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SIAH1可通过上调Bim表达诱导乳腺癌细胞失巢凋亡
目的 研究SIAH1对乳腺癌细胞失巢凋亡的影响及其相关机制.方法 采用脂质体介导法将SIAH1表达质粒pcDNA3-myc-SIAH1、对照质粒pcDNA3-myc、Bim干扰片段BimsiRNA和对照片段control siRNA转染入乳腺癌细胞系MCF-7,利用Western blot法检测SIAH1和Bim的表达,并应用Annexin V-FITC/PI试剂盒及流式细胞仪技术分析各组细胞在悬浮和贴壁生长状态下细胞的凋亡情况.结果 与未处理组及转染对照质粒组相比,转染SIAH1表达质粒后,SIAH1(P＜0.05)和Bim(P＜0.05)表达均明显上调,且失巢凋亡率明显增加,分别为7.36％、8.02％及38.4％.另外,与单独转染SIAH1表达质粒pcDNA3-myc-SIAH1相比,共转染pcDNA3-myc-SIAH1与Bim siRNA后,Bim表达显著降低(P＜0.05),同时细胞失巢凋亡率明显降低(P＜0.05),分别为36.8％与8.16％.结论 过表达SIAH1可通过上调Bim表达来诱导乳腺癌细胞失巢凋亡.
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PEG10基因与Wnt/β-catenin信号通路在肝癌发病机制中的相互关系
遗传印记基因10(PEG10)在绝大多数肝癌中特异性高表达,PEG10和SIAH1基因在肝癌细胞中相互作用,过表达的PEG10可抑制SIAH1介导的细胞凋亡,同时SIAH1可显著抑制PEG10的表达,失平衡的二者可能通过抑制细胞凋亡参与肝癌形成.Wnt/β-catenin信号通路的异常激活在肝癌形成中起重要作用;而SIAH1降解该通路的关键因子β-连环素(β-catenin),诱导肝癌的细胞凋亡和生长停滞,在抑制肝癌形成中起重要作用.PEG10和β-catenin均与SIAH1密切联系,PEG10的致癌作用很可能部分归因于Wnt/β-catenin信号通路.
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Siah1对大鼠低氧性肺动脉高压发病的调控机制
目的 探讨Siah1对大鼠低氧性肺动脉高压(HPH)发病的调控机制.方法 40只成年雄性Wistar大鼠按随机数字表法随机分为对照组和低氧3、7、14、21 d组,每组8只,常压间断低氧复制HPH大鼠模型,对照组大鼠常氧下饲养.测各组大鼠平均肺动脉压(mPAP)、右室肥厚指数(RVHI)、管壁面积与血管总面积比值(WA％)、管腔面积与血管总面积比值(LA％);原位杂交检测肺内低氧诱导因子1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF) mRNA相对表达量,免疫组化检测其蛋白质相对表达量;原位杂交、逆转录-PCR检测肺内低氧诱导因子抑制因子(FIH)、Siah1 mRNA相对表达量,免疫组化、Western印迹法检测其蛋白质相对表达量.结果 低氧7d组mPAP、WA％、LA％显著高于对照组[(21.3±1.6) mmHg比(15.9 ±1.3)mmHg(1 mmHg =0.133 kPa)、(41.4±2.8)％比(35.0±2.2)％、(58.6±2.8)％比(65.0±2.2)％,均P＜0.05],低氧14 d组达高水平并维持.低氧14d组RVHI显著高于对照组[(27.0±1.8)％比(23.2±2.1)％,P＜0.05].低氧14 d组HIF-1αmRNA相对表达量显著高于对照组[(0.188 ±0.014)比(0.150 ±0.014),P＜0.05];低氧3d组HIF-1α蛋白相对表达量显著高于对照组(0.186±0.014比0.067±0.008,P＜0.05).低氧7d组VEGFmRNA、蛋白相对表达量显著高于对照组(0.152±0.019比0.057±0.007、0.176±0.017比0.083±0.010,均P＜0.05).FIH mRNA表达在低氧后无显著变化,低氧7d组FIH蛋白相对表达量显著低于对照组(0.166 ±0.015比0.200 ±0.017,P＜0.05).低氧7d组Siah1 mRNA、蛋白表达均显著高于对照组(0.144 ±0.014比0.067 ±0.010、0.136±0.017比0.084±0.019,均P＜0.05).HIF-1α蛋白与VEGF mRNA、VEGF蛋白表达均呈正相关(r=0.545、0.523,均P＜0.01);FIH蛋白与VEGFmRNA、VEGF蛋白表达均呈负相关(r=-0.785、-0.788,均P＜0.01);Siah1 mRNA与Siah1蛋白表达呈正相关(r =0.823,P＜0.01);Siah1蛋白与FIH蛋白表达呈负相关(r=-0.671,P＜0.01).结论 慢性低氧诱导肺小动脉壁Siah1表达增加,进而可能降低FIH蛋白水平,减弱FIH对HIF-1α转录活性的抑制,导致VEGF等HIF-1 α靶基因转录激活,从而参与HPH发生发展.
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低氧性肺动脉高压患者肺小动脉壁Siah1表达情况及其临床意义
目的：探讨低氧性肺动脉高压（ HPH）患者肺小动脉壁Siah1表达情况及其临床意义。方法收集湖南省肿瘤医院胸外科2008-04-01至2009-03-31行肺叶切除术的肺鳞癌患者36例，将除肺鳞癌外无其他肺部疾病患者12例纳入对照组，COPD非肺动脉高压患者12例纳入COPD组，COPD并HPH患者12例纳入PH组。收集患者肺组织，观察其肺血管重塑指标〔肺小动脉管壁厚度/血管外径（ WT%）、肺小动脉管壁面积/管总面积（ WA%）、肺小动脉管腔面积/管总面积（ LA%）〕，采用原位杂交法与免疫组织化学法检测肺小动脉壁Siah1 mRNA及其蛋白表达情况。结果光镜下可见对照组患者肺小动脉管壁薄，管腔大；COPD组患者肺小动脉管壁出现增厚，管腔狭窄；PH组患者肺小动脉管壁厚度进一步增加，管腔明显变窄。COPD组患者WA%、WT%高于对照组，LA%低于对照组（ P<0.05）；PH组患者WA%、WT%高于COPD组，LA%低于COPD组（P<0.05）。原位杂交结果显示，对照组患者肺小动脉壁Siah1 mRNA呈低表达，COPD组、PH组患者肺小动脉壁Siah1 mRNA表达逐渐增高。免疫组织化学结果显示，对照组患者肺小动脉壁Siah1蛋白呈低表达，COPD组、PH组患者肺小动脉壁Siah1蛋白表达逐渐增高。PH组患者肺小动脉壁Siah1 mRNA相对表达量及其蛋白水平高于COPD组，COPD组高于对照组（ P<0.05）。直线相关分析结果显示，Siah1蛋白水平与Siah1 mRNA相对表达量呈正相关（ r =0.873，P <0.01）；Siah1 mRNA 相对表达量与 WA%、WT%、肺动脉收缩压（PASP）均呈正相关（r 值分别为0.797、0.845、0.728，P <0.01），Siah1蛋白水平亦与WA%、WT%、PASP呈正相关（r值分别为0.791、0.791、0.704，P<0.01）。结论 HPH患者肺小动脉壁Siah1呈高表达，且肺小动脉壁Siah1表达与低氧性肺血管重塑及PASP有关，可能机制为慢性肺泡性低氧上调患者肺小动脉壁Siah1表达，进而参与HPH的发病。
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低氧性肺动脉高压大鼠肺小动脉Siah1的表达变化及意义
目的:探讨低氧性肺动脉高压(HPH)大鼠肺小动脉Siah 1的动态表达变化及作用.方法:40只成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组和低氧3 d、7d、14d、21 d组,每组8只,常压间断低氧复制HPH大鼠模型.测各组大鼠平均肺动脉压(mPAP)、右心室肥大指数(RVHI)、血管形态学指标;原位杂交、RT-PCR检测肺内Siah1 mRNA表达,免疫组化、Western blot检测其蛋白质水平.结果:①低氧7d后,肺小动脉出现血管重塑,且mPAP明显上升;低氧14d后,肺小动脉重塑更明显,mPAP达高峰.RVHI在低氧14d后明显增加.②Siah1 mRNA在对照组肺小动脉壁呈弱阳性表达,低氧7d后显著增高,低氧14d后达高峰.低氧21d后下降但仍高于对照组.免疫组化显示,Siahl蛋白在对照组肺小动脉壁呈弱阳性表达,低氧7d后显著增高,低氧14d后达高峰,低氧21 d后下降但仍高于对照组.③大鼠肺小动脉壁Siah1蛋白与Siah1 mRNA呈正相关;Siah1 mRNA、Siah1蛋白与mPAP、重塑指数、RVHI均呈正相关.结论:慢性低氧诱导肺小动脉壁Siah1表达增加,进而在HPH发病过程中发挥一定的作用.
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过表达SIAH1通过上调Hrk表达诱导乳腺癌细胞凋亡
目的:研究SIAH1与Hrk在乳腺癌中的表达情况,分析二者表达与乳腺癌临床病理特征的关系及二者的相关性,并探讨SIAH1与Hrk对乳腺癌细胞凋亡的影响.方法:采用免疫组织化学SP法检测86例乳腺浸润性导管癌和32例乳腺癌旁正常组织中SIAH1与Hrk蛋白的表达.采用Western blot和RT-PCR方法检测乳腺正常上皮细胞系MCF-10A与乳腺细胞癌系MCF-7中SIAH1与Hrk的表达情况.在乳腺癌细胞系MCF-7中,采用脂质体介导法单独转染SIAH1表达质粒pcDNA3-myc-SIAH1或共转染pcDNA3-myc-SIAH1与Hrk siRNA后,利用Annexin V-FITC/PI试剂盒和流式细胞仪检测乳腺癌细胞的凋亡情况.结果:SIAH1与Hrk在乳腺浸润性导管癌中表达低于癌旁正常组织,二者表达均与乳腺癌高病理分级(χ2=8.403、8.514,P＜0.01)、低临床分期(χ2=6.731、6.729,P＜0.05)显著相关,且二者表达呈正相关(r=0.515,P＜0.01).过表达SIAH1后, SIAH1与Hrk的mRNA和蛋白表达量均上调(P＜0.05),乳腺癌细胞凋亡数目明显增加(29.02%±3.31%,P＜0.05).共转染pcDNA3-myc-SIAH1与Hrk siRNA后(4.40%±0.61%),与单独转染pcDNA3-myc-SIAH1(29.02%± 3.31%)相比,乳腺癌细胞凋亡率明显下降(F=187.369,P＜0.05).结论:过表达SIAH1可通过上调Hrk表达诱导乳腺癌细胞凋亡.
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SIAH1在乳腺癌中上调Bim的表达诱导乳腺癌细胞凋亡研究
目的 探讨SIAH1在乳腺癌中的表达及对乳腺癌细胞凋亡的影响.方法 采用逆转录PCR和免疫印迹试验法检测30例乳腺组织与乳腺癌细胞中SIAH1的表达情况.采用脂质体介导法将SIAH1表达质粒pcDNA3-myc-SIAH1、对照质粒pcDNA3-myc、SIAH1干扰片段SIAH1 siRNAl、对照片段control siRNA1、Bim siRNA1及对照片段control siRNA2转染入乳腺癌细胞系MDA-MB-231后,利用逆转录PCR和免疫印迹试验法检测SIAH1基因在mRNA和蛋白水平的表达情况及对Bim表达的影响,并应用流式细胞仪技术分析检测SIAH1对MDA-MB-231细胞凋亡的影响.结果SIAH1在乳腺癌组织和细胞中低表达.与乳腺癌细胞系MDAMB-231转染对照质粒组相比,转染pcDNA3-myc-SIAH1后,Bim表达上调,细胞凋亡率增加;干扰SIAH1表达后,Bim表达下调.与乳腺癌细胞系MDA-MB-231转染pcDNA3-myc-SIAH1相比,共转染pcDNA3-myc-SIAH1和Bim siRNAl后,凋亡率明显减少.结论过表达SIAH1可通过上调Bim表达来诱导乳腺癌细胞凋亡.
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SIAH1蛋白表达与乳腺癌新辅助化疗疗效和临床特征的相关性研究
目的:探讨SIAH1蛋白表达与乳腺癌新辅助化疗疗效和临床特征的关系.方法:采用免疫组织化学S-P法检测123例乳腺癌患者的活检石蜡包埋组织中SIAH1蛋白的表达情况,其中56例患者接受术前新辅助化疗,分析SIAH1蛋白的表达情况与新辅助化疗疗效和临床特征的关系.结果:SIAH1蛋白的表达情况与新辅助化疗疗效以及部分临床特征相关,SIAH1蛋白高表达者的新辅助化疗有效率高于低表达者(P＜0.05),SIAH1蛋白表达与组织学分级和临床分期相关(P＜0.05).结论:乳腺癌患者的SIAH1蛋白表达状况可能成为预测新辅助化疗的敏感性指标,同时可能成为乳腺癌的预后指标.
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小鼠β细胞系MIN6细胞糖脂毒性模型中Siah1表达变化的研究
目的： Siah1作为一种E3泛素连接酶，在调控细胞凋亡过程中发挥着重要作用，文章旨在在细胞系水平构建胰岛β细胞糖脂毒性模型，检测其中Siah1的表达水平，并预测此模型下Siah1表达的调控机制。方法用高糖高脂联合处理小鼠胰岛β细胞系MIN6细胞，葡萄糖刺激的胰岛素分泌（ glucose stimula－ted insulin secretion， GSIS）实验检测MIN6细胞胰岛素分泌功能，酸乙醇抽提并检测MIN6细胞内胰岛素含量， Western印迹实验检测Parp1蛋白的剪切情况及Siah1的蛋白表达水平，定量RT－PCR分析Siah1的mR－NA水平。借助miRanda软件预测小鼠、大鼠、人这3个种属中可能调控Siah1表达的microRNAs （ miR－NAs），并在种属间进行对比分析。结果高糖高脂处理可损伤MIN6细胞的GSIS功能、减少MIN6细胞胰岛素含量，并能导致Parp1蛋白的剪切程度显著增加。该模型下， Siah1的蛋白表达水平增高，而mRNA水平几乎没有变化，这提示此过程中Siah1主要受转录后水平的调控。用miRanda软件预测可能调控Siah1表达的miRNAs，其中有19个miRNAs的结合位点在小鼠、大鼠及人这3个种属中具有同源性。结论糖脂毒性可导致MIN6细胞功能障碍及凋亡，并能增高MIN6细胞中Siah1的蛋白表达水平，而不影响Siah1的mRNA水平。
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5-氮杂-2'-脱氧胞苷对HepG2肝癌细胞生物学行为的影响
目的 研究5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人肝癌细胞株HepG2生物学行为的影响及其机制.方法 用浓度为50 μmol/L的5-Aza-CdR处理HepG2细胞72 h后,流式细胞仪分析HepG2细胞周期的分布和凋亡的情况;transwell实验检测细胞侵袭能力;RT-PCR检测肝癌中失活的抑癌基因SIAH1 mRNA表达量的变化.并与未经任何药物处理的正常HepG2细胞相比.结果 与正常HepG2细胞相比,5-Aza-CdR处理后的HepG2细胞周期阻滞于S期(P＜0.05),细胞早期凋亡率增加(P＜0.05),且细胞体外侵袭力减弱(P＜0.05),SIAH1基因的表达水平明显上调(P＜0.05).结论 5-Aza-CdR可能通过上调SIAH1的表达,调控细胞周期并诱导细胞凋亡,同时抑制HepG2细胞体外侵袭能力.
关键词： 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 肝癌 细胞周期 凋亡 SIAH1 -
SIAH1蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义
目的:研究SIAH1在乳腺癌癌变过程中的表达及其与临床病理特征的关系.方法:采用免疫组织化学S-P法检测167例乳腺石蜡包埋组织中SIAH1蛋白的表达情况,Western blot检测30例乳腺浸润性导管癌及癌旁乳腺组织中SIAH1的表达情况.结果:免疫组化结果显示在乳腺癌癌变过程中SIAH1蛋白表达阳性率呈递减趋势,在乳腺浸润性导管癌中SIAH1蛋白与患者年龄、肿瘤大小、淋巴结转移无相关性,但与组织学分级和临床分期相关(P=0.026,P=0.017).Western blot结果显示在乳腺浸润性导管癌与癌旁乳腺组织中SIAH1蛋白表达差异有统计学意义(P＜ 0.05).结论:SIAH1蛋白在乳腺癌癌变过程中发挥重要的作用.
