地实现细胞贴壁，而其他未贴壁细胞则呈现与 ICC 不一样的形态，胞体多为椭圆形，细胞两极无突起，整体形状扁平。激光共聚焦显微镜下可以发现酪氨酸蛋白激酶生长因子受体（c-kit）受体成功表达，证实培养的细胞是膀胱 ICC。观察各组 ICC 生长状态，当 MOI 为0.5、1.0、5.0、10.0时，细胞生长状态较好，无细胞死亡，当 MOI为50.0、100.0时，可见部分细胞死亡，细胞活性降低；MOI 为1.0、5.0、10.0、50.0、100.0时的转染效率高于 MOI为0.5时（P ＜0.05）；MOI 为5.0、10.0、50.0、100.0时的转染效率高于 MOI 为1.0时（P ＜0.05）；MOI 为10.0、50.0、100.0时的转染效率高于 MOI 为5.0时（P ＜0.05）；MOI 为50.0、100.0时的转染效率高于 MOI 为10.0时（P＜0.05）；综合 ICC 生长状态及转染效率，确定含人 SCL 基因慢病毒载体转染 ICC 的佳 MOI 为10.0。正常对照组、空白质粒对照组 ICC 中无 GFP 表达；慢病毒转染组转染3 d 时 ICC 中 GFP 表达强度高于转染2 d、转染5 d 时，确定含人 SCL 基因慢病毒载体转染 ICC 的佳转染时间为3 d。慢病毒转染组中扩增产物大小与目的片段大小1036 bp 一致，而正常对照组及空白质粒对照组均未见特异性条带表达，表明 SCL 基因成功导入 ICC。结论利用含人 SCL 基因慢病毒载体能高效转染体外培养的 ICC，并成功介导 SCL 基因在 ICC 中的表达，为下一步研究利用 SCL 基因进行体内转染实验奠定基础。
关键词： 转染 干细胞白血病基因 慢病毒载体 Cajal样间质细胞 -
豚鼠膀胱内Cajal样间质细胞的分布情况研究
目的:观察Cajal样间质细胞(ICCs)在成年豚鼠膀胱的分布情况.方法:取5只成年豚鼠膀胱,制作全层冰冻切片,行ICCs特异性标志物c-kit免疫荧光染色,按粘膜层、粘膜下层和肌层进行统计分析.结果:豚鼠膀胱内可见c-kit免疫阳性细胞,胞体呈梭形,两端伸出长的突起,其形态与肠壁肌层Cajal细胞相似.且肌层和粘膜下层多于粘膜层.结论:豚鼠膀胱存在Cajal样间质细胞,并在肌层高表达,可能参与膀胱自主节律性运动的调控,调节逼尿肌的运动,为"神经-Cajal样间质细胞-肌肉"单元的形成提供组织学基础.
关键词： Cajal样间质细胞 C-kit 膀胱 -
AdMax系统构建腺病毒载体介导SCL基因转染Cajal样间质细胞及其表达
目的 构建含有人干细胞白血病(stem cell leukemia,SCL)基因的重组腺病毒载体,并观察其对豚鼠膀胱Cajal样间质细胞的转染及其介导SCL基因的表达.方法 采用PCR方法从含人SCL基因质粒中扩增SCL基因,连接到腺病毒穿梭质粒的多克隆位点上,构建重组穿梭质粒pDC315-EGFP/SCL,在脂质体介导下与腺病毒辅助大质粒pBHGlox(delta)E1,3Cre共转染293细胞,包装产生复制缺陷型重组腺病毒pDC315-SCL经HEK293细胞扩增,纯化后测定病毒滴度.通过观察绿色荧光蛋白的表达评估重组腺病毒对Cajal样间质细胞的转染率,RT-PCR法分析转染Cajal样间质细胞后SCL mRNA的表达.结果 PCR结果和Western blot法检测证实pDC315-SCL重组腺病毒载体构建成功,滴度达到1×1010 PFU/ml,对膀胱Cajal样间质细胞的转染率高达98%,RT-PCR法检测转染Cajal样间质细胞后SCL mRNA有表达.结论 成功构建pDC315-SCL重组腺病毒载体对Cajal样间质细胞有很强的转染能力,可介导SCL基因在Cajal样间质细胞的表达.
关键词： 干细胞白血病基因 腺病毒载体 转染 Cajal样间质细胞 -
远细胞:概念、形态、分布和生理作用
远细胞(telocyte,TC)是近年来新发现并命名的一种间质细胞,因其与Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)形态相似,曾被称为Cajal样间质细胞(interstitial Cajal-like cells,ICLC).TC独特的突起结构被称为远足(telopodes),远足很细且极其长,呈念珠形.现已发现,多种形态学及免疫组化染色可以观察或标记远细胞.TC存在于人体内的多种空腔及实质性器官,如心脏、胃肠道、乳腺肺和支气管等.TC因其分布、存在的位置及独有的结构,目前推测其可能具有机械支持、引导组织形成与修复、参与细胞的再生与更新、免疫监视、神经传递等生理作用.
关键词： 远细胞 cajal间质细胞 Cajal样间质细胞 干细胞 再生 -
糖尿病豚鼠膀胱Cajal样间质细胞形态学变化及意义
目的 观察糖尿病豚鼠膀胱Cajal样间质细胞形态学变化,探讨糖尿病膀胱功能改变原因.方法 用链脲佐菌素单次注射建立豚鼠糖尿病模型,建模成功4周后,行尿动力学检查,采用组织冷冻切片、酪氨酸蛋白激酶受体单克隆抗体间接免疫荧光检测及透射电镜技术观察膀胱中Cajal样间质细胞变化.结果 与对照组相比,糖尿病豚鼠膀胱大逼尿肌压显著降低,大膀胱容量及膀胱顺应性显著明显增高.免疫荧光检测显示逼尿肌中KIT阳性细胞与逼尿肌组织面积百分比均明显小于对照组.电镜下可见Cajal样间质细胞内细胞器变性、减少,胞质广泛溶解,核周间隙增宽,与其他细胞间的缝隙连接显著减少、结构破坏、连接松散.结论 糖尿病豚鼠膀胱Cajal样间质细胞的数量减少和结构破坏可能是造成膀胱功能障碍的重要原因之一.
关键词： 糖尿病 膀胱 Cajal样间质细胞 尿动力学 -
经尿道灌注SCL基因重组慢病毒的DCP豚鼠膀胱Cajal样间质细胞数量、分布及超微结构观察
目的 观察经尿道灌注干细胞白血病(SCL)基因重组慢病毒的糖尿病膀胱病(DCP)豚鼠膀胱Cajal样间质细胞(ICC)的数量、分布及超微结构变化.方法 构建SCL基因重组慢病毒且标定滴度.选择雄性豚鼠70只,单次腹腔注射链尿佐菌素12周后构建DCP豚鼠模型,将成功造模的27只豚鼠随机分为实验组、阳性对照组、空白对照组,每组9只.实验组、阳性对照组、空白对照组豚鼠分别经尿道灌注(转染)SCL基因重组慢病毒、空慢病毒和等量PBS液.分别于转染后7、14、28 d每组各处死3只豚鼠,取膀胱组织,制作切片,激光共聚焦显微镜下观察GFP表达、膀胱ICC数量及分布变化,透射电镜下观察膀胱ICC的超微结构变化.结果 实验组随转染时间延长,ICC数量逐渐增多(P均<0.01),分布越发密集,但绿色荧光逐渐减退;空白组和对照组未见绿色荧光,随转染时间延长,ICC数量逐渐减少(P均<0.05),分布稀疏;转染14、28 d时,实验组ICC数量较空白组和对照组增加(P均<0.01).实验组随转染时间延长,ICC细胞器数量增多,形态趋于正常,细胞内空泡减少,胞周突起延长变多,ICC超微结构处于不断恢复之中;而阳性对照组和空白对照组ICC超微结构病理变化逐渐加重.结论 经尿道灌注SCL基因重组慢病毒转染DCP豚鼠膀胱后,膀胱ICC数量增多,分布更加密集,细胞超微结构得到修复,提示SCL基因对DCP可能有一定治疗效果.
关键词： 干细胞白血病基因 Cajal样间质细胞 糖尿病膀胱病 -
含人干细胞白血病基因的重组慢病毒表达载体的构建及鉴定
目的：构建含人干细胞白血病（SCL）基因的重组慢病毒表达载体（GV287-SCL），为糖尿病膀胱异常病症（ DCP）的基因治疗奠定基础。方法采用PCR法将人SCL基因质粒内的遗传物质扩增，与慢性病毒穿透质粒结合，构建重组穿梭质粒GV287-EGFP／SCL，共转染293T 细胞，通过多次感染、扩增和提纯，得到重组慢病毒GV287-SCL。以不同浓度重组慢病毒原液感染293 T细胞，采用Western blotting法检测目的基因，荧光标记法计算病毒滴度。结果人SCL基因扩增产物大小为1036 bp，与目的基因相关片段中SCL cDNA大小相同。阳性转化子扩展后均形成503 bp条带，其大小与目的片段人SCL cDNA相当。重组质粒GV287-EGFP／SCL阳性克隆的目的基因SCL成功插入到GV287-EGFP，基因排序和GenBank信息库里的人SCL基因mRNA基本相同。重组慢病毒滴度为5×108 TU／mL。结论成功构建了GV287-SCL，病毒滴度为5×108 TU／mL。本研究为继续进行SCL基因体内转染及开展DCP的基因治疗提供了基础。
关键词： 糖尿病膀胱异常病症 干细胞白血病基因 慢病毒载体 转染 Cajal样间质细胞 -
早期糖尿病膀胱尿动力学及cajal样细胞的变化和意义
目的:观察早期糖尿病在膀胱尿动力学和cajal样细胞上的病理学改变,探讨其发生机制及病理演绎过程.方法:建立早期糖尿病豚鼠模型40只(病变组),以正常豚鼠20只作对照(对照组),饲养10周后行膀胱大收缩压、漏尿点压等尿动力学指标测定.然后将两组豚鼠膀胱制作成冷冻切片行免疫荧光染色及激光共聚焦显微镜观察.结果:10周后,与对照组比较,病变组膀胱大容量(P<0.05)、漏尿点压(P<0.01)、顺应性(P<0.05)、剩余尿量(P<0.01)增加,而膀胱静息压(P<0.01)、大逼尿肌压(P<0.05)下降.激光共聚焦显微镜下见糖尿病组膀胱逼尿肌中cajal样细胞数量减少(P<0.01),cajal样细胞二聚体消失(P<0.01).结论:糖尿病膀胱病变豚鼠早期有尿动力学异常,cajal样细胞数量减少并伴有该细胞二聚体结构消失,提示早期糖尿病膀胱病变是高糖环境下发生了具有起博功能的cajal样间质细胞异常,从而使逼尿肌功能障碍及尿动力学发生改变;而真正起逼尿功能的平滑肌细胞失去该细胞起博而处于一种待激发的"休眠状态".因此,临床上应针对这种情况进行干预,以控制病情的进一步恶化.
关键词： 糖尿病膀胱病变 Cajal样间质细胞 激光共聚焦显微镜 尿动力学 -
Cajal样间质细胞与糖尿病膀胱病变关系研究进展
糖尿病膀胱病变是因糖尿病而导致的排尿障碍,一般发病隐匿,症状进展极缓慢,容易被忽视.近人们对它的认识在不断深入,发现膀胱Cajal样间质细胞在膀胱中起非常重要的作用,本文就Cajal样间质细胞在膀胱中主要特点、生理功能和SCF/c-kit信号通路对Cajal样间质细胞的影响,以及膀胱中Cajal样间质细胞异常在糖尿病膀胱病变发病机制的研究进展做一综述.
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双标cajal样间质细胞及一氧化氮合酶-1细胞在人膀胱组织的分布
目的 探讨cajal样间质细胞(ICCs)及一氧化氮合酶-1(NOS-1)神经元细胞在人膀胱组织中的分布规律及意义.方法 人膀胱全层组织冰冻切片,CD117免疫荧光结合NOS-1免疫荧光双重标记染色.结果 激光共聚焦显微镜下观察CD117表达阳性的ICCs及NOS-1阳性神经元细胞广泛分布于人膀胱组织内,发现ICCs可表达NOS-1,总体上双重染色未发现两种细胞有明显的共表达,但可见NOS-1表达阳性神经元细胞的附近存在较多ICCs.结论 人膀胱中的ICCs可能是膀胱自主节律性运动的起搏细胞,NOS-1阳性神经元细胞可能以ICCs作为靶点共同参与对膀胱舒缩活动的综控.
关键词： Cajal样间质细胞 膀胱 一氧化氮合酶-1 分布 -
c-Kit和n-NOS2双重染色在豚鼠膀胱Cajal样间质细胞的表达
目的 研究c-Kit与n-NOS2在豚鼠膀胱caial样间质细胞的共表达情况.方法 采用培养成年豚鼠膀胱Cajal样间质细胞,c-Kit免疫荧光和n-NOS2免疫荧光双重染色.结果 豚鼠膀胱内Cajal样间质细胞体为梭形或卵圆形,常见2～3个细长的突起.c-Kit和n-NOS2免疫荧光双重染色发现两种抗体在Cajal样间质细胞共表达.结论 本研究结果提示在豚鼠膀胱Cajal样间质细胞内c-Kit和n-NOS2共存,Cajal样间质细胞具备产生NO的功能,Cajal样间质细胞存在调节膀胱自律活动的结构基础.
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人干细胞白血病基因重组慢病毒载体的构建及其在Cajal样间质细胞中的表达
目的 构建含人干细胞白血病(SCL)基因的重组慢病毒载体,并转染体外培养的Cajal样间质细胞(ICC),为进一步利用慢病毒表达载体行体内实验奠定基础.方法 通过聚合酶链反应(PCR)将人SCL基质粒内的遗传物质扩增,与慢病毒载体质粒GV287-EGFP结合,构建重组质粒GV287-EGFP/SCL,通过Western blot检测及基因测序对阳性克隆进行鉴定,并测定病毒滴度.体外分离、培养及鉴定ICC,重组慢病毒载体以感染复数(MOI)值为0.5、1.0、5.0、10.0、50.0和100.0时,分别转染ICC,通过激光共聚焦显微镜观察,计算不同MOI值的转染效果,确定佳MOI值.重组慢病毒载体以佳MOI值感染ICC作为实验组,以空载体转染的ICC(空载体组)及未转染的ICC(空白组)作为对照,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测SCL基因在ICC中的表达.结果 经Western blot检测及基因测序鉴定SCL重组慢病毒表达载体构建成功,并成功转染ICC,激光共聚焦显微镜下可观察到强绿色荧光.MOI为10时转染效果佳,转染效率>85%;RT-PCR结果表明,实验组SCL基因的表达量高于空载体组和空白组.结论 成功制备人SCL基因重组慢病毒载体,并能高效转染ICC,介导SCL基因在ICC中表达.
关键词： 干细胞白血病基因 慢病毒载体 转染 Cajal样间质细胞 -
Cajal样间质细胞在豚鼠膀胱肌层的分布及意义
目的 研究豚鼠膀胱Cajal样间质细胞的分布、超微结构特点并探讨其功能.方法 选择健康豚鼠10只,利用激光共聚焦显微镜和透射电镜观察膀胱Cajal样间质细胞在肌层的分布和结构特点.结果 豚鼠膀胱肌层Cajal样间质细胞形成网状和平行状两种不同的分布.超微结构核大、具有丰富的细胞器.结论 膀胱Cajal样间质细胞分布和超微结构与胃肠道的ICCs相似,具有起搏细胞特征.
关键词： Cajal样间质细胞 豚鼠 膀胱 -
豚鼠膀胱组织内Cajal样间质细胞及NOS表达阳性神经元的分布
目的 探讨Cajal样间质细胞和一氧化氮合酶2(NOS2)表达阳性神经元在成年豚鼠膀胱组织内的分布.方法 成年豚鼠膀胱冰冻切片,c-Kit免疫荧光和n-NOS2免疫荧光染色.结果 膀胱肌层内可见c-Kit表达阳性细胞的存在,n-NOS2免疫荧光染色显示其阳性神经元广泛分布于膀胱组织内.c-Kit免疫荧光和n-NOS2免疫荧光双重染色虽未发现两者的共存,但可见c-Kit表达阳性细胞存在于NOS表达阳性神经元的附近.结论 豚鼠膀胱的Cajal样间质细胞可能参与膀胱自主节律性运动的调控,提示二者可能共同参与膀胱自主节律性运动的调控,为"神经-Cajal样间质细胞-肌肉"作用单元的形成提供结构基础.
关键词： Cajal样间质细胞 一氧化氮合酶 C-kit 膀胱 -
豚鼠膀胱Cajal样间质细胞的分离、培养及其鉴定
目的 探索豚鼠膀胱Cajal样问质细胞的原代培养方法.方法 颈部脱臼法处死豚鼠,无菌条件下分离出膀胱肌组织制备成肌条.采用V型胶原酶酶解法分离细胞,将细胞悬液接种于含干细胞因子的细胞培养基中培养,隔日换液.用酪氨酸蛋白激酶受体特异性抗体标记细胞,证实细胞类型.结果 培养后的Cajal样间质细胞保持其固有特征,可见胞体为梭形且胞体两极有两个细长突起,该类细胞酪氨酸蛋白激酶受体抗体荧光染色阳性证实细胞培养成功.结论 用V型胶原酶消化法可获得成年豚鼠膀胱Cajal样问质细胞,并在体外条件下生长,可用于Cajal样间质细胞的电生理学研究.
关键词： 干细胞因子 V型胶原酶 酪氨酸蛋白激酶受体 Cajal样间质细胞 -
豚鼠膀胱Cajal样间质细胞肌层分布及相关功能分析
目的:研究豚鼠膀胱Cajal样间质细胞分布、超微结构特点并探讨其功能.方法:选择健康豚鼠10只,利用激光共聚焦显微镜和透射电镜观察膀胱Cajal样间质细胞在肌层的分布和结构特点.结果:豚鼠膀胱肌层Cajal样间质细胞形成网状和平行状两种不同的分布. 超微结构核大、具有丰富的细胞器.结论:膀胱Cajal样间质细胞分布和超微结构与胃肠道的ICCs相似,具有起搏细胞特征.
关键词： Cajal样间质细胞 豚鼠 膀胱 -
胆道Cajal样间质细胞的研究进展
Cajal间质细胞是位于胃肠道肌群的一种特殊间质细胞,其与平滑肌细胞,神经元细胞有密切联系,参与胃肠道的蠕动和神经信号传导,是胃肠道慢波的起搏细胞.存在于胆道、尿道、膀胱等胃肠道外器官的Cajal间质细胞被命名为Caal样间质细胞(ICLC),笔者就ICLC在胆道系统的形态、鉴别、分类、功能、分布及其与胆道系统疾病的关系等方面作一综述.
关键词： Cajal样间质细胞 胆道 胆道疾病
