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颅内注射淀粉样β蛋白片段1-42和thiorphan对恒河猴脑内淀粉样β蛋白表达的影响
目的 探讨颅内注射淀粉样β蛋白片段1-42 (Aβ1-42)和thiorphan对恒河猴脑内Aβ表达的影响.方法 将恒河猴随机分为模型组(n=3)和正常对照组(n=1),模型组开颅后于大脑皮质和基底神经节先注射thiorphan以消耗已存在的脑啡肽酶,然后缓慢注射纤丝状Aβ1-42,再植入含有thiorphan的微渗透泵到基底神经节,持续28 d;正常对照组仅注射生理盐水.至50 d时处死恒河猴,开颅取大脑,免疫组织化学法观察海马、基底神经节和大脑皮质等部位Aβ1-42的表达.结果 正常对照组恒河猴海马、基底神经节和大脑皮质Aβ1-42免疫反应阳性,30个高倍视野(×400)的积分吸光度(IA)分别为0.22±0.06,0.20±0.04和0.19±0.07.模型组3只恒河猴海马、基底神经节和大脑皮质Aβ1-42免疫反应均明显增强,海马IA分别为0.57±0.05,0.60±0.05和0.61±0.05;基底神经节IA分别为0.62±0.06,0.63±0.05和0.65±0.05;大脑皮质IA分别为0.67±0.06,0.68±0.05和0.65±0.07.结论 颅内联合注射Aβ1-42和thiorphan可增加脑内Aβ1-42的表达.
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LC-MS/MS测定人血清消旋卡多曲活性代谢物及其应用
目的 建立人血清中消旋卡多曲活性代谢物(±)N-(1-氧-2-巯甲基-3-苯丙基)甘氨酸(thiorphan)浓度的LCMS/MS测定方法,研究其在健康人体内的药动学行为,评价2种制剂的生物等效性.方法 血清样品管采集前加入适量L-半胱氨酸,甲醇沉淀,LC-MS/MS内标法分析,检测离子为m/z 251.96→217.97(消旋卡多曲活性代谢产物thiorphan减氢离子)、m/z 404.1→114.0(内标赖诺普利减氢离子).20名健康志愿者交叉口服试验制剂消旋卡多曲颗粒剂210mg和参比制剂消旋卡多曲片剂200mg,血药浓度-时间数据经DAS2.0统计软件处理,计算主要药动学参数,并对2种制剂进行等效性评价.结果 Thiorphan的线性范围为9.375～600μg·L-1,消旋卡多曲颗粒剂与片剂的主要药动学参数分别为:t1/2(6.14±2.55)和(6.56±2.43)h, ρmax(519.8±202.0)和(519.2±181.2)μg·L-1, tmax(1.35±0.92)和(1.60±1.14)h、 AUC0-24h (2113.7±878.8)和(2199.0±989.6)μg·h·L-1.结论 所用测定方法简便、准确、专属性高,统计学分析结果显示,2种制剂具有生物等效性.
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恒河猴大脑注射Aβ1-42和Thiorphan的病理学观察
目的:前人的研究证实大脑内存在降解Aβ关键酶neprilysin(NEP),注射NEP的抑制剂 thiorphan能够在啮齿类诱发神经元淀粉样蛋白水平升高.但是没有注射thiorphan后对啮齿类大脑病理学观察的报道,更加没有恒河猴身上这方面的实验数据.本课题组拟用该法建立AD模型,就建立AD模型而言需要获得病理学方面的数据,因此,本实验观察Aβ1-42和 thiorphan 对恒河猴大脑皮质,基底核等部位的毒性影响,为注射 thiorphan 和Aβ建立恒河猴AD模型提供数据准备.方法:开颅后先注射 thiorphan 到猕猴的大脑皮质和基底核消耗已存在的Neprilysin,然后再缓慢的注射孵育好的纤丝状Aβ1-42,后植入含有 thiorphan 的微渗透泵到基底核.HE染色法观察大脑上述部位的形态学改变.结果:实验组以注射位点为中心呈阶梯状,越靠近注射位点神经元的消失就越严重.局部液化坏死,呈筛孔状改变,神经元丢失.可见萎缩神经细胞,大量小胶质细胞增生,噬神经元现象显著.结论:Aβ1-42和 Thiorphan 联合颅内给药后引起神经元丢失及小胶质细胞增生.
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恒河猴大脑注射Aβ1-42和Thiorphan诱发脑内广泛炎症反应
目的:观察颅内给Aβ1-42和thiorphan后是否可以在恒河猴大脑内诱发类似AD患者的炎症反应,探讨该法建立猕猴AD模型的可行性.方法:开颅后先注射thiorphan到猕猴的大脑皮质和基底核消耗已存在的Neprilysin,然后再缓慢的注射孵育好的纤丝状Aβ1-42,后植入含有thiorphan的微渗透泵到基底核.HE染色及免疫组化观察大脑的炎症反应情况.结果:HE染色显示侧脑室室管膜的单层上皮结构消失,大量小胶质细胞浸润,形成多细胞层,小胶质细胞增生聚集成灶.免疫组化结果显示实验组恒河猴海马、基底核及皮质等部位出现星形胶质细胞增生.结论:Aβ1-42和thiorphan联合颅内给药后可以在恒河猴大脑内诱发广泛的炎症反应.
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淀粉样β蛋白_(1-42)和thiorphan对恒河猴海马结构的影响
目的 观察淀粉样β蛋白_(1-42)(Aβ_(1-42))和thiorphan对恒河猴大脑海马神经元淀粉样蛋白、乙酰胆碱转移酶(ChAT)以及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响,为注射thiorphan和Aβ_(1-42)建立恒河猴AD模型提供数据准备.方法 开颅后先注射thiorphan到猕猴的大脑皮质和基底核,消耗已存在的Neprilysin,然后再缓慢的注射孵育好的纤丝状Aβ_(1-42),后植入含有thiorphan的微渗透泵到基底核.HE染色观察海马结构病理改变.免疫组化的方法 检测猴子海马Aβ_(1-42)、乙酰胆碱转移酶(ChAT)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞的表达.结果 HE染色显示海马CA1、CA2等区神经元萎缩,海马齿状回局部颗粒细胞丢失被胶质细胞取代;免疫组化结果 显示模型组海马各区Aβ_(1-42)、ChAT、GFAP阳性细胞吸光度(OD值)分别为0.59±0.05、0.21±0.04、0.19±0.04,与对照组比较P<0.01,差异具有统计学意义.结论 Aβ_(1-42)和thiorphan联合颅内给药导致恒河猴海马产生类似AD患者的病理改变.
